PL2644698T3 - MULTI-SPECIFIC ANTIGEN-BINDING MOLECULE HAVING ALTERNATIVE FUNCTION TO FUNCTION OF BLOOD COAGULATION FACTOR VIII

1 claim: 1 independent, 0 dependent

1
Zastrzeżenia patentowe 1. Wielospecyficzne przeciwciało, które funkcjonalnie zastępuje czynnik krzepliwości krwi VIII, zawierające pierwszy polipeptyd zawierający pierwsze miejsce wiązania antygenu, które rozpoznaje czynnik krzepliwości krwi IX i/lub aktywowany czynnik krzepliwości krwi IX i trzeci polipeptyd zawierający trzecie miejsce wiązania antygenu, które rozpoznaje czynnik krzepliwości krwi IX i/lub aktywowany czynnik krzepliwości krwi IX, jak również drugi polipeptyd zawierający drugie miejsce wiązania antygenu, które rozpoznaje czynnik krzepliwości krwi X i czwarty polipeptyd zawierający czwarte miejsce wiązania antygenu, które rozpoznaje czynnik krzepliwości krwi X, gdzie zarówno pierwszy polipeptyd, jak i trzeci polipeptyd zawiera miejsce wiązania antygenu łańcucha H lub łańcucha L przeciwciała przeciw odpowiednio czynnikowi krzepliwości krwi IX lub aktywowanemu czynnikowi krzepliwości krwi 167 IX; i zarówno drugi polipeptyd, jak i czwarty polipeptyd zawiera odpowiednio miejsce wiązania antygenu łańcucha H lub łańcucha L przeciwciała przeciw czynnikowi krzepliwości krwi X, w którym (a) miejsce wiązania antygenu pierwszego polipeptydu zawiera miejsce wiązania antygenu, które zawiera regiony CDR łańcucha H składające się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (a1) do (a11) i miejsce wiązania antygenu drugiego polipeptydu zawiera miejsce wiązania antygenu, które zawiera regiony CDR łańcucha H składające się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (b1) do (b11):(a1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 75, 76 i 77 (regiony CDR łańcucha H Q1);(a2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 78, 79 i 80 (regiony CDR łańcucha H Q31);(a3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 81, 82 i 83 (regiony CDR łańcucha H Q64);(a4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 84, 85 i 86 (regiony CDR łańcucha H Q85);(a5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 87, 88 i 89 (regiony CDR łańcucha H Q153);(a6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 90, 91 i 92 (regiony CDR łańcucha H Q354);(a7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 93, 94 i 95 (regiony CDR łańcucha H Q360);(a8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 96, 97 i 98 (regiony CDR łańcucha H Q405);(a9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 99, 100 i 101 (regiony CDR łańcucha H Q458);(a10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 102, 103 i 104 (regiony CDR łańcucha H Q460);(a11) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 105, 106 i 107 (regiony CDR łańcucha H Q499);(b1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 108, 109 i 110 (regiony CDR łańcucha H J232);(b2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 111, 112 i 113 (regiony CDR łańcucha H J259);(b3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 114, 115 i 116 (regiony CDR łańcucha H J268);168 (b4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 117, 118 i 119 (regiony CDR łańcucha H J300);(b5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 120, 121 i 122 (regiony CDR łańcucha H J321);(b6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 123, 124 i 125 (regiony CDR łańcucha H J326);(b7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 126, 127 i 128 (regiony CDR łańcucha H J327);(b8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 129, 130 i 131 (regiony CDR łańcucha H J339);(b9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 132, 133 i 134 (regiony CDR łańcucha H J344);(b10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 135, 136 i 137 (regiony CDR łańcucha H J346);i (b11) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha H o odpowiednio SEQ ID NO: 174, 175 i 176 (regiony CDR łańcucha H J142);lub (b) miejsce wiązania antygenu pierwszego polipeptydu zawiera miejsce wiązania antygenu, które zawiera region zmienny łańcucha H składający się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (a1) do (a11) i miejsce wiązania antygenu drugiego polipeptydu zawiera miejsce wiązania antygenu, które zawiera region zmienny łańcucha H składający się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (b1) do (b11): (a1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 35 (region zmienny łańcucha H Q1);(a2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 36 (region zmienny łańcucha H Q31);(a3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 37 (region zmienny łańcucha H Q64);(a4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 38 (region zmienny łańcucha H Q85);(a5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 39 (region zmienny łańcucha H Q153);(a6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 40 (region zmienny łańcucha H Q354);(a7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 41 (region zmienny łańcucha H Q360);(a8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 42 (region zmienny łańcucha H Q405);(a9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 43 (region zmienny łańcucha H Q458);(a10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 44 (region zmienny łańcucha H Q460);169 (a11) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 45 (region zmienny łańcucha H Q499);(b1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 46 (region zmienny łańcucha H J232);(b2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 47 (region zmienny łańcucha H J259);(b3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 48 (region zmienny łańcucha H J268);(b4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 49 (region zmienny łańcucha H J300);(b5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 50 (region zmienny łańcucha H J321);(b6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 51 (region zmienny łańcucha H J326);(b7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 52 (region zmienny łańcucha H J327);(b8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 53 (region zmienny łańcucha H J339);(b9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 54 (region zmienny łańcucha H J344);(b10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 55 (region zmienny łańcucha H J346);i (b11) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha H o SEQ ID NO: 172 (region zmienny łańcucha H J142), gdzie (a) miejsca wiązania antygenu zawarte w trzecim polipeptydzie i czwartym polipeptydzie zawierają miejsce wiązania antygenu, które zawiera CDR łańcucha L składające się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (c1) do (c10): (c1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 138, 139 i 140 (CDR łańcucha L L2);(c2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 141, 142 i 143 (CDR łańcucha L L45);(c3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 144, 145 i 146 (CDR łańcucha L L248);(c4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 147, 148 i 149 (CDR łańcucha L L324);(c5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 150, 151 i 152 (CDR łańcucha L L334);(c6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 153, 154 i 155 (CDR łańcucha L L377);(c7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 156, 157 i 158 (CDR łańcucha L L404);170 (c8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 159, 160 i 161 (CDR łańcucha L L406);(c9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 137, 138 i 139 (CDR łańcucha L L408);i (c10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencje aminokwasowe CDR 1, 2 i 3 łańcucha L o odpowiednio SEQ ID NO: 177, 178 i 179 (CDR łańcucha L L180);lub (b) miejsca wiązania antygenu zawarte w trzecim polipeptydzie i czwartym polipeptydzie zawierają miejsce wiązania antygenu, które zawiera region zmienny łańcucha L składający się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranych spośród następujących (c1) do (c10): (c1) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 56 (region zmienny łańcucha L L2);(c2) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 57 (region zmienny łańcucha L L45);(c3) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 58 (region zmienny łańcucha L L248);(c4) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 59 (region zmienny łańcucha L L324);(c5) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 60 (region zmienny łańcucha L L334);(c6) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 61 (region zmienny łańcucha L L377);(c7) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 62 (region zmienny łańcucha L L404);(c8) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 63 (region zmienny łańcucha L L406);(c9) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 64 (region zmienny łańcucha L L408);i (c10) miejsce wiązania antygenu zawierające sekwencję aminokwasową regionu zmiennego łańcucha L o SEQ ID NO: 173 (region zmienny łańcucha L L180), przy czym funkcjonalne zastąpienie czynnika krzepliwości krwi VIII wynika z większej aktywności pobudzania wytwarzania aktywowanego czynnika krzepliwości krwi X (F.Xa) niż aktywność bispecyficznego przeciwciała hA69KQ/hB26-PF/hAL-AQ, zawierającego łańcuch H zawierający odpowiednio SEQ ID NO: 165 i 166 oraz wspólny łańcuch L zawierający SEQ ID NO: 167. 2. Wielospecyficzne przeciwciało według zastrzeżenia 1, w którym (a) pierwszy i drugi polipeptyd zawiera ponadto region stały łańcucha H przeciwciała, a trzeci i czwarty polipeptyd zawiera region stały łańcucha L przeciwciała;lub 171 (b) polipeptydy pierwszy i drugi zawierają region stały łańcucha H przeciwciała, a polipeptydy trzeci i czwarty zawierają region stały łańcucha L przeciwciała oraz gdzie trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L. 3. Wielospecyficzne przeciwciało według zastrzeżenia 2, gdzie (a) pierwszy polipeptyd zawiera region stały łańcucha H przeciwciała składający się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranej z grupy obejmującej następujące (d1) do (d6) lub grupy obejmującej następujące (d7) do (d9) i drugi polipeptyd zawiera region stały łańcucha H przeciwciała składający się z dowolnej z sekwencji aminokwasowych wybranej z grupy innej niż wyżej wspomniany pierwszy polipeptyd: (d1) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 65 (d2) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 66 (d3) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 67 (d4) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 68 (d5) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 69 (d6) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 70 (d7) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 71 (d8) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 72 (d9) region stały łańcucha H o SEQ ID NO: 73 (b) polipeptydy trzeci i czwarty zawierają region stały łańcucha L przeciwciała składający się z następującej sekwencji aminokwasowej: (e) region stały łańcucha L o SEQ ID NO: 74;lub (c) pierwszy polipeptyd zawiera dowolny łańcuch H przeciwciała wybrany spośród następujących (a1) do (a14), drugi polipeptyd zawiera dowolny łańcuch H przeciwciała wybrany spośród następujących (b1) do (b12), a trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd zawierają dowolny łańcuch L przeciwciała wybrany spośród następujących (c1) do (c10): (a1) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 1;(a2) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 2;(a3) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 3;(a4) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 10;(a5) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 11;(a6) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 12;(a7) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 13;(a8) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 14;(a9) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 15;(a10) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 16;(a11) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 17;(a12) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 18;172 (a13) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 19;(a14) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 20;(b1) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 4;(b2) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 5;(b3) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 6;(b4) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 7;(b5) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 21;(b6) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 22;(b7) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 23;(b8) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 24;(b9) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 25;(b10) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 26;(b11) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 27;(b12) łańcuch H przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 170;(c1) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 8;(c2) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 9;(c3) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 28;(c4) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 29;(c5) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 30;(c6) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 31;(c7) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 32;(c8) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 33;(c9) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 34;i (c10) łańcuch L przeciwciała składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 171. 4. Bispecyficzne przeciwciało według dowolnego spośród następujących (a) do (u): (a) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 1, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 4 173 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 9;(b) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 1, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 5 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 9;(c) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 2, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 6 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 8;(d) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 3, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 7 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 9;(e) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 10, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 6 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 30;(f) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 10, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 7 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 33;(g) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 11, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 4 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 33;(h) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 11, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 5 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 30;(i) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 12, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 21 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 33;(j) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 13, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 22 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 29;(k) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 14, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 21 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 33;174 (l) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 15, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 23 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 30;(m) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 16, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 21 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 28;(n) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 17, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 27 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 34;(o) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 18, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 25 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 30;(p) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 19, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 24 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 30;(q) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 19, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 24 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 31;(r) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 19, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 27 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 28;(s) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 20, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 25 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 32;(t) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 20, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 26 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 31;i (u) bispecyficzne przeciwciało, w którym pierwszy polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 12, drugi polipeptyd stanowi łańcuch H składający się z sekwencji aminokwasowej o SEQ ID NO: 170 oraz trzeci polipeptyd i czwarty polipeptyd stanowią wspólny łańcuch L o SEQ ID NO: 171. 5. Kwas nukleinowy kodujący wielospecyficzne przeciwciało według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 3 lub bispecyficzne przeciwciało według zastrzeżenia 4. 175 6. Wektor, do którego wstawiono kwas nukleinowy według zastrzeżenia 5. 7. Komórka zawierająca kwas nukleinowy według zastrzeżenia 5 lub wektor według zastrzeżenia 6. 8. Sposób wytwarzania wielospecyficznego przeciwciała według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 3 lub bispecyficznego przeciwciała według zastrzeżenia 4 przez hodowanie komórki według zastrzeżenia 7. 9. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca wielospecyficzne przeciwciało według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 3 lub bispecyficzne przeciwciało według zastrzeżenia 4 i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik. 10. Kompozycja według zastrzeżenia 9, która jest kompozycją farmaceutyczną do zastosowania do zapobiegania i/lub leczenia krwawienia, choroby towarzyszącej krwawieniu lub choroby wywołanej przez krwawienie. 11. Kompozycja do zastosowania według zastrzeżenia 10, gdzie krwawienie, chorobę towarzyszącą krwawieniu lub chorobę wywołaną przez krwawienie stanowi choroba, która rozwija się i/lub postępuje w wyniku zmniejszenia lub niedoboru aktywności czynnika krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanego czynnika krzepliwości krwi VIII. 12. Kompozycja do zastosowania według zastrzeżenia 11, gdzie (a) chorobą, która rozwija się i/lub postępuje w wyniku zmniejszenia lub niedoboru aktywności czynnika krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanego czynnika krzepliwości krwi VIII jest hemofilia A;(b) chorobą, która rozwija się i/lub postępuje w wyniku zmniejszenia lub niedoboru aktywności czynnika krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanego czynnika krzepliwości krwi VIII jest choroba, w której obserwuje się pojawienie inhibitora przeciw czynnikowi krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanemu czynnikowi krzepliwości krwi VIII;(c) chorobą, która rozwija się i/lub postępuje w wyniku zmniejszenia lub niedoboru aktywności czynnika krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanego czynnika krzepliwości krwi VIII jest hemofilia nabyta;lub (d) chorobą, która rozwija się i/lub postępuje w wyniku zmniejszenia aktywności czynnika krzepliwości krwi VIII i/lub aktywowanego czynnika krzepliwości krwi VIII jest choroba von Willebranda. 13. Zestaw zawierający co najmniej wielospecyficzną cząsteczkę wiążącą antygen według dowolnego z zastrzeżeń 1 do 3 lub bispecyficzne przeciwciało według zastrzeżenia 4 lub kompozycję według dowolnego z zastrzeżeń 9 do 12. 176 FIG. 1 177 FIG. 2 PRZECIWCIAŁO PRZECIW LUDZKIEMU F.X OKOŁO 200 RODZAJÓW PRZECIWCIAŁO PRZECIW LUDZKIEMU F.IXa OKOŁO 200 RODZAJÓW —--------1 * + TWORZENIE WEKTORÓW EKSPRESYJNYCH, PRZEJŚCIOWA EKSPRESJA PRZY UŻYCIU KOMÓREK ZWIERZĘCYCH (40000 LUB WIĘKSZA LICZBA KOMBINACJI) BISPECYFICZNE PRZECIWCIAŁO BADANIE PRZESIEWOWE POD KĄTEM AKTYWNOŚCI POBUDZANIA WYTWARZANIA F.Xa I DZIAŁANIA HAMUJĄCEGO F.Xazę PONADTO, PODSTAWIENIA AMINOKWASOWE JEŚLI KONIECZNE 178 FIG. 3 hA69-KQ/hB26~PF/hAL-AQ Ql-G4k/J268-G4h/L45-k Q31~z7/J326-zl07/L2-k Q64-z55/J344~zlO7/L45-k Ql-G4k/J321~G4h/L45-k ί .. - i r j Π..........f ""“j ""i Μ^ΗΜΗΝΙ CL AKTYWNOŚĆ POBUDZANIA WYTWARZANIA F.Xa iOOpg/mL BlGjig/mL □ Ipg/mt 179 100/jg/mL lit lOjug/mL □ Ijug/mL bA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ Ql-G4k/J268~64h/L45«k Q31»z7/J326-zl07/L2~k Ql-G4k/J321-G4h/L45 k Q64-z55/J344«zl07/L45-k Q85-G4k/J268-G4h/L406’k Q85»G4k/J32ł-G4h/L334-k G64-z7/J344-zl07/L406-k Q.64«z7/J326-złO7/L334-k G153-G4k/J142-G4h/L18O-k Q405-G4k/J232‘G4h/L248~k Q36O*G4k/J232G4h/L406*k Q153«G4k/J232~G4h/L406«k G4S8-2l06/J346-zl07/L408-k Q360-zll8/J300zl07/L334-k Q499-złł8/J327-zl07/L377-k Q499»zl21/J327"Złl9/L404~k G499‘Zl21/J339-zll9/L377~k Q499-zll8/J346-zlO7/L248-k G354-zl06/J259-zl07/L324-k Q460-z 121/J327-z 119/L334-k Q499-zll8/J327-zl07/L334-k AKTYWNOŚĆ POBUDZANIA WYTWARZANIA F.Xa FIG. 4 180 ϋ 100 μδ/ηιΐ a 10 μΒ/ηιΙ. hA69-KQ/h B26-PF/hAL-AQ Ql-G4k/J268-G4h/L45-k Q31-z7/J326-zl07/L2-k Ql-G4k/J321-G4h/L45-k Q64-z55/J344-zl07/L45-k Q85-G4k/J268-G4h/L406-k Q85-G4k/J321-G4h/L334-k Q64-z7/J344-zl07/L406-k Q64-z7/J326-zl07/L334-k Q153-G4k/J142-G4h/L180-k Q405-G4k/J232-G4h/L248-k Q360-G4k/J232-G4h/L406-k Q153-G4k/J232-G4h/L406-k Q458-zl06/J346-zl07/L408-k Q360-zll8/J300-zl07/L334-k Q499-zll8/J327-zl07/L377-k Q499-zl21/J327-zll9/L404-k Q499-zl21/J339~zll9/L377-k Q499-zll8/J346-zl07/L248-k Q354-zl06/J259-zl07/L324-k Q460-zl21/J327-zll9/L334-k Q499-zll8/J327-zl07/L334-k -0,3 -0,2 -0,1 0 0,1 0,2 0,3 DZIAŁANIE HAMUJĄCE F.Xazę FIG. 5 181 182 183 184

2,541 paragraphs in 34 sections, as filed

Technical field The invention relates to multispecific antigen binding molecules that functionally replace blood coagulation factor VIII, an enzyme boosting cofactor, and pharmaceutical compositions containing such a molecule as active agent.

Background Art [0002] Hemophilia A consists of abnormal bleeding caused by a hereditary limitation or deficiency in the function of blood coagulation factor VIII (F.VIII). Patients with haemophilia A are usually given F.VIII for bleeding (on demand). In recent years, F.VIII preparations have also been administered prophylactically to prevent bleeding (prophylactic administration; Non-patent Documents 1 and 2). The half-life of F.VIII preparations in the blood is approximately 12 to 16 hours. Therefore, for continuous prophylaxis, F.VIII preparations are administered to patients three times a week (Non-patent Documents 3 and 4). When administered on demand, F.VIII preparations are also given as needed at regular intervals to prevent further bleeding. In addition, F.VIII preparations are administered intravenously. Therefore, there is a strong demand for pharmaceuticals with a lower loading than F.VIII preparations.

[0003] Occasionally anti-FVIII antibodies (inhibitors) develop in patients with hemophilia. Such inhibitors abolish the effects of F.VIII preparations. If bleeding occurs in patients who have developed inhibitors (patients with inhibitors), bypass preparations are given. The mechanisms of their action are not dependent on the function of F.VIII, that is, on the function of catalyzing the activation of blood coagulation factor X (FX) by activated blood coagulation factor IX (F.IXa). Therefore, in some cases, bypass preparations cannot sufficiently stop bleeding. Therefore, there is a strong need for pharmaceuticals that are not affected by the presence of inhibitors and which can functionally replace F.VIII.

[0004] As a way to solve the problem, antibodies that functionally replace F.VIII have recently been disclosed and the use of these antibodies (Patent Documents 1, 2 and

3). Antibodies may be effective for acquired haemophilia, in which anti-F.VIII autoantibodies are present, and for von Willebrand disease caused by an abnormality or deficiency of von Willebrand factor (vWF) function, but the functional replacement of F.VIII has not always been sufficient. Therefore, as pharmaceuticals exhibiting a strong haemostatic effect, antibodies with a higher F.VIII functional replacement activity than the above-mentioned antibodies were desired.

Prior art documents [Patent document] [0005] [Patent document 1] WO 2005/035754 [Patent document 2] WO 2005/035756 [Patent document 3] WO 2006/109592 [Non-patent document] [0006] [Non-patent document 1] Blood 58, 1-13 (1981) [Non-patent document 2] Nature 312, 330-337 (1984) [Non-patent document 3] Nature 312, 337-342 (1984) [Non-patent document 4] Biochim.Biophys.Acta 871, 268 -278 (1986)

Summary of the Invention [Problems to be Solved by the Invention] [0007] The object of the present invention is to provide multispecific antigen binding molecules that functionally replace F.VIII, a cofactor enhancing enzymatic reactions.

[Means to solve the problem] [0008] As a result of specialized research, the inventors have succeeded in developing bispecific antibodies having better F.Xa stimulating activity than known antibodies from various bispecific antibodies that bind specifically to both F.IX / F.IXa and FX, and replace the cofactor function of F.VIII, i.e. the function of stimulating FX activation by F.IX (function of stimulating the production of F.Xa).

[0009] In addition, the inventors have succeeded in developing positions in the amino acid sequences of bispecific antibodies having F.VIII functional replacement activity, which positions are important for improving the activity of these antibodies to stimulate F.Xa production, and thus have successfully obtained bispecific antibodies, in which the activity of functional replacement of F.VIII is further increased due to the replacement of these amino acids. They also managed to obtain bispecific antibodies that not only have a high functional activity for F.VIII replacement, but also a small inhibitory effect on F.Xase. It is very difficult to reconcile these two properties.

[0010] The present invention relates to a multispecific antibody, which functionally replaces coagulation factor VIII, containing the first polypeptide containing the first antigen binding site, which recognizes coagulation factor IX and / or activated coagulation factor IX and a third polypeptide having a third antigen binding site, which recognizes coagulation factor IX and / or activated coagulation factor IX as well as a second polypeptide containing a second antigen binding site, which recognizes the coagulation factor X and the fourth polypeptide containing the fourth antigen binding site, which recognizes the coagulation factor X where both the first polypeptide and the third polypeptide comprises an H chain or L chain antigen binding site of the antibody against coagulation factor IX or activated coagulation factor IX, respectively; and both the second polypeptide, as well as the fourth polypeptide comprises an H chain or L chain antigen binding site of an anti-clotting factor X antibody, respectively, wherein (a) the antigen binding site of the first polypeptide comprises an antigen binding site, which contains the H chain CDRs consisting of any of the amino acid sequences selected from (a1) to (a11) and the antigen binding site of the second polypeptide comprises an antigen binding site, which contains the H chain CDRs consisting of any of the amino acid sequences selected from (b1) to (b11):

(a1) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 75, 76 and 77 respectively (H chain CDR regions Q1);

(a2) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs 78, 79 and 80, respectively (Q31 H chain CDRs);

(a3) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 81, 82 and 83, respectively (Q64 H chain CDR regions);

(a4) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 84, 85 and 86, respectively (Q85 H chain CDRs);

(a5) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 87, 88 and 89, respectively (H chain CDR regions Q153);

(a6) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 90, 91 and 92 respectively (Q354 H chain CDRs);

(a7) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 93, 94 and 95, respectively (H chain CDR regions Q360);

(a8) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs 96, 97 and 98, respectively (H chain CDR regions Q405);

(a9) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 99, 100 and 101, respectively (H chain CDR regions Q458);

(a10) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 102, 103 and 104, respectively (H chain CDR regions Q460);

(a11) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 105, 106 and 107, respectively (H chain CDR regions Q499);

(b1) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 108, 109 and 110, respectively (J chain CDR regions J232);

(b2) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs 111, 112 and 113, respectively (H chain CDR regions J259);

(b3) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs 114, 115 and 116, respectively (H chain CDR regions J268);

(b4) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 117, 118 and 119 respectively (H chain CDR regions J300);

(b5) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 120, 121 and 122, respectively (H chain CDR regions J321);

(b6) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 123, 124 and 125, respectively (J326 H chain CDRs);

(b7) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 126, 127 and 128, respectively (J327 H chain CDRs);

(b8) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 129, 130 and 131, respectively (H chain CDR regions J339);

(b9) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 132, 133 and 134 respectively (H chain CDR regions of J344);

(b10) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 135, 136 and 137, respectively (H chain CDR regions J346); and (b11) an antigen binding site comprising the CDR amino acid sequences

1 2 and 3 of the H chain with SEQ ID NO: 174, respectively, 175 and 176 (J142 H chain CDRs); or (b) the antigen binding site of the first polypeptide comprises an antigen binding site, which contains the H chain variable region consisting of any of the amino acid sequences selected from (a1) to (a11), and the antigen binding site of the second polypeptide comprises an antigen binding site, which comprises the H chain variable region consisting of any of the amino acid sequences selected from (b1) to (b11):

(a1) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 35 (H chain variable region Q1);

(a2) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 36 (H chain variable region Q31); (a3) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 37 (Q64 chain variable region); (a4) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 38 (Q85 H chain variable region); (a5) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 39 (H chain variable region Q153); (a6) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 40 (H chain variable region Q354); (a7) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 41 (H chain variable region Q360); (a8) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 42 (Q405 H chain variable region); (a9) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 43 (Q458 H chain variable region); (a10) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 44 (Q460 H chain variable region);

(a11) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 45 (H chain variable region Q499);

(b1) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 46 (J232 H chain variable region); (b2) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 47 (H chain variable region J259); (b3) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 48 (H2626 chain variable region); (b4) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 49 (H300 chain variable region); (b5) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 50 (H chain variable region J321); (b6) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 51 (J326 H chain variable region); (b7) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 52 (J327 H chain variable region); (b8) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 53 (H chain variable region J339); (b9) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 54 (J344 H chain variable region);

(b10) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 55 (H chain variable region J346); and (b11) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the H chain variable region of SEQ ID NO: 172 (H chain variable region J142), wherein (a) the antigen binding sites contained in the third polypeptide and the fourth polypeptide comprise an antigen binding site, which contains the L chain CDRs consisting of any of the amino acid sequences selected from (c1) to (c10):

(c1) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 138, 139 and 140 respectively (LR chain L2 CDR);

(c2) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 141, 142 and 143 respectively (L chain CDR region L45);

(c3) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs 144, 145 and 146 respectively (L248 L chain CDR);

(c4) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 147, 148 and 149 respectively (L chain L324 CDR region);

(c5) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 150, 151 and 152, respectively (L chain CDR region L334);

(c6) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 153, 154 and 155, respectively (L377 chain L region CDR);

(c7) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 156, 157 and 158, respectively (L chain CDR region L404);

(c8) an antigen binding site comprising the L chain amino acid CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 159, 160 and 161, respectively (L chain CDR region L406);

(c9) antigen binding site containing CDR 1 amino acid sequences, 2 and 3 of the L chain with SEQ ID NO: 137, respectively, 138 and 139 (CDR region of the L408 L chain); and (c10) an antigen binding site comprising the CDR 1 amino acid sequences, 2 and 3 of the L chain with SEQ ID NO: 177, respectively, 178 and 179 (CDR region of the L180 chain); or (b) the antigen binding sites contained in the third polypeptide and the fourth polypeptide comprise an antigen binding site, which contains an L chain variable region consisting of any of the amino acid sequences selected from (c1) to (c10):

(c1) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 56 (L2 chain variable region);

(c2) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 57 (L45 chain variable region);

(c3) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 58 (L248 L chain variable region);

(c4) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 59 (L324 L chain variable region);

(c5) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 60 (L334 chain variable region);

(c6) an antigen binding site comprising the L chain variable region amino acid sequence of SEQ ID NO: 61 (L377 L chain variable region);

(c7) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 62 (L404 L chain variable region);

(c8) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 63 (L chain variable region L406);

(c9) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 64 (L408 L chain variable region); and (c10) an antigen binding site comprising the amino acid sequence of the L chain variable region of SEQ ID NO: 173 (L180 L chain variable region), where the functional replacement of the coagulation factor VIII results from a greater stimulation activity of the production of activated coagulation factor X (F.Xa) than the activity of the bispecific antibody hA69KQ / hB26-PF / hAL-AQ, containing the H chain comprising SEQ ID NO: 165 and 166, respectively, and the common L chain containing SEQ ID NO: 167.

The invention further relates to a bispecific antibody according to any of the following (a) to (u):

(a) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 9;

(b) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 9;

(c) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 8;

(d) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 9;

(e) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 30;

(f) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 33;

(g) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 33;

(h) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 30;

(i) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 33;

(j) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 29;

(k) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 33;

(l) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 30;

(m) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 28;

(n) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 34;

(o) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25, and the third polypeptide and fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 30;

(p) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 30;

(q) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 31;

(r) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 28;

(s) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain o SEQ ID NO: 32;

(t) bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain of SEQ ID NO: 31; and (u) a bispecific antibody, wherein the first polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, the second polypeptide is an H chain consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 170, and the third polypeptide and the fourth polypeptide are a common L chain of SEQ ID NO: 171.

[0011] In particular, the present disclosure relates to multispecific antigen binding molecules that functionally replace F.VIII, a cofactor enhancing enzymatic reactions, and pharmaceutical compositions containing such a molecule as an active agent, and in particular relates to:

[1] multispecific antigen binding molecule, functionally replacing coagulation factor VIII, which contains the first antigen binding site recognizing coagulation factor IX and / or activated coagulation factor IX and the second antigen binding site recognizing coagulation factor X, where the functional replacement of blood coagulation factor VIII results from a greater stimulation activity of the production of activated blood coagulation factor X (F.Xa) than the activity of bispecific antibody (hA69KQ / hB26-PF / hAL-AQ), comprising an H chain comprising SEQ ID NO: 165 and 166, respectively, and a common L chain comprising SEQ ID NO: 167;

[2] a multispecific antigen binding molecule according to [1], which contains the first polypeptide containing the first antigen binding site, which recognizes coagulation factor IX and / or activated coagulation factor IX and a third polypeptide having a third antigen binding site, which recognizes coagulation factor IX and / or activated coagulation factor IX as well as a second polypeptide containing a second antigen binding site, which recognizes the coagulation factor X and the fourth polypeptide containing the fourth antigen binding site, which recognizes the coagulation factor X;

[3] a multispecific antigen binding molecule according to [2], wherein both the first polypeptide and the third polypeptide comprise an H chain or L chain antigen binding site of an anti-coagulation factor IX or activated coagulation factor IX, respectively; and both the second polypeptide and the fourth polypeptide comprise an H chain or L chain antigen binding site of an anti-clotting factor X antibody;

[4] a multispecific antigen binding molecule according to [3], wherein the antigen binding site of the first polypeptide comprises an antigen binding site, which contains an H chain CDR consisting of any of the amino acid sequences selected from (a1) to (a11), or an antigen-binding site functionally equivalent thereto, and the antigen binding site of the second polypeptide comprises an antigen binding site comprising an H chain CDR consisting of any of the amino acid sequences selected from (b1) to (b11), or an antigen binding site functionally equivalent thereto:

(a1) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 75, 76 and 77 respectively (H chain CDR regions Q1);

(a2) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 78, 79 and 80, respectively (Q31 H chain CDRs);

(a3) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 81, 82 and 83, respectively (Q64 H chain CDR regions);

(a4) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 84, 85 and 86, respectively (Q85 H chain CDRs);

(a5) an antigen binding site comprising the H chain CDR 1, 2 and 3 amino acid sequences of SEQ ID NO: 87, 88 and 89, respectively (H chain CDR regions Q153);