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EP0192001B1

Papilloma virus probes and in vitro methods for the diagnosis of papilloma virus infections

Abstract

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EP0192001B1, drawing sheet 1
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Expired 29 November 2005, 20.8 years ago.

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19 claims: 19 independent, 0 dependent

  1. 1
    Composition useful for the detection of papillomavirus in a biological medium which contains it, characterized in that it comprises one or several distinct cloned DNA-HPVs selected from the cloned DNAs deposited on November 30, 1984 at the C.N.C.M. (National Collection of Cultures of Micro-organisms of the PASTEUR INSTITUTE of Paris), under the numbers hereafter:- or one or several corresponding cloned DNAs which hybridize with any of those which have been filed at the C.N.C.M., under stringent conditions: heating of these recombinant DNAs, after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution.- or one or several cloned fragments selected among the fragments obtained from the cloned HPV-DNAs filed at the CNCM under the abobe indicated numbers and which correspond to E1-;E6-;E7-;L1-;L2- regions or to intergenic regions of said cloned DNAs;- or one or several fragments of corresponding cloned DNAs which hybridize with any of the preceding ones under the said stringent conditions. Composition utilisable pour la détection de papillomavirus dans un milieu biologique le contenant, caractérisée en ce qu'elle contient un ou plusieurs ADN-HPVs distincts clonés choisis parmi les ADNs clonés déposés le 30 novembre 1984 à la C.N.C.M. (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l'INSTITUT PASTEUR de Paris, sous les numéros ci-après :- ou un ou plusieurs ADNs clonés correspondants qui hybrident avec l'un de ceux qui ont été déposés auprès de la CNCM, dans des conditions strictes : chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM- ou un ou plusieurs fragments clonés choisis parmi les fragments issus des HPV-ADNs clonés déposés à la C.N.C.M. sous les numéros sus-indiqués et qui correspondent aux régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ;ou à des régions intergéniques desdits ADN clonés- ou un ou plusieurs fragments d'ADN clonés correspondants qui hybrident avec l'un des précédents, dans les susdites conditions strictes. Mittel, verwendbar für den Nachweis des Papillomavirus in einem dieses enthaltenden biologischen Milieu, dadurch gekennzeichnet, daß es eine oder mehrere unterschiedliche clonierte HPV-DNAs enthält, die ausgewählt sind aus den clonierten DNAs, die am 30. November 1984 bei C.N.C.M. (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l'Institut Pasteur de Paris) unter den folgenden Nummern hinterlegt wurden:- oder ein oder mehrere entsprechende clonierte DNAs, die mit einer dieser bei C.N.C.M. hinterlegten unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisieren: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorhergehendem Transfer auf Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter über Nacht bei 42°C in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3mM Tris,- oder eines oder mehrere clonierte Fragmente, ausgewählt aus den Fragmenten, die von den clonierten HPV-DNAs stammen, die bei der C.N.C.M. unter den vorstehend angegebenen Nummern hinterlegt wurden und die den Bereichen E1, E6, E7, L1, L2 oder intergenischen Bereichen dieser clonierten DNAs entsprechen,- oder eines oder mehrere entsprechende clonierte DNA-Fragmente, die mit einem der vorangehenden unter den vorstehend angegebenen genauen Bedingungen hybridisieren.
  2. 2
    Mittel oder Kit, enthaltend eine Vielzahl von Sonden oder Gemischen von verschiedenen Sonden, gekennzeichnet durch neun Sondengruppen, von denen jede enthält:(1) mindestens die clonierte oder rekombinante DNA von HPV 2d (C.N.C.M. Nr. I-379);(2) mindestens eine DNA, ausgewählt aus den clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 10b (C.N.C.M. Nr. I-380 und Nr. I-381), HPV 28 (C.N.C.M. Nr. I-394) und HPV 29 (C.N.C.M. Nr. I-395);(3) mindestens eine DNA, ausgewählt aus den clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 17 (C.N.C.M. Nr. I-385 und Nr. I-386) und HPV 24 (C.N.C.M. Nr. I-392 und Nr. I-393);(4) mindestens eine DNA, ausgewählt aus den clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 14 (C.N.C.M. Nr. I-382 und Nr. I-383), HPV 15 (C.N.C.M. Nr. I-384), HPV 17 (C.N.C.M. Nr. I-385 und Nr. I-386), HPV 19 (C.N.C.M. Nr. I-387), HPV 20 (C.N.C.M. Nr. I-388), HPV 21 (C.N.C.M. Nr. I-389), HPV 22 (C.N.C.M. Nr. I-390) und HPV 23 (C.N.C.M. Nr. I-391);(5) mindestens eine DNA, ausgewählt aus den clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 15 (C.N.C.M. Nr. I-384) und HPV 17 (C.N.C.M. Nr. I-385 und Nr. I-386);(6) die clonierte oder rekombinante DNA von HPV 24 (C.N.C.M. Nr. I-392 und Nr. I-393);(7) mindestens eine DNA, ausgewählt aus den clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 14 (C.N.C.M. Nr. I-382 und Nr. I-383) und HPV 32 (C.N.C.M. Nr. I-397);(8) die clonierte oder rekombinante DNA von HPV 31 (C.N.C.M. Nr. I-396);(9) die clonierte oder rekombinante DNA von HPV 32 (C.N.C.M. Nr. I-397);mit der Maßgabe, - daß jede dieser rekombinanten oder clonierten DNAs durch eine entsprechende clonierte DNA oder durch ein DNA-Fragment ersetzt werden kann, das mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42° über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und Natriumdodecylsulfat, anschließend während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer 3 mM Tris-Lösung,- daß die DNAs oder DNA-Fragmente der neun Gruppen so ausgewählt sind, daß sie unter allen Umständen voneinander verschieden sind, in dem Maß, in dem jede der neun Gruppen auf eine einzige der sie ausmachenden DNAs reduziert ist. Nécessaire ou kit comportant une pluralité de sondes ou mélanges de sondes distinctes, caractérisé par neuf groupes de sondes ;chacun desquels comporte : (1) au moins l'ADN cloné ou recombinant de l'HPV 2d (C.N.C.M. n° I-379) ;(2) au moins un ADN choisi parmi les ADNs clonés ou recombinants de HPV 10b (C.N.C.M. N° I-380 et n° I-381), HPV 28 (C.N.C.M. n° I-394) et HPV 29 (C.N.C.M. n° I-395) ;(3) au moins un ADN choisi parmi les ADNs clonés ou recombinants de HPV 17 (C.N.C.M. n° I-385 et n° I-386), et HPV 24 (C.N.C.M. n° I-392 et n° I-393) ;(4) au moins un ADN choisi parmi les ADNs clonés ou recombinants de HPV 14 (C.N.C.M. N° I-382 et n° I-383), HPV 15 (C.N.C.M. n° I-384), HPV 17 (C.N.C.M. n° I-385 et n° I-386), HPV 19 (C.N.C.M. n° I-387), HPV 20 (C.N.C.M. n° I-388), HPV 21 (C.N.C.M. n° I-389), HPV 22 (C.N.C.M. n° I-390) et HPV 23 (C.N.C.M. n° I-391) ;(5) au moins un ADN choisi parmi les ADNs clonés ou recombinants de HPV 15 (C.N.C.M. n° I-384) et HPV 17 (C.N.C.M. N° I-385 et n° I-386) ;(6) l'ADN cloné ou recombinant de HPV 24 (C.N.C.M. n° I-392 et n° I-393) ;(7) au moins un ADN choisi parmi les ADNs clonés ou recombinants de HPV 14 (C.N.C.M. N° I-382 et n° I-383), et HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397) ;(8) l'ADN cloné ou recombinant de HPV 31 (C.N.C.M. n° I-396) ;(9) l'ADN cloné ou recombinant de HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397) ;étant entendu - que chacun de ces ADNs recombinants ou clonés peut être remplacé par un ADN cloné correspondant ou fragment d'ADN qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes : chauffage de ces ADNs recombinants après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl sulfate de sodium, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM,- que les ADNs ou fragments d'ADN des neuf groupes sont choisis de façon à être en toutes circonstances différents les uns des autres, dans la mesure où chacun des neuf groupes serait réduit à un seul des ADNs qui le composent. Set or kit comprizing a plurality of probes or mixture of distinct probes characterized by nine groups of probes, whereby each of them comprises: (1) at least the cloned or recombinant DNA of HPV 2d (C.N.C.M. n° I-379);(2) at least one DNA selected from the cloned or recombinant DNAs of HPV 10b (C.N.C.M. N° I-380 and n° I-381), HPV 28 (C.N.C.M. n° I-394) and HPV 29 (C.N.C.M. n° I-395);(3) at least one DNA selected from the cloned or recombinant DNAs of HPV 17 (C.N.C.M. n° I-385 and n° I-386), and HPV 24 (C.N.C.M. n° I-392 and n° I-393);(4) at least one DNA selected from the cloned or recombinant DNAs of HPV 14 (C.N.C.M. N° I-382 and n° I-383), HPV 15 (C.N.C.M. n° I-384), HPV 17 (C.N.C.M. n° I-385 and n° I-386), HPV 19 (C.N.C.M. n° I-387), HPV 20 (C.N.C.M. n° I-388), HPV 21 (C.N.C.M. n° I-389), HPV 22 (C.N.C.M. n° I-390) and HPV 23 (C.N.C.M. n° I-391)(5) at least one DNA selected from the cloned or recombinant DNAs of HPV 15 (C.N.C.M. n° I-384) and HPV 17 (C.N.C.M. N° I-385 et n° I-386);(6) the cloned or recombinant DNA of HPV 24 (C.N.C.M. n° I-392 and n° I-393)(7) at least one DNA selected from the cloned or recombinant DNAs of HPV 14 (C.N.C.M. N° I-382 and n° I-383), and HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397) ;(8) the cloned or recombinant DNA of HPV 31 (C.N.C.M. n° I-396)(9) the cloned or recombinant DNA of HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397);it been understood - that each of these recombinant or cloned DNAs can be replaced by a corresponding cloned DNA or DNA fragment which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of these recombinant DNAs, after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5 % sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution,- that the DNAs of DNA fragments of the nine groups are selected such as to be different one from another under all circumstances, insofar as each of the nine group would be restricted to only one of the DNAs which form that group.
  3. 3
    Mittel oder Kit gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie folgende Gruppen enthalten:(1) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs v0n HPV 1, 2d, 4 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(2) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs von DNA-HPV 3, 10a, 10b, 28 und 29 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(3) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs von DNA-HPV 5, 17a und 24 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(4) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs von DNA-HPV 5, 8, 12, 14a, 14b, 19, 20, 21, 22 und 23 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(5) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs von DNA-HPVs 9, 15, 17a und 17b oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(6) eine clonierte oder rekombinante DNA von DNA-HVP24 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNA;(7) ein Gemisch von clonierten oder rekombinanten DNAs von DNA-HPVs 5, 8, 14 und 32 oder ein Gemisch von Fragmenten dieser DNAs;(8) ein Gemisch clonierter oder rekombinanter DNAs von DNA-HPVs 18 und 31 oder ein Gemisch der Fragmente dieser DNAs;(9) eine clonierte oder rekombinante DNA von DNA-HPV 32. Nécessaire ou kit selon la revendication 2, caractérisé en ce que les groupes comportent respectivement : (1) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de HPV 1, 2d, 4 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(2) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPV 3, 10a, 10b, 28 et 29 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(3) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPV 5, 17a et 24 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(4) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPV 5, 8, 12, 14a, 14b, 19, 20, 21, 22, et 23 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(5) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPVs 9, 15, 17a et 17b ou un mélange de fragments de ces ADNS ;(6) un ADN cloné ou recombinant de ADN-HPV 24 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(7) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPVs 5, 8, 14b et 32 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(8) un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de ADN-HPVs 18 et 31 ou un mélange de fragments de ces ADNs ;(9) un ADN cloné ou recombinant de ADN-HPV 32. Set or kit according to claim 2, characterized in that the groups respectively comprise: (1) a mixture of cloned or recombinant DNAs of HPV 1, 2d, 4 or a mixture of fragments of said DNAs;(2) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 3, 10a, 10b, 28 and 29 or a mixture of fragments of said DNAs;(3) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 5, 17a and 24 or a mixture of fragments of said DNAs;(4) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 5, 8, 12, 14a, 14b, 19, 20, 21, 22 and 23 or a mixture of fragments of said DNAs;(5) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 9, 15, 17a and 17b or a mixture of fragments of said DNAs;(6) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 24 or a mixture of fragments of said DNAs;(7) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 5, 8, 14b and 32 or a mixture of fragments of said DNAs;(8) a mixture of cloned or recombinant DNAs of DNA-HPV 18 and 31 or a mixture of fragments of said DNAs;(9) a cloned or recombinant DNA of HPV-HPV 32.
  4. 4
    Mittel oder Kit gemäß Anspruch 2 oder Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Gruppe 7) eine weitere clonierte oder rekombinante DNA von HPV IP-4 (C.N.C.M. Nr. I-449) oder ein cloniertes oder rekombinantes Fragment dieser DNA enthält, und daß dieses Mittel oder Kit eine zehnte Gruppe enthält, die ein Gemisch aus clonierten oder rekombinanten DNAs von HPV 16, HPV 18 und IP-2 (C.N.C.M. Nr. I-450) oder ein Gemisch der Fragmente dieser DNAs enthält. Nécessaire ou kit selon la revendication 2 ou la revendication 3, caractérisé en ce que le groupe 7) comporte en outre l'ADN cloné ou recombinant de HPV IP4 (C.N.C.M. N° I-449) ou un fragment cloné ou recombinant de cet ADN et en ce que ledit nécessaire ou kit comporte un dixième groupe comportant un mélange d'ADNs clonés ou recombinants de HPV 16, HPV 18 et IP 2 (C.N.C.M. n° I-450), ou un mélange de fragments de ces ADNs. Set or kit according to claim 2 or claim 3, characterized in that group 7) comprises furthermore the cloned or recombinant DNA of HPV IP4 (C.N.C.M. N° I-449) or a cloned or recombinant fragment of said DNA and in that said set or kit comprises a tenth group comprising a mixture of cloned of recombinant DNAs of HPV 16, HPV 18 and IP 2 (C.N.C.M. n° I-450), or a mixture of fragments of said DNAs.
  5. 5
    Mittel oder Kit gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die in den Gruppen oder Gemischen verwendeten Fragmente den Bereichen E1, E6, E7, L1, L2 oder den intergenischen Bereichen dieser DNA-HPV-Fragmente entsprechen. Nécessaire ou kit selon la revendication 4, caractérisé en ce que les fragments mis en oeuvre dans les groupes ou mélanges correspondent aux régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ;ou à des régions intergéniques desdits fragments d'ADN-HPV. Set or kit according to claim 4, characterized in that the fragments brought into play in said groups or mixtures corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions, or to intergenic regions of said DNA-HPV fragments.
  6. 6
    Mittel oder Kit gemäß einem der Ansprüche 2 oder 3, für die jeweilige in vitro-Diagnose von:(1) Haut- oder Schleimhautwarzen (insbesondere gewöhnliche Warzen oder Warzen der Fußsohle);Differentialdiagnose von warzenförmiger Epidermodysplasie;(2) flache oder intermediäre Haut- oder Schleimhautwarzen;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs, Differentialdiagnose von warzenförmiger Epidermodysplasie;(3) warzenförmige Epidermodysplasie;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;(4) warzenförmige Epidermodysplasie;(5) warzenförmige Epidermodysplasie;(6) warzenförmige Epidermodysplasie;(7) aus warzenförmiger Epidermodysplasie entstehender Hautkrebs;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;(8) fokale Hyperplasie der Mundschleimhaut;Differentialdiagnose von intraepithelialen oralen Neoplasien;(9) intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs. Nécessaire ou kit selon l'une quelconque des revendications 2 ou 3, destiné aux diagnostics in vitro respectifs : (1) des verrues cutanées ou muqueuses (en particulier, verrues vulgaires et plantaires) ;diagnostic différentiel de l'épidermodysplasie verruciforme ;(2) des verrues planes ou intermédiaires cutanées ou muqueuses ;des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés ;diagnostic différentiel de l'épidermodysplasie verruciforme ;(3) de l'épidermodysplasie verruciforme ;des néoplasies intra-épithéliales et cancers cutanés ;(4) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(5) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(6) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(7) des cancers cutanés de l'épidermodysplasie verruciforme ;des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés ;(8) de l'hyperplasie épithéliale focale orale ;du diagnostic différentiel des néoplasies intraépithéliales orales ;(9) des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés. Set or kit according to anyone of claims 2 or 3, applicable to in vitro diagnostics respectively: (1) of skin or mucous membrane warts (especially verruca and plantar warts);differential diagnosis of epidermodysplasia verruciformis;(2) of plane warts or intermediary skin or mucous membrane warts;intra-epithelial neoplasms and skin cancers;differential diagnosis of epidermodysplasia verruciformis;(3) of epidermodysplasia verruciformis;intra-epithelial neoplasms and skin cancers;(4) of epidermodysplasia verruciformis;(5) of epidermodysplasia verruciformis;(6) of epidermodysplasia verruciformis;(7) of skin cancers from epidermodysplasia verruciformis;intra-epithelial neoplasias and skin cancers;(8) of oral epithelial hyperplasia;differential diagnosis of oral epithelial neoplasms;(9) of intra-epithelial neoplasms and skin cancers.
  7. 7
    Mittel oder Kit gemäß Anspruch 4 oder Anspruch 5, für die jeweilige in vitro-Diagnose von:(1) Haut- oder Schleimhautwarzen (insbesondere gewöhnliche Warzen oder Warzen der Fußsohle);Differentialdiagnose von warzenförmiger Epidermodysplasie;(2) flache Warzen oder intermediäre Haut- oder Schleimhautwarzen;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;Differentialdiagnose von warzenförmiger Epidermodysplasie;(3) warzenförmige Epidermodysplasie;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;(4) warzenförmige Epidermodysplasie;(5) warzenförmige Epidermodysplasie;(6) warzenförmige Epidermodysplasie;(7) aus warzenförmiger Epidermodysplasie entstehender Hautkrebs;intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;(8) fokale Hyperplasie der Mundschleimhaut;Differentialdiagnose von intraepithelialen oralen Neoplasien;(9) intraepitheliale Neoplasien und Hautkrebs;(10) Genital-Neoplasien und insbesondere Gebärmutterkrebs. Nécessaire ou kit selon la revendication 4 ou la revendication 5, destiné aux diagnostics in vitro respectifs : (1) des verrues cutanées ou muqueuses (en particulier, verrues vulgaires et plantaires) ;diagnostic différentiel de l'épidermodysplasie verruciforme ;(2) des verrues planes ou intermédiaires cutanées ou muqueuses ;des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés ;diagnostic différentiel de l'épidermodysplasie verruciforme ;(3) de l'épidermodysplasie verruciforme ;des néoplasies intra-épithéliales et cancers cutanés ;(4) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(5) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(6) de l'épidermodysplasie verruciforme ;(7) des cancers cutanés de l'épidermodysplasie verruciforme ;des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés ;(8) de l'hyperplasie épithéliale focale orale ;du diagnostic différentiel des néoplasies intraépithéliales orales ;(9) des néoplasies intraépithéliales et cancers cutanés ;(10) des néoplasies génitales et, en particulier, des cancers de l'utérus. Set or kit according to claim 4 or or to claim 5, applicable to respective in vitro diagnosis: (1) of skin or mucous membrane warts (especially verruca and plantar warts);differential diagnosis of epidermodysplasia verruciformis;(2) of plane warts or intermediary skin or mucous membrane warts;intra-epithelial neoplasms and skin cancers;differential diagnosis of epidermodysplasia verruciformis;(3) of epidermodysplasia verruciformis;intra-epithelial neoplasms and skin cancers;(4) of epidermodysplasia verruciformis;(5) of epidermodysplasia verruciformis;(6) of epidermodysplasia verruciformis;(7) of skin cancers from epidermodysplasia verruciformis;intra-epithelial neoplasias and skin cancers;(8) of oral epithelial hyperplasia;differential diagnosis of oral epithelial neoplasms;(9) of intra-epithelial neoplasms and skin cancers.(10) of genital neoplasms, and particularly, of uterus-cancers.
  8. 8
    Process of in vitro detection and identification of papillomavirus contained in a biological sample comprising the carrying out of distinct hybridization tests with the cloned or recombinant DNA-HPVs or the fragments of the DNA-HPVs of these sets or kits, according to anyone of claims 2 to 7 and the detection of those DNA-HPVs or cloned fragments which give rise to a preferential hybridization with the DNA-HPVs contained in the the biological sample. Procédé de détection et d'identification in vitro de papillomavirus contenus dans un échantillon biologique comprenant la réalisation d'essais d'hybridation distincts avec les ADN-HPVs clonés ou recombinants ou les fragments d'ADN-HPVs de ces nécessaires ou kits, selon l'une quelconque des revendications 2 à 7 et la détection de ceux des ADN-HPVs ou fragments clonés qui donnent lieu à une hybridation préférentielle avec les ADN-HPVs contenus dans l'échantillon biologique. Verfahren zum Nachweis und zur in vitro-Identifizierung des in einer biologischen Flüssigkeit enthaltenen Papillomavirus, umfassend die Durchführung verschiedener Hybridisierungstests mit den clonierten oder rekombinanten DNA-HPVs oder den Fragmenten von DNA-HPVs gemäß den Mitteln oder Kits der Ansprüche 2 bis 7 und Nachweis dieser clonierten DNA-HPVs oder Fragmente, die eine bevorzugte Hybridisierung mit den in der biologischen Flüssigkeit enthaltenen DNA-HPVs ergeben.
  9. 9
    Process according to claim 8, characterized in that the hybridization tests are carried out with the whole cloned DNAs or the DNA fragments corresponding to the E6 or E7 regions under stringent hybridization conditions. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que les essais d'hybridation sont faits avec les ADNs clonés entiers ou des fragments d'ADN correspondant aux régions E6 ou E7 dans les conditions d'hybridation stricte. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Hybridisierungstests unter den genauen Hybridisierungsbedingungen mit den vollständigen clonierten DNAs oder DNA-Fragmenten, die den Bereichen E6 oder E7 entsprechen, gemacht werden.
  10. 10
    ADN cloné ou recombinant de HPV 2d (C.N.C.M. n° I-379) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH, 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédent dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 2d (C.N.C.M. n° I-379) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filter for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 2d (C.N.C.M. Nr. I-379) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  11. 11
    ADN cloné ou recombinant de HPV 10b (C.N.C.M. n° I-380 et n° I-381) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 10b (C.N.C.M. n° I-380 and n° I-381) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 10bd (C.N.C.M. Nr. I-380 und Nr. I-381) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  12. 12
    ADN cloné ou recombinant de HPV 28 (C.N.C.M. n° I-394) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 28 (C.N.C.M. n° I-394) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 28 (C.N.C.M. Nr. I-394) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einerLösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einen der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  13. 13
    ADN cloné ou recombinant de HPV 29 (C.N.C.M. n° I-395) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH, 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 29 (C.N.C.M. n° I-395) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 29 (C.N.C.M. Nr. I-395) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  14. 14
    ADN cloné ou recombinant de HPV 31 (C.N.C.M. n° I-396) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42'C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 31 (C.N.C.M. n° I-396) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 31 (C.N.C.M. Nr. I-396) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung Von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  15. 15
    ADN cloné ou recombinant de HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH, 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV 32 (C.N.C.M. n° I-397) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV 32 (C.N.C.M. Nr. I-397) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  16. 16
    ADN cloné ou recombinant de HPV IP2 (C.N.C.M. n° I-450) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV IP2 (C.N.C.M. n° I-450) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV IP2 (C.N.C.M. Nr. I-450) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einen der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
  17. 17
    ADN cloné ou recombinant de HPV I4a (C.N.C.M. n° I-382) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH, 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV I4a (C.N.C.M. n° I-382) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV I4a (C.N.C.M. Nr. I-382) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischen Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
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    ADN cloné ou recombinant de HPV I4b (C.N.C.M. n° I-383) ou ADN cloné correspondant de cet ADN cloné qui hybride avec le précédent dans des conditions strictes :chauffage de ces ADNs recombinants, après dénaturation et transfert préalable sur des filtres de transfert pour hybridation, à 80°C pendant 4 heures, préhybridation pendant la nuit à 42°C des filtres dans une solution de Denhardt, 2 x SSC, phosphate de sodium 50 mM (pH, 6,5), ADN de thymus de veau (250 µg/ml) et formamide déionisé 35%, puis hybridation dans la même solution pendant 48 heures à 42°C avec l'ADN viral marqué par ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) et lavage des filtres sous agitation pendant 30 minutes à 50°C dans une solution de Tris-chlorhydrate 60 mM (pH8), EDTA 2 mM, NaCl 300 mM et dodécyl-sulfate de sodium 0,5%, puis pendant 30 minutes à température ambiante dans une solution Tris 3 mM ou fragments d'ADN correspondant à l'une des régions E1 ;E6 ;E7 ;L1 ;L2 ou à une région intergénique de cet ADN-HPV ou fragment d'ADN correspondant hybridant avec le précédant dans les susdites conditions strictes. Cloned or recombinant DNA of HPV I4b (C.N.C.M. n° I-383) or corresponding cloned DNA of said cloned DNA which hybridizes with the preceding one under stringent conditions: heating of said recombinant DNAs after denaturation and prior transfer on transfer filters for hybridization at 80°C for 4 hours, prehybridization overnight at 42°C of the filters in Denhardt solution, 2 x SSC, 50mM sodium phosphate (pH 6.5), calf thymus DNA (250 µg/ml) and 35 % deionized formamide, then hybridization in the same solution during 48 hours at 42°C with the ³²P - labeled viral DNA (2 x 10⁴ cpm/cm²) and washing of the filters by shaking over 30 minutes at 50°C in a 60 mM Tris-hydrochloride solution (pH8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl and 0.5% sodium dodecyl sulfate during 30 minutes at ambient temperature in a 3 mM Tris solution. or DNA fragments corresponding to the E1;E6;E7;L1;L2 regions or to one intergenic region of said DNA-HPV or corresponding DNA fragment which hybridizes with the preceding one under said stringent conditions. Clonierte oder rekombinante DNA von HPV I4b (C.N.C.M. Nr. I-383) oder clonierte DNA, die der clonierten DNA entspricht, die mit der vorangehenden unter den folgenden stringenten Bedingungen hybridisiert: Erwärmung dieser rekombinanten DNAs nach Denaturierung und vorangehendem Transfer auf die Transferfilter für die Hybridisierung bei 80°C während 4 Stunden, Vorhybridisierung der Filter bei 42°C über Nacht in einer Denhardt-Lösung, 2 x SSC, 50 mM Natriumphosphat (pH 6,5), Kalbsthymus-DNA (250 µg/ml) und 35 % entionisiertes Formamid, danach Hybridisierung in der gleichen Lösung während 48 Stunden bei 42°C mit viraler DNA, die mit ³²P (2 x 10⁴ cpm/cm²) markiert ist, und Waschen der Filter unter Bewegung während 30 Minuten bei 50°C in einer Lösung von 60 mM Tris-Chlorhydrat (pH 8), 2 mM EDTA, 300 mM NaCl und 0,5% Natriumdodecylsulfat, danach während 30 Minuten bei Raumtemperatur in einer Lösung von 3 mM Tris, oder DNA-Fragmente, die einem der Bereiche E1, E6, E7, L1, L2 oder einem intergenischem Bereich dieser DNA-HPV entsprechen, oder ein DNA-Fragment, das einer DNA entspricht, die mit dem vorangehenden unter den angegebenen stringenten Bedingungen hybridisiert.
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    Process of detection or identification of papillomavirus of a type or subtype corresponding to a DNA according to anyone of claims 10 to 17, possibly contained in a biological sample, comprising the carrying out of a hybridization test with the corresponding DNA or DNA-HPV fragment used in a form of a probe and the detection of the hybrid possibly formed between the DNA-HPV of the biological sample and the probe which has been used. Procédé de détection et d'identification de papillomavirus d'un type ou sous-type correspondant à un ADN de l'une quelconque des revendications 10 à 17, éventuellement contenus dans un échantillon biologique, comprenant la réalisation d'un essai d'hybridation avec l'ADN ou fragment d'ADN-HPV correspondant utilisé à titre de sonde, et la détection de l'hybride éventuellement formé entre les ADN-HPVs de l'échantillon biologique et la sonde utilisée. Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung des Papillomavirus eines Typs oder Subtyps, der einer DNA gemäß irgendeinem der Ansprüche 10 bis 17 entspricht, gegebenenfalls in einer biologischen Flüssigkeit enthalten, umfassend die Durchführung eines Hybridisierungstests mit der DNA oder einem entsprechenden DNA-HPV-Fragment, das als Sonde dient, und Nachweis des gegebenenfalls zwischen den DNA-HPVs der biologischen Flüssigkeit und der verwendeten Sonde gebildeten Hybrids.
Independent claims19