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BRPI1007443B1

Urine and serum biomarkers associated with diabetic nephropathy

Abstract

serum and urine biomarkers associated with diabetic nephropathy. use of urine and serum biomarkers in the diagnosis of diabetic nephropathy, staging of diabetic nephropathy, monitoring the progression of diabetic nephropathy and evaluating the effectiveness of diabetic nephropathy treatments. these markers include urine precursor alpha-2-hs-glycoprotein, urine alpha-1 antitrypsin, urine acid alpha-1 glycoprotein, urine osteopontin, serum osteopontin and fragments and combinations thereof.

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  1. 1
    REIVINDICAÇÕES 1. Método para diagnosticar nefropatia diabética em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende:determinação de um nível de um biomarcador em uma amostra de urina de um indivíduo suspeito de apresentar nefropatia diabética, em que o biomarcador é um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína selecionado do grupo consistindo em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), ou um fragmento de alfa-1 antitripsina consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e avaliação se o indivíduo apresenta nefropatia diabética com base no nível do biomarcador;onde um aumento no nível do biomarcador, quando comparado aquele em um indivíduo que não apresenta nefropatia diabética, indica que o indivíduo apresenta nefropatia diabética.
  2. 2
    Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um segundo biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa2-HS-glicoproteína selecionado a partir do grupo consistindo em:VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), e o segundo biomarcador é um fragmento da alfa-1 antitripsina selecionado a partir do grupo que consiste em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO:4), EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO:5), e EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO:6);ou em que o biomarcador é um fragmento de alfa-1 antitripsina Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 54/66 2/11 consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e o segundo biomarcador é alfa-2-HS-glicoproteína ou um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína compreendendo pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2).
  3. 3
    Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um terceiro biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o terceiro biomarcador é alfa-1 glicoproteína ácida ou o fragmento de alfa-1 glicoproteína ácida que é GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS (SEQ ID NO:7).
  4. 4
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de osteopontina ou um fragmento de osteopontina em uma amostra de sérica do indivíduo, em que o fragmento da osteopontina compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em:YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO:8) e KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK (SEQ ID NO:9).
  5. 5
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que compreende, adicionalmente, após a etapa de avaliação, correlação do nível do biomarcador com o estado da nefropatia diabética, onde um aumento no nível do biomarcador, com relação aquele de um indivíduo que não apresenta nefropatia diabética, indica que o indivíduo está no estágio avançado de nefropatia diabética.
  6. 6
    Método para avaliar a eficácia de um tratamento Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 55/66 3/11 para nefropatia diabética em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende:determinação de um nível pré-tratamento de um biomarcador em uma amostra de urina de um indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína selecionado do grupo consistindo em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), ou um fragmento de alfa-1-antitripsina consistindo em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3);determinação de um nível pós-tratamento do biomarcador em uma amostra de urina de um indivíduo;e avaliação da eficácia do tratamento com base em uma alteração no nível do biomarcador após o tratamento, onde o nível de pós-tratamento do biomarcador sendo o mesmo ou inferior ao nível de pré-tratamento do biomarcador indica eficácia do tratamento.
  7. 7
    Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um segundo biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa2-HS-glicoproteína selecionado a partir do grupo consistindo em:VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), e o segundo biomarcador é um fragmento da alfa-1 antitripsina selecionado a partir do grupo que consiste em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO:4), EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO:5), e EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO:6);ou em que o biomarcador é um fragmento de alfa-1 antitripsina consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e o Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 56/66 4/11 segundo biomarcador é alfa-2-HS-glicoproteína ou um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína compreendendo pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2).
  8. 8
    Método, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de um terceiro biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o terceiro biomarcador é alfa-1 glicoproteína ácida ou o fragmento de alfa-1 glicoproteína ácida que é GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS (SEQ ID NO:7).
  9. 9
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de osteopontina ou um fragmento de osteopontina em uma amostra sérica do indivíduo, em que o fragmento da osteopontina compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em:YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO:8) e KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK (SEQ ID NO:9).
  10. 10
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 9, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um paciente humano.
  11. 11
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 9, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um animal de laboratório.
  12. 12
    Método para determinação do estágio da nefropatia diabética em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende:determinação de um nível de um biomarcador em uma Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 57/66 5/11 amostra de urina de um indivíduo suspeito de apresentar nefropatia diabética e, opcionalmente, um ou mais fatores clínicos, em que o biomarcador é um fragmento de alfa-2-HSglicoproteína selecionado do grupo consistindo em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), ou um fragmento de alfa-1-antitripsina consistindo em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e os fatores clínicos são selecionados do grupo consistindo em idade, sexo, HbAlc, razão de albumina/creatinina, e razão de filtração glomerular;cálculo da classificação da doença com base no nível do biomarcador;e avaliação do estágio de nefropatia diabética do indivíduo com base na classificação da doença em comparação aos valores de corte predeterminados indicando estágios diferentes da nefropatia diabética.
  13. 13
    Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um segundo biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa2-HS-glicoproteína selecionado a partir do grupo consistindo em:VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), e o segundo biomarcador é um fragmento da alfa-1 antitripsina selecionado a partir do grupo que consiste em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO:4), EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO:5), e EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO:6);ou em que o biomarcador é um fragmento de alfa-1 antitripsina consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e o Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 58/66 6/11 segundo biomarcador é alfa-2-HS-glicoproteína ou um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína compreendendo pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2).
  14. 14
    Método, de acordo com a reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de um terceiro biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o terceiro biomarcador é alfa-1 glicoproteína ácida ou o fragmento de alfa-1 glicoproteína ácida que é GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS (SEQ ID NO:7).
  15. 15
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de osteopontina ou um fragmento de osteopontina em uma amostra sérica do indivíduo, em que o fragmento da osteopontina compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em:YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO:8) e KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK (SEQ ID NO:9).
  16. 16
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, caracterizado pelo fato de que a classificação da doença é calculada por uma análise selecionada do grupo consistindo em análise de regressão de Ridge, análise fatorial, análise discriminante funcional e análise de regressão logística.
  17. 17
    Método para monitoramento do progresso da nefropatia diabética em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende:obtenção de uma primeira amostra de urina de um indivíduo suspeito de apresentar nefropatia diabética;Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 59/66 7/11 obtenção de uma segunda amostra de urina de um indivíduo 2 semanas a 12 meses mais tarde;determinação na primeira e segunda amostras de um nível de um biomarcador, em que o biomarcador é um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína selecionado do grupo consistindo em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), ou um fragmento de alfa1-antitripsina consistindo em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e os fatores clínicos são selecionados do grupo consistindo em idade, sexo, HbAlc, razão de albumina/creatinina, e razão de filtração glomerular;cálculo de uma primeira classificação da doença e uma segunda classificação da doença com base nos níveis do biomarcador, e opcionalmente, um ou mais fatores clínicos, na primeira e segunda amostras, respectivamente;e avaliação do progresso da doença no indivíduo, onde a segunda classificação da doença sendo maior que a primeira classificação da doença é indicativa da exacerbação da nefropatia diabética.
  18. 18
    Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um segundo biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa2-HS-glicoproteína selecionado a partir do grupo consistindo em:VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), e o segundo biomarcador é um fragmento da alfa-1 antitripsina selecionado a partir do grupo que consiste em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 60/66 8/11 MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO:4), EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO:5), e EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO:6);ou em que o biomarcador é um fragmento de alfa-1 antitripsina consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e o segundo biomarcador é alfa-2-HS-glicoproteína ou um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína compreendendo pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1), ou MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2).
  19. 19
    Método, de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de um terceiro biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o terceiro biomarcador é alfa-1 glicoproteína ácida ou o fragmento de alfa-1 glicoproteína ácida que é GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS (SEQ ID NO:7).
  20. 20
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de osteopontina ou um fragmento de osteopontina em uma amostra sérica do indivíduo, em que o fragmento da osteopontina compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em:YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO:8) e KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK (SEQ ID NO:9).
  21. 21
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 20, caracterizado pelo fato de que a classificação da doença é calculada por uma análise selecionada do grupo consistindo em análise de regressão de Ridge, análise fatorial, análise discriminante funcional e análise de regressão logística. Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 61/66 9/11
  22. 22
    Método para avaliar a eficácia de um tratamento para nefropatia diabética em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende:obtenção de uma primeira amostra de urina do indivíduo antes do tratamento, obtenção de uma segunda amostra de urina do indivíduo após o tratamento, determinação nos níveis das amostras de um biomarcador, em que o biomarcador em que o biomarcador é um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína selecionado do grupo consistindo em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), ou um fragmento de alfa1-antitripsina consistindo em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e os fatores clínicos são selecionados do grupo consistindo em idade, sexo, HbAlc, razão de albumina/creatinina, e razão de filtração glomerular;cálculo de uma primeira classificação da doença e uma segunda classificação da doença com base nos níveis dos biomarcadores e, opcionalmente, em um ou mais fatores clínicos, na primeira e segunda amostras, respectivamente;e avaliação da eficácia do tratamento no indivíduo, onde a segunda classificação da doença sendo igual ou inferior à primeira classificação da doença indica eficácia do tratamento.
  23. 23
    Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação de um nível de um segundo biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o biomarcador é um fragmento de alfa Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 62/66 10/11 2-HS-glicoproteína selecionado a partir do grupo consistindo em:VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1) e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2), e o segundo biomarcador é um fragmento da alfa-1 antitripsina selecionado a partir do grupo que consiste em: KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), MIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK (SEQ ID NO:4), EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAE (SEQ ID NO:5), e EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFA (SEQ ID NO:6);ou em que o biomarcador é um fragmento de alfa-1 antitripsina consistindo em KGKWERPFEVKDTEEEDF (SEQ ID NO:3), e o segundo biomarcador é alfa-2-HS-glicoproteína ou um fragmento de alfa-2-HS-glicoproteína compreendendo pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em: VVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:1)e MGVVSLGSPSGEVSHPRKT (SEQ ID NO:2).
  24. 24
    Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de um terceiro biomarcador na amostra de urina do indivíduo, em que o terceiro biomarcador é alfa-1 glicoproteína ácida ou o fragmento de alfa-1 glicoproteína ácida que é GQEHFAHLLILRDTKTYMLAFDVNDEKNWGLS (SEQ ID NO:7).
  25. 25
    Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 24, caracterizado pelo fato de compreender ainda a determinação do nível de osteopontina ou um fragmento de osteopontina em uma amostra sérica do indivíduo, em que o fragmento da osteopontina compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em:YPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQNAVSSEETNDFKQETLPSK (SEQ ID NO:8) e KYPDAVATWLNPDPSQKQNLLAPQTLPSK (SEQ ID NO:9).
  26. 26
    Método, de acordo com qualquer uma das Petição 870200072248, de 10/06/2020, pág. 63/66 11/11 reivindicações 22 a 25, caracterizado pelo fato de que a classificação da doença é calculada por uma análise selecionada do grupo consistindo em análise de regressão de Ridge, análise fatorial, análise discriminante funcional e 5 análise de regressão logística.
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