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PT2186830E

Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applicatioins thereof

Abstract

The present invention relates to interferon-α2b modified with Y-shaped branched polyethylene glycol (PEG) at a single Lys residue and the preparation thereof. The peglated IFN-α2b can be used for the preparation of a medicament for treating a disease, e.g. viral infections such as Hepatitis C.

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Term

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10 claims: 4 independent, 6 dependent

  1. 1
    CLAIMS REIVINDICAÇÕES 1. A pegylated interferon-a2b (IFN-a2b) of the structure as shown below, obtained by linking IFN-a2b to a Y-branched polyethylene glycol (YPEG):1. Um interferão-a2b (IFN-a2b) peguilado da estrutura como em baixo, obtido ao ligar o IFN-a2b a um polietilenoglicol ramificado em forma de Y (YPEG): Pa --- Xl ^ ÚN— (CHRi) jpB—X2 Pa---Xl^ ÚN— (CHRi)j pb—X2 C— N — IFN-a2b C— N—IFN-a2b Em que, On what, FORThe and Pb is the same or different polyethylene glycol (PEG);j is an integer between 1-12;Pa e Pb é o mesmo ou diferente polietilenoglicol (PEG);j é um número inteiro entre 1-12;R1 is H, substituted or unsubstituted C1-C12 alkyl group, substituted aryl, aralkyl, or heteroalkylene;and Ri é H, grupo alquilo C1-C12 substituído ou não substituído, arilo substituído, aralquil, ou heteroalquileno;e Xi and X2 are independently a linking group, where Xi is (CH2)n, and X2 is selected from the group consisting of (CH2)n, (CH2)n OCO, (CH2)n NHCO, and (CH2)n CO, where n is an integer between 1-10, where YPEG is linked to IFN-a2b through a starch bond formed by the side chain of the ε-amino group of the Lys residue in IFN-a2b corresponding to position 134 in the SEQ ID NO. 1. Xi e X2 são independentemente um grupo de ligação, em que Xi é (CH2)n, e X2 é seleccionado do grupo composto por (CH2)n, (CH2)n OCO, (CH2)n NHCO, e (CH2)n CO, em que n é um número inteiro entre 1-10, em que o YPEG é liqado a IFN-a2b através de uma ligação amido formada pela cadeia lateral do grupo ε-amino do resíduo Lys no IFN-a2b correspondente à posição 134 na SEQ ID N°.l.
  2. 5
    The pegylated IFN-a2b of any one of claims 1-4, wherein the YPEG is an equal arm YPEG, with a molecular weight of 5. O IFN-a2b peguilado de qualquer uma das reivindicações 1-4, em que o YPEG é um YPEG de braço igual, com um peso molecular de 40000 Dalton. 40000 Dalton.
  3. 6
    A composition that comprises a pharmaceutically effective amount of the 6. Uma composição que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz do IFN-a2b pegged from either IFN-a2b peguilado de qualquer uma 2/4 das reivindicações 1-5 e um suporte farmaceuticamente aceitável ou excipiente. 2/4 of claims 1-5 and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  4. 9
    A method for preparing and purifying the pegylated IFN-a2b of any one of claims 1-5, which includes the steps:9. Um método para preparar e purificar o IFN-a2b peguilado de qualquer uma das reivindicações 1-5, que inclui as etapas: (a) sob uma condição alcalina, preferencialmente em pH 9,0, que permite um PEG ramificado em forma de Y da fórmula seguinte para reagir com IFN-a2b, e obtenção de IFN-a2b peguilado;(a) under an alkaline condition, preferably at pH 9.0, which allows a Y-branched PEG of the following formula to react with IFN-a2b, and obtain pegylated IFN-a2b;3/4 3/4 05 05 ROCH2CH2(OCH2CH2)m-0-CH2CH2 μ Η '^.N-(CH2)j— C—Ν—Ο—Ν ROCH2CH2(OCH2CH2)m-0-Ch2CH2 μ Η '^ .N- (CH2)j- C — Ν — Ο — Ν ROC ^ CHjíOC ^ CHjím · ^ —CH3—/' ROC^CHjíOC^CHjím·^—CH3—/' IIλ οο IIλ οο Em que R e R' são independentemente um grupo alquil C1-C4, preferencialmente metilo;Where R and R 'are independently a C1-C4 alkyl group, preferably methyl;j is an integer between 1-12;j é um número inteiro entre 1-12;m e m' indicam o grau de polimerização e podem ser qualquer número inteiro, e m+m' são preferencialmente entre 600 a 1500;mem 'indicate the degree of polymerization and can be any integer, and m + m' are preferably between 600 to 1500;(b) capturando os produtos de reacção obtidos na fase (A) com uma resina de troca aniónica, preferencialmente Q Sepharose FF, e eluição dos produtos num gradiente de aniões, preferencialmente num gradiente de iões cloreto, para obter produtos modificados;(b) capturing the reaction products obtained in step (A) with an anion exchange resin, preferably Q Sepharose FF, and eluting the products in an anion gradient, preferably in a chloride ion gradient, to obtain modified products;(c) eluição dos produtos de reacção capturados na fase (B) com uma resina de troca catiónica, preferencialmente SP Sepharose FF, num gradiente de catiões, preferencialmente num gradiente de iões sódio e depois recolhendo cada pico separadamente;(c) eluting the reaction products captured in step (B) with a cation exchange resin, preferably SP Sepharose FF, in a cation gradient, preferably in a sodium ion gradient and then collecting each peak separately;(d) determinar a actividade do produto de cada pico, e seleccionando o pico correspondente ao produto de reacção com actividade mais elevada. (d) determining the product activity of each peak, and selecting the peak corresponding to the reaction product with the highest activity.
Independent claims4