Nova Patents
PL208064B1

Aggregate-free urate oxidase for preparation of non-immunogenic polymer conjugates

Abstract

A naturally occurring or recombinant protein, especially a mutein of porcine urate oxidase (uricase), that is essentially free of large aggregates can be rendered substantially non-immunogenic by conjugation with a sufficiently small number of strands of polymer such that the bioactivity of the protein is essentially retained in the conjugate. Such conjugates are unusually well suited for treatment of chronic conditions because they are less likely to induce the formation of antibodies and/or accelerated clearance than are similar conjugates prepared from protein preparations containing traces of large aggregates.

PL208064B1, drawing sheet 1
Sheet 1 of 6

Term

Term ended

Expired 7 February 2021, 5.6 years ago.

  1. Priority
  2. Filed
  3. Granted
  4. Expired
  5. Today

38 claims: 3 independent, 35 dependent

  1. 1
    Koniugat urykazy, znamienny tym, że zawiera oczyszczoną oksydazę moczanową (urykazę) skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu), przy czym urykaza zawiera tetrameryczne i oktameryczne formy urykazy i nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery.
  2. 2
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą ssaczą.
  3. 3
    Koniugat urykazy według zastrz. 2, znamienny tym, że urykaza jest urykazą z wątroby świni, wątroby bydlęcej lub wątroby owczej.
  4. 4
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą rekombinowaną.
  5. 5
    Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby świni, wątroby bydlęcej, wątroby pawiana lub wątroby owczej.
  6. 6
    Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza jest urykazą chimeryczną.
  7. 7
    Koniugat urykazy według zastrz. 6, znamienny tym, że urykaza zawiera części urykazy z wątroby świni i urykazy z wątroby pawiana.
  8. 8
    Koniugat urykazy według zastrz. 7, znamienny tym, że urykaza jest urykazą PKS.
  9. 9
    Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza ma zasadniczo sekwencję urykazy z wątroby pawiana, w której reszta tyrozyny 97 została zastąpiona histydyną.
  10. 10
    Koniugat urykazy według zastrz. 4, znamienny tym, że urykaza zawiera koniec aminowy i koniec karboksylowy i jest obcięta na jednym z końców lub na obu końcach.
  11. 11
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą grzybową lub bakteryjną.
  12. 12
    Koniugat urykazy według zastrz. 11, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z Aspergillus flavus, Arthrobacter globiformis, Bacillus sp. lub Candida utilis, lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz.
  13. 13
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykaza z bezkręgowca.
  14. 14
    Koniugat urykazy według zastrz. 13, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z Drosophila melanogaster lub Drosophila pseudoobscura, lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję jednej z wymienionych urykaz.
  15. 15
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest urykazą roślinną.
  16. 16
    Koniugat urykazy według zastrz. 15, znamienny tym, że urykaza jest wyizolowana z brodawek korzeniowych Glycine max lub stanowi enzym rekombinowany mający zasadniczo sekwencję tej urykazy.
  17. 17
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) stanowi monometoksy poli(glikol etylenowy).
  18. 18
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że urykaza jest skoniugowaną z poli(glikolem etylenowym) lub poli(tlenkiem etylenu) poprzez wiązanie wybrane z grupy składającej się z wiązania uretanowego (karbaminian), drugorzędowego aminowego i amidowego.
  19. 19
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 5000 a 30000.
  20. 20
    Koniugat urykazy według zastrz. 19, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) ma ciężar cząsteczkowy między 10000 a 20000.
  21. 21
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 2 i 12 na podjednostkę urykazy.
  22. 22
    Koniugat urykazy według zastrz. 21, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 6 i 10 na podjednostkę urykazy.
  23. 23
    Koniugat urykazy według zastrz. 22, znamienny tym, że średnia liczba łańcuchów poli(glikolu etylenowego) lub poli(tlenku etylenu) jest zawarta między 7 i 9 na podjednostkę urykazy.
  24. 24
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest liniowy.
  25. 25
    Koniugat urykazy według zastrz. 1, znamienny tym, że poli(glikol etylenowy) lub poli(tlenek etylenu) jest rozgałęziony.
  26. 26
    Kompozycja farmaceutyczna do obniżania poziomów kwasu moczowego w płynach ustrojowych lub tkankach, znamienna tym, że zawiera koniugat określony w zastrz. 1 i dopuszczalny farmaceutycznie nośnik. PL 208 064 B1
  27. 27
    Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 26, znamienna tym, że jest stabilizowana przez liofilizację i rozpuszcza się po rekonstytucji z wytworzeniem roztworów odpowiednich do podawania pozajelitowego.
  28. 28
    Sposób oczyszczania urykazy o zmniejszonej immunogenności, znamienny tym, że obejmuje etap rozdzielania we frakcjach urykazy agregatów urykazy większych niż oktamery i wykluczania takich agregatów z oczyszczonej urykazy, przy czym oczyszczona urykaza zawiera tetrameryczne i oktameryczne formy urykazy i zawiera nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery.
  29. 29
    Sposób według zastrz. 28, znamienny tym, że etap rozdzielania jest wybrany z grupy składającej się z chromatografii jonowymiennej, chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek i ultrafiltracji.
  30. 30
    Sposób według zastrz. 29, znamienny tym, że etap rozdzielania obejmuje etap detekcji agregatów większych niż oktamery we frakcjach urykazy i wykluczania frakcji zawierających te agregaty.
  31. 31
    Sposób według zastrz. 30, znamienny tym, że etap detekcji obejmuje pomiar rozpraszania światła.
  32. 32
    Izolowana urykaza przygotowana sposobem określonym w zastrz. 28.
  33. 33
    Sposób wytwarzania koniugatu urykazy, znamienny tym, że obejmuje nanoszenie roztworu urykazy zawierającego urykazę tetrameryczną, urykazę oktameryczną i agregaty urykazy większe niż oktamery na co najmniej jedną kolumną do rozdzielania;odzyskiwanie z tej kolumny jednej lub większej liczby frakcji zawierających wyizolowaną tetrameryczą i okameryczną urykazę, przy czym izolowana urykaza zawiera nie więcej niż 2% agregatów większych niż oktamery;oraz poddanie tej izolowanej urykazy reakcji PEGylowania.
  34. 34
    Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że roztwór urykazy jest nanoszony na kolumnę przy pH 10,2.
  35. 35
    Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że kolumna do rozdziału jest wybrana z grupy składającej się z kolumny jonowymiennej oraz kolumny do chromatografii wykluczania zależnego od wielkości cząsteczek.
  36. 36
    Sposób według zastrz. 33, znamienny tym, że obejmuje ponadto etap analizowania frakcji w celu określenia co najmniej jednej właściwości wybranej z grupy składającej się z obecności urykazy okamerycznej i nieobecności agregatów urykazy, które są większe niż oktamery.
  37. 37
    Sposób według zastrz. 36, znamienny tym, że etap analizowania obejmuje co najmniej jedną technikę wybraną spośród chromatografii, wirowania, rozpraszania światła i elektroforezy.
  38. 38
    Sposób według zastrz. 37, znamienny tym, że chromatografia jest wysokosprawną chromatografią cieczową.
Independent claims38