MX378336B

Antibodies that bind csf1r

Abstract

The present invention relates to antibodies that bind to CSF1R. Antibody heavy chains and light chains that are capable of forming antibodies that bind to CSF1R are also provided. Polynucleotides encoding antibodies to CSF1R are provided. Polynucleotides that encode antibody heavy chains and light chains are also provided. Treatment methods using antibodies to CSF1R are provided. The methods include, but are not limited to, methods for treating rheumatoid arthritis, bone loss, and multiple sclerosis.

MX378336B, drawing sheet 1 — Sheet 1 of 123

Term

6.1 yearsleft in the term

Expires 1 November 2032.

23 claims: 23 independent, 0 dependent

1
Un anticuerpo aislado caracterizado porque comprende una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO:15, una CDR2 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO:16, y una CDR3 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 17;y comprende una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC) que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 18, una CDR2 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 19, y una CDR3 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO:20, en donde el anticuerpo se une a receptor de factor estimulante de colonias 1 (CSF1R) humano.
2
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo bloquea unión de factor estimulante de colonias 1 (CSF-1) humano e interleucina 34 (IL-34) humana a CSF1R humano.
3
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgGl humana.
4
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgG2 humana. IMPI 125 INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL
5
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgG4 humana.
6
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la región constante de IgG4 humana comprende una mutación S241P.
7
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada es una cadena pesada de longitud completa y la cadena ligera es una cadena ligera de longitud completa.
8
El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la cadena pesada es una cadena pesada de longitud completa y la cadena ligera es una cadena ligera de longitud completa. 9, Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1 y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
9
10. Un anticuerpo aislado caracterizado porque comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO:39 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO:46, en donde el anticuerpo se une a CSF1R humano.
10
11. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el anticuerpo bloquea unión de CSF-1 humano e IL-34 humana a CSF1R humano. IMPI 126 INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL
11
12. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgGl humana.
12
13. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgG2 humana.
13
14. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cadena pesada comprende una región constante de IgG4 humana.
14
15. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la región constante de IgG4 humana comprende una mutación S241P.
15
16. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cadena pesada es una cadena pesada de longitud completa y la cadena ligera es una cadena ligera de longitud completa.
16
17. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la cadena pesada es una cadena pesada de longitud completa y la cadena ligera es una cadena ligera de longitud completa.
17
18. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 10 y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
18
19. Un anticuerpo aislado caracterizado porque IMPI 127 INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de SEQ ID NO:53 y una cadena ligera que comprende la secuencia de SEQ ID NO:60, en donde el anticuerpo se une a CSF1R humano.
19
20. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo bloquea unión de CSF-1 humano e IL-34 humana a CSF1R humano.
20
21. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 19 y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
21
22. Un anticuerpo aislado caracterizado porque comprende una cadena pesada que consiste en la secuencia de SEQ ID NO:53 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 60, en donde el anticuerpo se une a CSF1R humano.
22
23. El anticuerpo de conformidad' con la reivindicación 22, caracterizado porque el anticuerpo bloquea unión de CSF-1 humano e IL-34 humana a CSF1R humano.
23
24. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 23 y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

Independent claims23

740 paragraphs in 166 sections, as filed

SUBDIRECTORA DIVISIONAL DE EXAMEN DE FONDO DE PATENTES ÁREAS BIOTECNOLÓGICA, FARMACÉUTICA Y QUÍMICA

EMELIA HERNÁNDEZ PRIEGO

Cadena Original:

EMELIA HERNANDEZ PRIEGO|00001000000405397295|Servicio de Administración

Tributar¡a|56||MX/2021/3612|MX/a/2017/015045|Título de patente normal con divisional PCT|1220|RRGO|Pág(s) |yimO3ybPEdbdWNk1/xuDwy4rLil=

Sello Digital:

hDzFGDGr0DQ4W1xmNYJR7vhiuqmYKcV0r0AmfeAJd+gPbuCz5K7ILHbTttqzN3vLAWIxAazVQ8yQtar8HtxajA8Sfh XfJD3GpkwXKdtAGvsl88qc7ohcj44E4iblgYV7fgAmfcSc0oWbMGNTYk1jHPZd4X4bOulaEyCGQ5pTxQeZ3TTEzDJ4 9MOqRR8haixNIKRfcKPYur6xd6P4NlyVW3owANPApO+OMhbEwhNQiTfiRDAzOCTRbdn4RqiyfkspEJ9bVsMwUM2sKQ xbQP/wAFWLn9pM8Dv6KHkUvAAr969SWQ5vgMGVH+OofnRhlN+nkvUhUvmfFGqFQsK6PI1vKQ==

Arenal No. 550, Pueblo Santa María Tepepan, Ciudad de México, C.P. 16020. CDMX Creatividad para el Bienestar , MX/2021/3612 www.gob.mx/impi

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

ANTICUERPOS QUE SE UNEN A FACTOR ESTIMULANTE DE COLONIAS 1 (CSF1R)

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Se proporcionan anticuerpos que se unen a CSF1R. También se proporcionan cadenas pesadas y cadenas ligeras de anticuerpo que son capaces de formar anticuerpos que se unen a CSF1R. Además, se proporcionan anticuerpos, cadenas pesadas y cadenas ligeras que comprenden una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) particulares. Se proporcionan polinucleótidos que codifican anticuerpos para CSF1R. También se proporcionan polinucleótidos que codifican cadenas pesadas o cadenas ligeras de anticuerpo. Se proporcionan métodos de tratamiento que usan anticuerpos para CSF1R. Los métodos incluyen, de modo no taxativo, métodos para tratar artritis reumatoide, pérdida de masa ósea y esclerosis múltiple.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El receptor de factor estimulante de colonias 1 (denominado en la presente CSF1R; también denominado en la técnica como FMS, FIM2, C-FMS y CD115) es un receptor transmembrana de paso único con un dominio extracelular (ECD, por sus siglas en inglés) de N-Terminal y un dominio intracelular de' C-Terminal con actividad tirosina cinasa. La unión de ligandos de CSF1 o el ligando de interleucina 34

Ref: 283278

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL (denominado en la presente IL34; Lin et ál., Science 320: 807-11 (2008)) a CSF1R provoca eventos de dimerización del receptor, regulación por incremento de la actividad tirosina cinasa de CSF1R, fosforilación de residuos de tirosina del CSF1R y señalización corriente abajo. Tanto CSF1 y IL34 estimulan la supervivencia, proliferación y diferenciación de monocitos en macrófagos.

Se ha encontrado que diversas células tumorales secretan CSF1, que activa los monocitos/células de macrófagos mediante CSF1R. Se ha demostrado que el nivel de CSF1 en tumores se correlaciona con el nivel de macrófagos asociados a tumores (TAM, por sus siglas en inglés) en el tumor. Se ha descubierto que los niveles más elevados de TAM se correlacionan con una prognosis menos precisa del paciente. Además, se ha encontrado que el CSF1 promueve el crecimiento tumoral y progreso en metástasis en, por ejemplo, xenoinjertos de cáncer de mama humano en ratones. Véase, por ej. , Paulus et ál. , Cáncer Res. 66: 4349-56 (2006). Además, el CSF1R parece desempeñar una función en la destrucción ósea osteolítica en metástasis ósea, ya que un inhibidor de molécula pequeña de actividad de tirosina cinasa del receptor suprime esa destrucción. Véase, por ej ., Ohno et ál. , Mol. Cáncer Ther. 5: 2634-43 (2006).

También se encontró que CSF1 y su receptor están involucrados en varias enfermedades inflamatorias y

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL autoinmunitarias. Véase, por ej., Hamilton, Nat. Rev. 8: 53344 (2008) . Por ejemplo, se encontró que las células endoteliales sinoviales de las articulaciones afectadas con artritis reumatoide producen CSF1, lo que sugiere la función 5 de CSF1 y su receptor en la enfermedad. El bloqueo de la actividad de CSF1R con un anticuerpo provoca efectos clínicos positivos en modelos de ratón de artritis, que incluyen una reducción de la destrucción de hueso y cartílago y una reducción de la cantidad de macrófagos. Véase, por ej . ,

Kitaura et ál. , J. Clin. Invest. 115: 3418-3427 (2005).

Las células maduras del linaje mieloide diferenciadas tales como macrófagos, células microgliales y osteoclastos contribuyen con la patología de varias enfermedades tales como artritis reumatoide, esclerosis múltiple y enfermedades de pérdida de masa ósea. Las células del linaje mieloide diferenciadas· derivan de intermedios de monocitos de sangre periférica. La estimulación de CSF1R contribuye al desarrollo de monocitos a partir de precursores de la médula ósea, a la proliferación y supervivencia de monocitos y a la diferenciación de monocitos de sangre periférica en células del linaje mieloide diferenciadas tales como macrófagos, células microgliales y osteoclastos. La estimulación de CSF1R por ende contribuye a la proliferación, supervivencia, activación y maduración de células del linaje mieloide diferenciadas, y en el contexto patológico, la estimulación de

CSF1R contribuye con la capacidad de células del linaje mieloide

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL diferenciadas para mediar la patología de enfermedades.

Por lo tanto, otros antagonistas de la señalización de CSF1R serían útiles para el tratamiento de varias enfermedades relacionadas con CSF1R, tales como cáncer, afecciones inflamatorias y enfermedades autonimunitarias.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Los presentes inventores han inventado un nuevo conjunto de anticuerpos, que incluyen anticuerpos humanizados, dirigidos contra el dominio extracelular del CSF1R humano (ECD de CSF1R) . Se realizó una biblioteca de expresión de fagos Fab a partir de bazos de ratones que se inmunizaron con una proteína de fusión del ECD-Fc de CSF1R humano. Se aislaron 1056 Fabs que expresan clones de fagos que se unen al ECD-Fc de CSF-1R mediante selección por afinidad de esta biblioteca. Cuando los 1056 Fabs se expresaron como proteína purificada, se encontró que 668 se unieron al ECD del CSF1R. De aquellos 668 Fabs de unión, solo 121 Fabs bloquearon la unión de CSF1 y/o IL34 a CSF1R. Únicamente 33 de esos Fabs bloquearon la unión de CSF1 e IL34 a CSF1R. Tras la secuenciación, los 33 Fabs representaron 19 conjuntos únicos de secuencias. Se eligieron once Fabs con afinidad subnanomolar por ECD del CSF1R humano para realizar anticuerpos quiméricos para estudiarse adicionalmente. En función de las afinidades de.unión a CSF1R de mono macaco y humano, el bloqueo de la unión de CSF1 y IL34 a CSF1R, y la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL inhibición de la fosforilación inducida por el ligando de CSF1R, se seleccionaron tres anticuerpos quiméricos para humanización y se realizaron dieciséis anticuerpos humanizados en función de esos tres anticuerpos quiméricos.

Catorce de los dieciséis anticuerpos humanizados retuvieron afinidades de unión subnanomolar por ECD del CSF1R de humano. Véase, por ej., la Tabla 5. Estos anticuerpos humanizados bloquean la unión de los ligandos CSF1 e IL34 a CSF1R de humano, y muchos también bloquean la unión de CSF1 e IL34 a CSF1R de mono macaco. Véase, por ej . , la Tabla 4.

Para el desarrollo terapéutico del fármaco, es beneficioso tener anticuerpos que se unen a antígenos humanos y de monos macaco con afinidad similar. Los tres anticuerpos quiméricos elegidos para humanización se seleccionaron en parte debido a que tenían afinidades de unión similares por ECD del CSF1R de humano y mono macaco. La mayoría de las versiones humanizadas de uno de los anticuerpos quiméricos, 0302, sin embargo, perdió considerable afinidad de unión por ECD del CSF1R de mono macaco tras la humanización, aunque retuvieron fuerte afinidad de unión por ECD del CSF1R de humano. Véase, por ej ., la Tabla 3. Las versiones humanizadas de 0301 y 0311 retuvieron de modo similar fuerte unión al ECD del CSF1R de humano y mono macaco, con diferencias de afinidad de unión por las dos especies de menos de alrededor de 2 veces.

En función de las afinidades de unión a CSF1R,

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL inhibición del ligando y posibilidad de inmunogenicidad, se seleccionaron tres anticuerpos humanizados para estudiar adicionalmente. Los tres anticuerpos humanizados se obtuvieron de los dos anticuerpos quiméricos que no perdieron considerablemente afinidad de unión a CSF1R de mono macaco tras la humanización. Esos tres anticuerpos humanizados inhiben la fosforilación inducida por el ligando de CSF1R humano, y también bloquean las respuestas de supervivencia y proliferación inducidas por el ligando en monocitos humanos principales. Véanse, por ej., las Tablas 6 y 7, y las Figuras 10 y 11. Por lo tanto, estos anticuerpos son útiles para tratar enfermedades que involucran, por ejemplo, las respuestas de supervivencia y proliferación inducidas por el ligando en monocitos humanos principales.

El bloqueo de las respuestas inducidas por CSF1R con un anticuerpo anti-CSFIR debería inhibir la proliferación, supervivencia, activación, maduración de células del linaje mieloide diferenciadas y atenuar su capacidad de mediar la patología de enfermedades. Además, el bloqueo de respuestas inducidas por CSF1R con un anticuerpo anti-CSFIR debería inhibir la diferenciación de intermedios monocitos de sangre periférica en células del linaje mieloide diferenciadas, disminuyendo la cantidad de células del linaje mieloide diferenciadas mediadoras de la patología.

Por consiguiente, los anticuerpos anti-CSFIR humanizados

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL descritos en la presente pueden usarse para tratar enfermedades crónicas con síntomas existentes inhibiendo la capacidad de células del linaje mieloide diferenciadas para mediar la patología de enfermedades. Los anticuerpos humanizados también pueden usarse para tratar enfermedades crónicas que son recidivantes y remisoras por naturaleza al inhibir el desarrollo de nuevas células del linaje mieloide mediadoras de la patología diferenciadas de monocitos de sangre periférica durante la fase de remisión de la enfermedad, atenuando así la cantidad de formación existente y de nueva formación de células mediadoras de la patología.

En algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo aislado que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, la cadena pesada y/o cadena ligera tienen la siguiente estructura.

En algunas modalidades, la cadena pesada comprende una secuencia que es al menos 90%, al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45. En algunas modalidades, la cadena ligera comprende una secuencia que es al menos 90%, al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52. En algunas modalidades, la cadena pesada comprende una secuencia que es al menos 90%, al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a una

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13, y 39 a 45, y la cadena ligera comprende una secuencia que es al menos 90%, al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52.

En algunas modalidades, las CDR1 HC, CDR2 HC y CDR3 HC comprenden un conjunto de secuencias que se seleccionan de: (a) las SEQ ID NOs: 15, 16 y 17; (b) las SEQ ID NOs: 21, 22 y 23; y (c) las SEQ ID NOs: 27, 28 y 29. En algunas modalidades, las CDR1 LC, CDR2 LC y CDR3 LC comprenden un conjunto de secuencias que se seleccionan de: (a) las SEQ ID NOs: 18, 19 y 20; (b) las SEQ ID NOs: 24, 25 y 26; y (c) las SEQ ID NOs: 30, 31 y 32.

En algunas modalidades, la cadena pesada comprende una CDR1 HC, CDR2 HC y CDR3 HC, donde la CDR1 HC, CDR2 HC y CDR3 HC comprenden un conjunto de secuencias que se seleccionan de: (a) las SEQ ID NOs: 15, 16 y 17; (b) las SEQ ID NOs: 21, 22 y 23; y (c) las SEQ ID NOs: 27, 28 y 29; y la cadena ligera comprende una CDR1 LC, CDR2 LC y CDR3 LC, donde la CDR1 LC, CDR2 LC y CDR3 LC comprenden un conjunto de secuencias que se seleccionan de: (a) las SEQ ID NOs: 18, 19 y 20; (b) las SEQ ID NOs: 24, 25 y 26; y (c) las SEQ ID NOs: 30, 31 y 32.

En algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo aislado, donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL una cadena ligera, donde el anticuerpo comprende: (a) una cadena pesada comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 9 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 10; (b) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 11 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100-s idéntica a la SEQ ID NO: 12; (c) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 13 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 14; (d) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 46; (e) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 40 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 46; (f) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

SEQ ID NO: 41 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 46; (g) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al 5 menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 39 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 47; (h) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la 10 SEQ ID NO: 40 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 47; (i) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 41 y una cadena 15 ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 47; y (j) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 42 y una cadena ligera que comprende una secuencia 20 que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 48; (k) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 42 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al 25 menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 49;

IMPI INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL (1) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 42 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 50; (m) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 43 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 48; (n) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 43 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 49; (o) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 43 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 50; (p) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 44 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 51; (q) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 44 y una cadena

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 52; (r) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 45 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 51; o (s) una cadena pesada que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 45 y una cadena ligera que comprende una secuencia que es al menos 95%, al menos 97%, al menos 99% o 100% idéntica a la SEQ ID NO: 52.

En algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo, donde el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde el anticuerpo comprende: (a) una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC, por sus siglas en inglés) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 15; una CDR2 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 16; y una CDR3 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 17, y una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC, por sus siglas en inglés) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 18, una CDR2 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 19, y una CDR3 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 20; (b) una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 21; una CDR2 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 22; y una CDR3 HC que tiene la

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL secuencia de SEQ ID NO: 23, y una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 24, una CDR2 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 25, y una CDR3 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 26; o (c) una cadena pesada que comprende una CDR1 de cadena pesada (HC) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: . 27; una CDR2 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 28; y una CDR3 HC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 29, y una cadena ligera que comprende una CDR1 de cadena ligera (LC) que tiene una secuencia de SEQ ID NO: 30, una CDR2 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 31, y una CDR3 LC que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 32.

En algunas modalidades, un anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde el anticuerpo comprende: (a) una cadena pesada que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 60; (b) una cadena pesada que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 61; o (c) una cadena pesada que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 58 y una cadena ligera que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 65. En algunas modalidades, un anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde el anticuerpo comprende: (a) una cadena pesada que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que consiste en la

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL secuencia de SEQ ID NO: 60; (b) una cadena pesada que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 53 y una cadena ligera que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 61; o (c) una cadena pesada que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 58 y 5 una cadena ligera que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 65.

En algunas modalidades, un anticuerpo es un anticuerpo humanizado. En algunas modalidades, un anticuerpo se selecciona de un Fab, un Fv, un scFv, un Fab' y un (Fab')2.

En algunas modalidades, un anticuerpo es un anticuerpo quimérico. En algunas modalidades, un anticuerpo se selecciona de una IgA, IgG e IgD. En algunas modalidades, un anticuerpo es una IgG. En algunas modalidades, un anticuerpo es una IgG4. En algunas modalidades, un anticuerpo es una

IgG4 que comprende una mutación S241P en al menos una región constante de cadena pesada de IgG4.

En algunas modalidades, un anticuerpo se une a CSF1R humano y/o se une a CSF1R de mono macaco. En algunas modalidades, un anticuerpo bloquea la unión del ligando a 20 CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo bloquea la unión de CSF1 y/o IL34 a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando. En algunas modalidades, un anticuerpo inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o inducida por 25 IL34. En algunas modalidades, un anticuerpo se une a CSF1R

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL humano con una afinidad (¾) de menos de 1 nM. En algunas modalidades, el anticuerpo inhibe las respuestas de supervivencia y/o proliferación de monocitos en presencia de CSF1 o IL34.

En algunas modalidades, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas modalidades, se proporciona un ácido nucleico aislado, donde el ácido nucleico aislado comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena pesada descrita anteriormente. En algunas modalidades, un acido nucleico aislado codifica una cadena ligera descrita anteriormente. En algunas modalidades, un acido nucleico aislado codifica una cadena pesada descrita anteriormente y una cadena ligera descrita anteriormente. En algunas modalidades, se proporciona una composición, donde la composición comprende un primer ácido nucleico que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena pesada descrita anteriormente, y un segundo ácido nucleico que comprende una secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena ligera descrita anteriormente. En algunas modalidades, se proporciona una célula hospedadora que comprende un acido nucleico o una composición descritos anteriormente. En algunas modalidades, una célula hospedadora es una célula hospedadora eucariota. En algunas modalidades, una célula hospedadora es una célula hospedadora de mamífero.

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DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL οο σ>

En algunas modalidades, una célula hospedadora se selecciona de una célula CHO, una célula 293, una célula NSO y una célula PER.C6. En algunas modalidades, una célula hospedadora es una célula 293-6E o una célula DG44.

En algunas modalidades, se proporcionan métodos para tratar la enfermedad que comprenden administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R. En algunas modalidades, se proporciona un método para tratar esclerosis múltiple que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R. En algunas modalidades, se proporciona un método para tratar artritis reumatoide que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R. En algunas modalidades, se proporciona un método para tratar la pérdida de masa ósea que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R. En algunas modalidades, la pérdida de masa ósea osteolítica se selecciona de osteoporosis, pérdida de masa ósea osteolítica inducida por metástasis y pérdida de masa ósea inducida por artritis reumatoide. En algunas modalidades, se proporciona un método para tratar cáncer que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R. En algunas modalidades, el cáncer se

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL selecciona de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer endometrial, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, cáncer de esófago, carcinoma de células escamosas, melanoma uveal, linfoma folicular, carcinoma de células renales, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer cerebral, cáncer pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de hígado, leucemia, linfoma, enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple, melanoma, astrocitoma, cáncer de estómago y adenocarcinoma pulmonar.

1θ En algunas modalidades, se proporciona un método para tratar una afección inflamatoria que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos que 15 se unen a CSF1R y composiciones que comprenden anticuerpos que se unen a CSF1R para usar en métodos de tratamiento de humanos o animales. En algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos que se unen a CSF1R y composiciones que comprenden anticuerpos que se unen a CSF1R para usar en un 20 método para tratar la artritis reumatoide en un humano o animal. En algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos que se unen a CSF1R y composiciones que comprenden anticuerpos que se unen a CSF1R para usar en un método para tratar la esclerosis múltiple en un humano o animal. En 25 algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos que se unen a

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CSF1R y composiciones que comprenden anticuerpos que se unen a CSF1R para usar en un método para tratar el cáncer en un humano o animal. En algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos que se unen a CSF1R y composiciones que comprenden anticuerpos que se unen a CSF1R para usar en un método para tratar una afección inflamatoria en un humano o animal.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Las FIGS. 1A-1C muestran una alineación de las regiones variables de cadena pesada humanizadas para cada uno de los anticuerpos humanizados Abl a Abl6, tal como se describe en el Ejemplo 4. Los residuos recuadrados son aminoácidos de la secuencia aceptora humana que se volvieron a cambiar al residuo de ratón correspondiente.

Las FIGS. 2A-2C muestran una alineación de las regiones variables de cadena ligera humanizada para cada uno de los anticuerpos humanizados Abl a Ab 16, tal como se describe en el Ejemplo 4. Los aminoácidos recuadrados son residuos de la secuencia aceptora humana que se volvieron a cambiar al residuo de ratón correspondiente.

Las FIGS. 3A-3C muestran curvas de unión para determinados anticuerpos humanizados que se unen al ECD de CSF1R humano, tal como se describe en el Ejemplo 5. La Figura 3A muestra curvas de unión para anticuerpos quiméricos (cAb) 0301 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301378336

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L0H1, h0301-L0H2, h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 3B muestra curvas de unión para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3, 0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302L1H1, h0302-L2Hl, h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La Figura 3C muestra curvas de unión para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 4A-4C muestran curvas de unión para determinados anticuerpos humanizados que se unen al ECD de CSF1R de macaco, tal como se describe en el Ejemplo 5. La Figura 4A muestra curvas de unión para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2, h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 4B muestra curvas de unión para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3, 0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, h.0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente) . La Figura 4C muestra curvas de unión para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 5A-5C muestran curvas de unión para

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL determinados anticuerpos humanizados que se unen al ECD de CSF1R de ratón, tal como se describe en el Ejemplo 5. La Figura 5A muestra curvas de unión para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2, 110301-L1H0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 5B muestra curvas de unión para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3, 0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La Figura 5C muestra curvas de unión para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 6A-6C muestran la inhibición de la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 por determinados anticuerpos humanizados, tal como se describe en el Ejemplo 6. La Figura 6A muestra curvas de bloqueo para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2, h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 6B muestra curvas de bloqueo para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3, 0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La

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Figura 6C muestra curvas de bloqueo para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y h0311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 7A-7C muestran la inhibición de la fosforilación de CSF1R inducida por IL34 por determinados anticuerpos humanizados, tal como se describe en el Ejemplo 6. La Figura 7A muestra curvas de bloqueo para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2, h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 7B muestra curvas de bloqueo para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3, 0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La Figura 7C muestra curvas de bloqueo para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, h0311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 8A-8C muestran el bloqueo de la unión de CSF1 humana al ECD de CSF1R de macaco por determinados anticuerpos humanizados, tal como se describe en el Ejemplo 7. La Figura 8A muestra curvas de bloqueo para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3, 0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente). La Figura 8B muestra curvas de bloqueo para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3,

0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, 5 h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La

Figura 8C muestra curvas de bloqueo para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (h0311-L0Hl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 9A-9C muestran el bloqueo de la unión de IL34 humana al ECD de CSF1R de macaco por determinados anticuerpos humanizados, tal como se describe en el Ejemplo 7. La Figura 9A muestra curvas de bloqueo para cAb parentales 0301 y anticuerpos humanizados (huAb) 0301.1, 0301.2, 0302.3,

0301.4, 0301.5 y 0301.6 (h0301-L0H0, h0301-L0Hl, h0301-L0H2, h0301-LlH0, h0301-LlHl y h0301-LlH2, respectivamente) . La Figura 9B muestra curvas de bloqueo para cAb 0302 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0302.1, 0302.2, 0302.3,

0302.4, 0302.5 y 0302.6 (h0302-L0Hl, h0302-LlHl, h0302-L2Hl, 20 h0302-L0H2, h0302-LlH2 y h0302-L2H2, respectivamente). La

Figura 9C muestra curvas de bloqueo para cAb 0311 parentales y anticuerpos humanizados (huAb) 0311.1, 0311.2, 0311.3 y 0311.4 (hO311-LOHl, hO311-LlHl, h0311-L0H2 y hO311-LlH2, respectivamente).

Las FIGS. 10A-10B muestran el bloqueo de la ω

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DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL co σ>

fosforilación de CSF1R inducida por CSF1- (FIG. 10A) e IL34(FIG. 10B) en células CHO que expresan CSF1R humano por anticuerpos humanizados 0301-L0H0, 0301-L1H0 y 0311-L0H1, tal como se describe en el Ejemplo 9.

Las FIGS. 11A-11B muestran el bloqueo de las respuestas de supervivencia/proliferación de monocitos inducidas por CSF1- (FIG. 11A) e IL34- (FIG. 11B) por anticuerpos humanizados 0301-L0H0, 0301-L1H0 y 0311-L0H1, tal como se describe en el Ejemplo 10.

Las FIGS. 12A-12C muestran que los anticuerpos humanizados 0301-L0H0, 0301-L1H0 y 0311-L0H1 no estimulan la supervivencia o proliferación de monocitos principales, usando monocitos de tres donantes diferentes, tal como se describe en el Ejemplo 11.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Se proporcionan métodos para tratar enfermedades que comprenden administrar anticuerpos novedosos a CSF1R. Todos los anticuerpos tienen afinidades de unión por ECD de CSF1R humano menor a 2 nM, y todos menos dos de los anticuerpos humanizados tienen afinidades de unión sub-nanomolares por ECD de CSF1R humano. Además, los nuevos anticuerpos bloquean la unión de CSF1 e IL34 a CSF1R humano, e inhiben la fosforilación inducida por el ligando del CSF1R humano. Varios de los nuevos anticuerpos también bloquean la unión de CSF1 e IL34 a CSF1R de macaco, lo que facilita que los

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL experimentos in vivo favorezcan el desarrollo de agentes terapéuticos de anticuerpos anti-CSFIR. Los nuevos anticuerpos son por ende muy adecuados para uso terapéutico en enfermedades humanas, que incluyen, de modo no taxativo, cáncer, enfermedades autonimunitarias y afecciones inflamatorias.

Los títulos de las secciones usados en la presente tienen fines de organización solamente y no se deben interpretar como que limitan la materia descrita.

Definiciones

A menos que se definan de otro modo, los términos científicos y técnicos utilizados en relación con la presente invención tendrán los significados comúnmente aceptados por los expertos en la técnica. Además, a menos que el contexto lo requiera de otro modo, los términos en singular incluirán los plurales y los plurales incluirán al singular.

Los ejemplos de técnicas usadas en conexión con técnicas de ADN recombinante, síntesis de oligonucleótidos, transformación y cultivo celular (por ej . , electroporación, lipofección), reacciones enzimáticas y purificación son conocidos en la técnica. Varias de las técnicas y procedimientos se describen, por ej ., en Sambrook et ál. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2da edición, Coid Spring Harbor Laboratory Press, Coid Spring Harbor, N.Y. (1989)), entre otros. Además, los ejemplos de técnicas de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL síntesis química, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación y administración y tratamiento de pacientes también se conocen en la técnica.

En la presente solicitud, el uso de o significa y/o a menos que se especifique lo contrario. En el contexto de una reivindicación que depende de muchas, el uso de o se refiere a más de una reivindicación dependiente o independiente anterior solo en la alternativa. Asimismo, términos tales como elemento o componente comprenden tanto elementos y componentes que comprenden una unidad como elementos y componentes que comprenden más de una subunidad a menos que se especifique lo contrario.

Tal como se utiliza de acuerdo con la presente descripción, se entenderá que los siguientes términos, a menos que se indique lo contrario, tendrán los siguientes significados:

Los términos molécula de ácido nucleico y polinucleótido pueden usarse de manera intercambiable y se refieren a un polímero de nucleótidos. Los polímeros de nucleótidos pueden contener nucleótidos naturales y/o no naturales e incluyen, de modo no taxativo, ADN, ARN y APN. Secuencia de ácido nucleico se refiere a la secuencia lineal, de nucleótidos que comprende la molécula de ácido nucleico o polinucleótido.

Los términos polipéptido y proteína se usan de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL manera intercambiable para referirse a un polímero de residuos de aminoácidos, y no se limitan a una longitud mínima. Los polímeros de residuos de aminoácidos pueden contener residuos de aminoácidos naturales o no naturales, e 5 incluyen, de modo no taxativo, péptidos, oligopéptidos, dímeros, trímeros y multímeros de residuos de aminoácidos. Tanto las proteínas de longitud completa como los fragmentos de las mismas están comprendidas en la definición. Los términos también incluyen modificaciones postexpresión del 10 polipéptido, por ejemplo, glicosilación, sialilación, acetilación, fosforilación y similares. Además, a efectos de la presente invención, un polipéptido se refiere a una proteína que incluye modificaciones, tales como supresiones, adiciones y sustituciones (generalmente conservadoras por 15 naturaleza) a la secuencia nativa, mientras que la proteína mantenga la actividad deseada. Estas modificaciones pueden ser premeditadas, como mediante mutagénesis dirigida al sitio, o pueden ser accidentales, como mediante mutaciones de hospedadores que producen las proteínas o errores debido a 20 amplificación por PCR.

El término CSF1R se refiere en la presente al CSF1R de longitud completa, que incluye el ECD de N-Terminal, el dominio transmembrana y el dominio de tirosina cinasa intracelular, con o sin una secuencia líder de N-Terminal. En 25 algunas modalidades, el CSF1R es un CSF1R humano que tiene la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 2.

El término dominio extracelular de CSF1R (ECD de CSF1R) tal como se usa en la presente se refiere a un polipéptido CSF1R que carece de dominios transmembrana e intracelular. Los ECD de CSF1R incluyen el ECD de CSF1R de longitud completa y fragmentos de ECD de CSF1R que son capaces de unirse a CSF1R y/o IL34. El ECD de CSF1R de longitud completa humano definido en la presente comprende ya sea los aminoácidos 1 a 512 (es decir, que incluyen la secuencia líder) o los aminoácido 20 a 512 (es decir, que carecen de la secuencia líder) de la SEQ ID NO: 2. En algunas modalidades, un fragmento de ECD de CSF1R humano comprende los aminoácidos 20 a 506 de la SEQ ID NO: 2 (véase la SEQ ID NO: 5) . En algunas modalidades, un fragmento de CSF1R humano termina en el aminoácido 507, 508, 509, 510 o 511. En algunas modalidades, un ECD de cynoCSFIR comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 7 (con secuencia líder) o los aminoácidos 20 a 506 de la SEQ ID NO: 7 (sin secuencia líder).

El término anticuerpo tal como se usa en la presente refiere a una molécula que comprende al menos una región determinante de complementariedad (CDR) 1, CDR2 y CDR3 de una cadena pesada y al menos CDR1, CDR2 y CDR3 de una cadena ligera, donde la molécula es capaz de unirse a un antígeno. El término anticuerpo incluye, de modo no taxativo, fragmentos que son capaces de unirse a un antígeno, tal como ω

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DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL οο σ>

Fvr Fv de cadena simple (scFv) , Fab, Fab' y (Fab')2. El término anticuerpo también incluye, de modo no taxativo, anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados y anticuerpos de varias especies tales como ratón, humano, mono macaco, etc.

En algunas modalidades, un anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera. En algunas modalidades, un anticuerpo comprende al menos una cadena pesada que comprende una región variable de cadena pesada y al menos una porción de una región constante de cadena pesada, y al menos una cadena ligera que comprende una región variable de cadena ligera y al menos una porción de una región constante de cadena ligera. En algunas modalidades, un anticuerpo comprende al menos dos cadenas pesadas, donde cada cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada y al menos una porción de una región constante de cadena pesada, y dos cadenas ligeras, donde cada cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera y al menos una porción de una región constante de cadena ligera. Tal como se usa en la presente, se considera que una cadena simple Fv (scFv), o cualquier otro anticuerpo que comprende, por ejemplo, una cadena simple de polipéptidos que comprende todos las seis CDR (tres CDR de cadena · pesada y tres CDR de cadena ligera) tienen una cadena pesada y una cadena ligera. En algunas

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL modalidades, la cadena pesada es la región del anticuerpo que comprende las tres CDR de cadena pesada y la cadena ligera en la región del anticuerpo que comprende las tres CDR de cadena ligera.

El termino región variable de cadena pesada tal como se usa en la presente se refiere a una región que comprende CDR1 de cadena pesada, marco (FR) 2, CDR2, FR3 y CDR3. En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada también comprende al menos una porción de una FR1 y/o al menos una porción de una FR4. En algunas modalidades, una CDR1 de cadena pesada corresponde a residuos Kabat 26 a 35; una CDR2 de cadena pesada corresponde a residuos Kabat 50 a 65; y una CDR3 de cadena pesada corresponde a residuos Kabat 95 a 102. Véase, por ej., Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 y 1991, NIH, Bethesda, Md.); y las Figuras 1A-1C. En algunas modalidades, una CDR1 de cadena pesada corresponde a residuos Kabat 31 a 35; una CDR2 de cadena ligera corresponde a residuos Kabat 50 a 65; y una CDR3 de cadena pesada corresponde a residuos Kabat 95 a 102. Véase id.

El término región constante de cadena pesada tal como se usa en la presente se refiere a una región que comprende al menos tres dominios constantes de cadena pesada, CH1, CH2 y Ch3 · Ejemplos no taxativos de regiones constantes de cadena pesada incluyen y, δ y a. Ejemplos no taxativos de regiones constantes de cadena pesada también incluyen ε y μ. Cada región constante pesada corresponde a un isotipo de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpo. Por ejemplo, un anticuerpo que comprende una región constante γ es un anticuerpo IgG, un anticuerpo que comprende una región constante δ es un anticuerpo IgD, y un anticuerpo que comprende una región constante a es un anticuerpo IgA. Además, un anticuerpo que comprende una región constante μ es un anticuerpo IgM, y un anticuerpo que comprende una región constante ε es un anticuerpo IgE. Determinados isotipos pueden subdividirse adicionalmente en subclases. Por ejemplo, los anticuerpos IgG incluyen, de modo no taxativo, anticuerpos IgGl (que comprende una región constante γι) , IgG2 (que comprende una región constante γ2), IgG3 (que comprende una región constante γ3) , y igG4 (que comprende una región constante γ4) ; los anticuerpos IgA incluyen, de modo no taxativo, anticuerpos IgAl (que comprende una región constante αχ) y lgA2 (que comprende una región constante a2) ; y los anticuerpos IgM incluyen, de modo no taxativo, IgMl y IgM2.

En algunas modalidades, una región constante de cadena pesada comprende una o más mutaciones (o sustituciones), adiciones o supresiones que otorgan una característica deseada al anticuerpo. Un ejemplo de mutación no taxativo es la mutación S241P en la región bisagra de IgG4 (entre los dominios constantes ChI y Ch2), que altera el motivo IgG4 CPSCP a CPPCP, que es similar al motivo correspondiente en IgGl. Esa mutación, en algunas modalidades, provoca un

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpo IgG4 más estable. Véase, por ej ., Angal et ál., Mol. Immunol. 30: 105-108 (1993); Bloom et ál., Prot. Sci. 6: 407-415 (1997); Schuurman et ál. , Mol. Immunol. 38: 1-8 (2001) .

El término cadena pesada tal como se usa en la presente se refiere a un polipéptido que comprende al menos una región variable de cadena pesada, con o sin una secuencia líder. En algunas modalidades, una cadena pesada comprende al menos una porción de una región constante de cadena pesada. El término cadena pesada de longitud completa tal como se usa en la presente se refiere a un polipéptido que comprende una región variable de cadena pesada y una región constante de cadena pesada, con o sin una secuencia líder.

El término región variable de cadena ligera tal como se usa en la presente se refiere a una región que comprende CDR1 de cadena ligera, marco (FR) 2, CDR2, FR3 y CDR3. En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera también comprende una FR1 y/o una FR4. En algunas modalidades, una CDR1 de cadena ligera corresponde a residuos Kabat 24 a 34; una CDR2 de cadena ligera corresponde a residuos Kabat 50 a 56; y una CDR3 de cadena ligera corresponde a residuos Kabat 89 a 97. Véase, por ej . , Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 y 1991, NIH, Bethesda, Md.); y las Figuras 1A-1C.

El término región constante de cadena ligera tal como

INSTITUTO MEXICANO se usa en la presente se refiere a una región que comprende un dominio constante de cadena ligera, CL. Ejemplos no taxativos de regiones constantes de cadena ligera incluyen λ y k.

El término cadena ligera tal como se usa en la presente se refiere a un polipéptido que comprende al menos una región variable de cadena ligera, con o sin una secuencia líder. En algunas modalidades, una cadena ligera comprende al menos una porción de una región constante de cadena ligera. El término cadena ligera de longitud completa tal como se usa en la presente se refiere a un polipéptido que comprende una regióri variable de cadena ligera y una región constante de cadena ligera, con o sin una secuencia líder.

Un anticuerpo quimérico tal como sé usa en la presente se refiere a un anticuerpo que comprende al menos una región variable de una primera especie (tal como ratón, rata, mono macaco, etc.) y al menos una región constante de una segunda especie (tal como humano, mono macaco, etc.) . En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico comprende al menos una región variable de ratón y al menos una región constante humana. En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico comprende al menos una región variable de macaco y al menos una región constante humana. En algunas modalidades, todas las regiones variables de un anticuerpo quimérico son de una primera especie y todas las regiones constantes del

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpo quimérico son de una segunda especie.

Un anticuerpo humanizado tal como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo donde al menos un aminoácido en una región marco de una región variable no humana se remplazó por el aminoácido correspondiente de una región variable humana. En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado comprende al menos una región constante humana o fragmento de esta. En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado es Fab, scFv, (Fab')2, etc.

Un anticuerpo injertado con CDR tal como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo humanizado donde las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de una primera especie (no humana) se injertaron en las regiones marco (FR) de una segunda especie (humana).

Un anticuerpo humano tal como se usa en la presente se refiere a anticuerpos producidos en humanos, anticuerpos producidos en animales no humanos que comprenden genes de inmunoglobulina humana, tales como XenoMouse®, y anticuerpos seleccionados usando métodos in vitro, tales como expresión de fagos, donde el repertorio de anticuerpos se basa en secuencias de inmunoglobulina humana.

El término secuencia líder se refiere a una secuencia de residuos de aminoácidos ubicados en el N-Terminal de un polipéptido que facilita la secreción de un polipéptido de una célula de mamífero. Una secuencia líder puede escindirse

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL tras la exportación del polipéptido de la célula de mamífero, formando una proteína madura. Las secuencias líder pueden ser naturales o sintéticas, y pueden ser heterólogas u homologas a la proteína a la que están unidas. Los ejemplos de 5 secuencias líder incluyen, de modo no taxativo, secuencias líder de anticuerpo, tales como, por ejemplo, las secuencias de aminoácido de la SEQ ID NO: 3 y 4, que corresponden a secuencias líder de cadena pesada y ligera humanas, respectivamente. Los ejemplos no taxativos de secuencias 10 líder también incluyen secuencias líder de proteínas heterólogas. En algunas modalidades, un anticuerpo carece de una secuencia líder. En algunas modalidades, un anticuerpo comprende al menos una secuencia líder, que puede seleccionarse de secuencias líder de anticuerpo nativo y 15 secuencias líder heterólogas.

El término vector se usa para describir un polinucleótido que puede modificarse para contener un polinucleótido clonado o polinucleótidos que pueden propagarse a una célula hospedadora. Un vector puede incluir 20 uno o más de los siguientes, elementos: un origen de replicación, una o más secuencias reguladoras (tales como, por ejemplo, promotores y/o potenciadores) que regulan la expresión del polipéptido de interés, y/o uno o más genes marcadores seleccionables (tales como, por ejemplo, genes 25 resistentes a antibióticos y genes que pueden usarse en

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL ensayos colorimétricos, por ej., β-galactosidasa). El término vector de expresión se refiere a un vector que se usa para expresar un polipéptido de interés en una célula hospedadora.

Una célula hospedadora se refiere a una célula que puede ser o ha sido receptora de un vector o polinucleótido aislado. Las células hospedadoras pueden ser células procariotas o células eucariotas. Los ejemplos de células eucariotas incluyen células de mamíferos, tales como células de animales primates o no primates; células fúngicas, tales como levadura; células vegetales y células de insectos. Los ejemplos no taxativos de células de mamíferos incluyen, de modo no taxativo, células NSO, células PER.C6® (Crucell) y células 293 y CHO, y sus derivados, tales como células 293-6E y DG44, respectivamente.

El término aislado tal como se usa en la presente se refiere a una molécula que se separó de al menos algunos de los componentes con los que se encuentra generalmente en la naturaleza. Por ejemplo, un polipéptido se denomina aislado cuando se separa de al menos algunos de los componentes de la célula donde se produjo. Cuando una célula secreta un polipéptido luego de la expresión, separando físicamente el sobrenadante que contiene el polipéptido de. la célula que produjo, se considera que se está aislando el polipéptido. De manera similar, un polinucleótido se denomina aislado cuando no es parte del polinucleótido más grande (tal como,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL por ejemplo, ADN genómico o ADN mitocondrial, en el caso de un polinucleótido de ADN) donde se encuentra generalmente en la naturaleza, o se separa de al menos algunos de los componentes de la célula donde se produjo, por ej ., en el caso de un polinucleótido de ARN. Por lo tanto, un polinucleótido de ADN que se encuentra en un vector dentro de una célula hospedadora puede denominarse aislado mientras ese polinucleótido no se encuentre en ese vector en la naturaleza.

Los términos sujeto y paciente se usan de manera intercambiable en la presente para referirse a un humano. En algunas modalidades, también se proporcionan métodos para tratar otros mamíferos, que incluyen, de modo no taxativo, roedores, simios, felinos, caninos, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caprinos, animales mamíferos de laboratorio, animales mamíferos de granja, animales mamíferos de deporte y mascotas mamíferas.

El término artritis reumatoide (RA, por sus siglas eri inglés) se refiere a una enfermedad autoinmunitaria crónica caracterizada principalmente por inflamación del revestimiento (sinovial) de las articulaciones, que puede provocar daño en la articulación, resultando en dolor crónico, pérdida de función y discapacidad. Debido a que la RA puede afectar múltiples órganos del cuerpo, que incluyen la piel, pulmones y ojos, se denomina enfermedad sistémica.

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El término esclerosis múltiple (MS, por sus siglas en inglés) se refiere a la enfermedad desmielinizante autoinmunitaria crónica del CNS donde el cuerpo genera anticuerpos y leucocitos contra las células que producen la vaina de mielina. La desmielinización ocurre cuando la vaina de mielina se inflama, daña y desprende de la fibra nerviosa.

El término cáncer se refiere a un trastorno proliferativo asociado a la proliferación celular descontrolada, el crecimiento celular desmedido y a menos apoptosis celular. El cáncer incluye, de modo no taxativo, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de riñón, cáncer de tiroides, cáncer de esófago, melanoma, linfomas foliculares, melanoma uveal, cáncer de cerebro, cáncer de cabeza y cuello, adenocarcinoma pulmonar, que incluye, de modo no taxativo, cáncer de colon, tumores cardíacos, cáncer pancreático, retinoblastoma, glioblastoma, cáncer intestinal, cáncer testicular, cáncer de estómago, neuroblastoma, mixoma, mioma, linfoma, endotelioma, osteoblastoma, osteoclastoma, osteosarcoma, condrosarcoma, adenoma, sarcoma de Kaposi, cáncer de ovario, leucemia (que incluye leucemias agudas (por ejemplo, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, que incluye mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica y eritroleucemia)) y leucemias crónicas (por ejemplo, leucemia

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL mielocítica crónica (granulocítica) y leucemia linfocítica crónica), síndrome mielodisplásico policitemia vera, linfomas (por ejemplo, enfermedad de Hodgkin, enfermedad no de Hodgkin), mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedades de cadena pesada y tumores sólidos que incluyen, de modo no taxativo, sarcomas y carcinomas tales como fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, ünfangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células básales, adenocarcinoma, carcinoma de las glándulas sudoríparas, carcinoma de las glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de las células renales, hepatoma, carcinoma de las vías biliares, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilm, cáncer cervical, cáncer endometrial, carcinoma de pulmón microcítico, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craniofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma y menangioma. Los términos metástasis y metástasis de cáncer se usan de manera intercambiable en la presente para referirse a la capacidad de una célula cancerosa de propagarse a otros tejidos. Por ejemplo, metástasis en el

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL hueso se refiere a la capacidad de determinados tipos de cáncer que incluyen, de modo no taxativo, mama, próstata, pulmón, riñón, tiroides y melanoma, de hacer metástasis en el hueso.

El término trastornos osteolíticos se usa en la presente para referirse a cualquier afección provocada por un aumento en la actividad de osteoclastos, que son células responsables de la resorción ósea. Los términos osteólisis y pérdida de masa ósea osteolítica pueden usarse de manera intercambiable para referirse a la resorción ósea mediada por osteoclastos o pérdida de masa ósea asociada a un trastorno osteolítico. Los trastornos osteolíticos pueden ocurrir en sujetos con una predisposición a desarrollar un trastorno osteolítico, o pueden ocurrir en sujetos con una enfermedad que conlleva o contribuye con un trastorno osteolítico al estimular la actividad de los osteoclastos. En ejemplos de modalidades de la presente invención, el trastorno osteolítico puede incluir pérdida de masa ósea osteolítica y pérdida de masa ósea osteolítica inducida por metástasis de cáncer. En ejemplos de modalidades adicionales de la presente invención, el trastorno óseo osteolítico incluye enfermedad ósea metabólica, que incluye endocrinopatías, tales como hipercortisolismo, hipogonadismo, hiperparatiroidismo primario o secundario e hipertiroidismo; deficiencia dietaria, que incluye raquitismo, osteomalacia, escorbuto y

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL desnutrición; osteoporosis; uso de fármacos, que incluyen glucocorticoides (osteoporosis inducida por glucocorticoides), heparina y alcohol; enfermedad crónica, que incluyen síndromes de malabsorción; insuficiencia renal crónica, que incluye osteodistrofia renal; enfermedad hepática crónica, que incluye osteodistrofia hepática; enfermedad heredada, que incluye osteogénesis imperfecta y homocistinuria; e inflamación ósea asociada a la artritis, artritis reumatoide, artritis psoriásica, displasia fibrosa, enfermedad periodontal y enfermedad de Paget.

Los términos pérdida de masa ósea osteolítica inducida por metástasis y pérdida de masa ósea osteolítica inducida por metástasis de cáncer se usan de manera intercambiable en la presente para referirse a osteólisis o pérdida de masa ósea osteolítica provocadas por metástasis de células cancerosas en los huesos. El término activación de osteoclastos inducida por metástasis de cáncer se usa en la presente para referirse a la capacidad de las células cancerosas que hicieron metástasis en el hueso de inducir la activación de los osteoclastos.

El término tumor se usa en la presente para referirse a un grupo de células que exhiben niveles anormalmente altos de proliferación y crecimiento. Un tumor puede ser benigno, pre-maligno o maligno; las células tumorales malignas son cancerosas. Las células tumorales pueden ser células

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL tumorales sólidas o células tumorales leucémicas. El término crecimiento tumoral se usa en la presente para referirse a la proliferación o crecimiento de una célula o células que comprenden un tumor que provoca un aumento correspondiente 5 del tamaño del tumor. El término crecimiento tumoral dependiente de CSFIR se usa en la presente para referirse al requisito de parte de una célula o células tumorales de función o funciones mediadas por CSFIR para que la célula o células tumorales proliferen o crezcan.

Tratamiento, tal como se usa en la presente, cubre cualquier administración o aplicación de un agente terapéutico para una enfermedad en un mamífero, que incluye un humano, e incluye inhibir la enfermedad o evolución de la enfermedad, inhibir o enlentecer la enfermedad o su 15 evolución, frenar su desarrollo, parcial o completamente aliviando la enfermedad, o curando la enfermedad, por ejemplo, provocando la regresión o restaurando o reparando una función perdida, faltante o defectuosa; o estimulando un proceso ineficaz.

Los términos inhibición o inhibir se refieren a una disminución o cese de cualquier característica fenotípica o a la disminución o cese de la incidencia, grado o probabilidad de esa característica.

Un portador farmaceutxcamente aceptable se refiere a .5 un relleno sólido, semisólido o líquido no tóxico, diluyente,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL material encapsulante, auxiliar de formulación o portador convencional en la técnica para usar con un agente terapéutico que juntos comprenden una composición farmacéutica para administrar a un sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable no es tóxico para los receptores en las dosis y concentraciones empleadas y es compatible con otros ingredientes de la formulación. El portador farmacéuticamente aceptable es adecuado para la formulación empleada. Por ejemplo, si el agente terapéutico debe administrarse por vía oral, el portador puede ser una cápsula de gel. Si el agente terapéutico debe administrarse por vía subcutánea, el portador idealmente no irrita la piel y no provoca reacción en el sitio de la inyección.

Anticuerpos anti-CSFIR

Los presentes inventores inventaron un nuevo conjunto de anticuerpos dirigidos contra CSF1R. Los anticuerpos antiCSFIR incluyen, de modo no taxativo, anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos de ratón, anticuerpos humanos y anticuerpos que comprenden los CDR de cadena pesada y/o de cadena ligera descritos en la presente.

Ejemplos de anticuerpos humanizados

En algunas modalidades, se proporcionan anticuerpos humanizados que se unen a CSF1R. Los anticuerpos humanizados son útiles como moléculas terapéuticas debido a que los anticuerpos humanizados reducen o eliminan la respuesta ω

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DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL co σ>

inmunitaria humana a anticuerpos no humanos (tales como la respuesta al anticuerpo, antiratón humano (HAMA, por sus siglas en inglés)), que puede provocar una respuesta inmunitaria a un agente terapéutico de anticuerpo y disminución de la efectividad del agente terapéutico.

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos humanizados incluyen Abl a Abl6, descritos en la presente. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos humanizados también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada de un anticuerpo que se selecciona de Abl a Abl6 y/o una región variable de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de Abl a Abl6. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos humanizados incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada que se selecciona de las SEQ ID NOs: 39 a 45 y/o una región variable de cadena ligera que se selecciona de las SEQ ID NOs: 46 a 52. Los ejemplos de anticuerpos humanizados también incluyen, de modo no taxativo, anticuerpos humanizados que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de 0301, 0302 y 0311.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR humanizados incluyen anticuerpos que

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 15, 16 y 17; las SEQ ID NOS: 21, 22 y 23; las SEQ ID NOs: 27, 28 y 29. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR humanizados también incluyen anticuerpos que comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 18, 19 y 20; las SEQ ID NOS: 24, 25 y 26; las SEQ ID NOS: 30, 31 y 32.

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR humanizados incluyen anticuerpos que comprenden los conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de Tabla 1 (SEQ ID NOs mostradas; véase la Tabla 8 por las secuencias) . Cada fila de la Tabla 1 muestra la CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un ejemplo de anticuerpo.

Tabla 1: CDR de cadena pesada y cadena ligera

<td colspan="3"> Cadena pesada</td><td colspan="3"> Cadena ligera</td>

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Ejemplos adicionales de anticuerpos humanizados

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45, y donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52; donde el

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpo se une a CSF1R.

Tal como se usa en la presente, si un polipéptido particular es, por ejemplo, al menos 95% idéntico a una secuencia de aminoácidos, puede determinarse usando, por ej., un programa de computadora. Al determinar si una secuencia particular es, por ejemplo, 95% idéntica a una secuencia de referencia, el porcentaje de identidad se calcula sobre la longitud completa de la secuencia de aminoácidos de referencia.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende al menos una de las CDR descritas en la presente. Es decir, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende al menos una CDR que se selecciona de una CDR1 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR2 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR3 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR1 de cadena ligera descrita en la presente, una CDR2 de cadena ligera descrita en la presente y una CDR3 de cadena ligera descrita en la presente. Además, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humanizado comprende al menos una CDR mutada en función de una CDR descrita en la presente, donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos con relación a la CDR descrita en la presente. En algunas modalidades, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras.

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Un experto en la técnica puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas para una secuencia de CDR particular, donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas alteren de manera significativa las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los ejemplos de anticuerpos anti-CSFIR humanizados también incluyen anticuerpos que compiten por unirse a CSF1R con un anticuerpo descrito en la presente. Por lo tanto, en algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo anti-CSFIR humanizado que compite por unirse a CSF1R con un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, con dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de estos Fabs.

Ejemplos de regiones constantes de anticuerpo humanizado

En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado descrito en la presente comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas modalidades, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo que se selecciona de IgA, IgG y IgD. En algunas modalidades, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo que se selecciona de κ y λ. En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado descrito en la presente comprende una región constante de IgG humana. En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado descrito en la presente comprende una

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de las modalidades, un anticuerpo humanizado descrito en la presente comprende una mutación S241P en la región constante IgG4 humana. En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado descrito en la presente comprende una región constante IgG4 humana y una cadena ligera κ humana.

La elección de región constante de cadena pesada puede determinar si un anticuerpo tendrá una función efectora in vivo o no. La función efectora, en algunas modalidades, incluye citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC, por sus siglas en inglés) y/o citotoxicidad dependiente del complemento (CDC), y puede provocar la destrucción de células a las que está unido el anticuerpo. En algunos métodos de tratamiento, que incluyen métodos para tratar algunos cánceres, puede desearse la destrucción de células, por ejemplo, cuando el anticuerpo se une a una célula que favorece el mantenimiento o crecimiento del tumor. Los ejemplos de células que pueden favorecer el mantenimiento o crecimiento de un tumor incluyen, de modo no taxativo, células tumorales en sí, células que ayudan al reclutamiento de vasculatura al tumor y células que proporcionan ligandos, factores de crecimiento o contrareceptores que favorecen o promueven el crecimiento tumoral o supervivencia tumoral. En algunas modalidades, cuando se desea la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti378336

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CSF1R que comprende una cadena pesada de IgGl humana o una cadena pesada de IgG3 humana.

En algunos métodos de tratamiento, la función efectora puede no desearse. Por ejemplo, en algunas modalidades, puede desearse que los anticuerpos usados en el tratamiento de MS y/o RA y/u osteólisis no tengan función efectora. Por lo tanto, en algunas modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR desarrollados para el tratamiento de cáncer pueden no ser adecuados para usar en el tratamiento de MS y/o RA y/u osteólisis. Por consiguiente, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR que carece de función efectora significativa se usa en el tratamiento de MS y/o RA y/u osteólisis. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR para el tratamiento de MS y/o RA y/u osteólisis comprende una región constante de cadena pesada IgG4 o IgG2 humana. En algunas modalidades, la región constante IgG4 comprende una mutación S241P.

Un anticuerpo puede humanizarse por cualquier método. Los ejemplos de métodos no taxativos de humanización incluyen métodos descritos en, por ej., las patentes estadounidenses Nos. 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 6,180,370; Jones et ál. , Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et ál. , Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et ál., Science 239: 1534-36 (1988); y publicación estadounidense No. US 2009/0136500.

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Tal como se destaca anteriormente, un anticuerpo humanizado es un anticuerpo donde al menos un aminoácido en una región marco de una región variable no humana se remplazó po^· el aminoácido del lugar correspondiente de una región variable humana. En algunas modalidades, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, al menos seis, al menos siete, al menos ocho, al menos nueve, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 15 o al menos 2 0 aminoácidos en las regiones marco de una región variable no humana se remplazan por un aminoácido de uno o más de los lugares correspondientes en una o más regiones marco humanas.

En algunas modalidades, algunos de los aminoácidos humanos correspondientes usados para la sustitución son de las regiones marco de diferentes genes de inmunoglobulina humana. Es decir, en algunas de las modalidades, uno o más de aminoácidos no humanos pueden remplazarse por aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un primer anticuerpo humano o codificarse por un primer gen de inmunoglobulina humano, o uno o más aminoácidos no humanos pueden remplazarse por los aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un segundo anticuerpo humano o codificarse por un segundo gen de inmunoglobulina, o uno o más aminoácidos no humanos pueden remplazarse por aminoácidos correspondientes de una región marco humana de un tercer anticuerpo humano o codificarse por un tercer gen de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL inmunoglobulina humano, etc. Además, en algunas modalidades, no es necesario que todos los aminoácidos humanos correspondientes que están siendo usados para sustitución en una sola región marco, por ejemplo, FR2, sean del mismo marco humano. En algunas modalidades, sin embargo, todos los aminoácidos humanos correspondientes que están siendo usados para sustitución son del mismo anticuerpo humano o están codificados por el mismo gen de inmunoglobulina humana.

En algunas modalidades, un anticuerpo se humaniza remplazado una o más regiones marco enteras por regiones marco humanas correspondientes. En algunas modalidades, una región marco humana se selecciona que tiene el nivel más alto de homología a la región marco no humana que está siendo remplazada. En algunas modalidades, el anticuerpo humanizado es un anticuerpo injertado con CDR.

En algunas modalidades, luego del injerto con CDR, uno o más aminoácidos marco vuelven a cambiar al aminoácido correspondiente en una región marco de ratón. Las mutaciones inversas se realizan, en algunas modalidades, para retener uno o más aminoácidos marco de ratón que parecen contribuir con la estructura de una o más de las CDR y/o que pueden estar implicados en contactos de antígeno y/o parecen estar implicados en la integridad de la estructura global del anticuerpo. En algunas modalidades, se realizan diez o menos, nueve o menos, ocho o menos, siete o menos, seis o menos,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL cinco o menos, cuatro o menos, tres o menos, dos o menos, una o cero mutaciones inversas a las regiones marco de un anticuerpo luego de un injerto con CDR.

En algunas modalidades, un anticuerpo humanizado también comprende una región constante de cadena pesada humana y una región constante de cadena ligera humana. Ejemplos de anticuerpos quiméricos

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR es un anticuerpo quimérico. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una región variable no humana y al menos una región constante humana. En algunas de las modalidades, todas las regiones variables de un anticuerpo anti-CSFIR son regiones variables no humanas, y todas las regiones constantes de un anticuerpo anti-CSFIR son regiones constantes humanas. En algunas modalidades, una o más regiones variables de un anticuerpo quimérico son regiones variables de ratón. No es necesario que la región constante humana de un anticuerpo quimérico sea del mismo isotipo que la región constante no humana, en caso de haber, gue remplaza. Los anticuerpos quiméricos se describen, por ej . , en la patente estadounidense No. 4,816,567; y Morrison et ál. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984).

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos quiméricos incluyen anticuerpos quiméricos que comprenden regiones variables de cadena ligera y/o pesada de un anticuerpo que se

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL selecciona de 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos adicionales de anticuerpos quiméricos incluyen anticuerpos quiméricos que comprenden CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y/o CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo que 5 se selecciona de 0301, 0302 y 0311.

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR quiméricos incluyen anticuerpos que comprenden los siguientes pares de regiones variables de cadena ligera y pesada: las SEQ ID NO: 9 y 10; las SEQ ID NOs : 11 y 12; las SEQ ID NOs: 10 13 y 14.

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden un conjunto de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera mostradas en la Tabla 1.

Ejemplos adicionales de anticuerpos quiméricos

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR quimérico comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, 20 al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR quimérico comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de 25 región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos

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92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas 5 modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR quimérico comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se 10 selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45,- y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52; donde el anticuerpo se une a CSF1R.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR quimérico comprende al menos una de las CDR descritas en la presente. Es decir, en algunas modalidades, un anticuerpo 20 anti-CSFIR quimérico comprende al menos una CDR que se selecciona de una CDR1 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR2 de cadena pesada descrita en la presente, una GDR3 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR1 de cadena ligera descrita en la presente, una CDR2 de cadena 25 ligera descrita en la presente y una CDR3 de cadena ligera

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL descrita en la presente. Además, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR quimérico comprende al menos una CDR mutada en función de una CDR descrita en la presente, donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos con relación a la CDR descrita en la presente. En algunas modalidades, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras. Un experto en la técnica puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas para una secuencia de CDR particular, donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas alteren de manera significativa las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los ejemplos de anticuerpos anti-CSFIR quiméricos también incluyen anticuerpos quiméricos que compiten por unirse a CSF1R con un anticuerpo descrito en la presente. Por lo tanto, en algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo anti-CSFIR quimérico que compite por unirse a CSF1R con un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, con dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de estos Fabs. Ejemplos de regiones constantes de anticuerpo quimérico

En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico descrito en la presente comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas modalidades, la región

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL constante de cadena pesada humana es de un . isotipo que se selecciona de IgA, IgG y IgD. En algunas modalidades, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo que se selecciona de κ y λ. En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico descrito en la presente comprende una región constante de IgG humana. En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico descrito en la presente comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de las modalidades, un anticuerpo quimérico descrito en la presente comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas modalidades, un anticuerpo quimérico descrito en la presente comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera κ humana.

Tal como se indica anteriormente, si se desea o no una función efectora puede depender del método o tratamiento particular pretendido para un anticuerpo. Por lo tanto, en algunas modalidades, cuando se desea la función efectora, se selecciona un anticuerpo antiCSFIR quimérico que comprende una región constante de cadena pesada de IgGl humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas modalidades, cuando no se desea la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR quimérico que comprende una región constante de cadena pesada de IgG2 o IgG4 humana.

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Ejemplos de anticuerpos humanos

Los anticuerpos humanos pueden realizarse mediante cualquier método adecuado. Los ejemplos no taxativos de métodos incluyen realizar anticuerpos humanos en ratones transgénicos que 5 comprenden lugares de inmunoglobulina humana. Véase, por ej., Jakobovits et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 2551-55 (1993); Jakobovits et ál., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et ál. , Nature 368: 856-9 (1994); y patentes estadounidenses Nos.

5,545,807; 6,713,610; 6,673,986; 6,162,963; 5,545,807; 6,300,129;

6,255,458; 5,877,397; 5,874,299 y 5,545,806.

Los ejemplos no taxativos de métodos también incluyen realizar anticuerpos humanos usando bibliotecas de expresión de fagos. Véase, por ej ., Hoogenboom et ál., J. Mol. Biol. 227: 381:-8 (1992); Marks et ál. , J. Mol. Biol. 222: 581-97 15 (1991); y publicación PCT No. US 99/10494.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humano se une a un polipéptido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 1. Los ejemplos de anticuerpos anti-CSFIR humanos también incluyen anticuerpos que compiten por unirse a CSF1R con un 20 anticuerpo descrito en la presente. Por lo tanto, en algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo anti-CSFIR humano que compite por unirse a CSF1R con un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, con dos cadenas pesadas y 25 dos cadenas ligeras) de estos Fabs.

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En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR humano comprende una o más regiones constantes humanas. En algunas modalidades, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo que se selecciona de IgA, IgG y IgD. En algunas modalidades, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo que se selecciona de κ y λ. En algunas modalidades, un anticuerpo humano descrito en la presente comprende una región constante de IgG humana. En algunas modalidades, un anticuerpo humano descrito en la presente comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de las modalidades, un anticuerpo humano descrito en la presente comprende una mutación S241P en la región constante de IgG4 humana. En algunas modalidades., un anticuerpo humano descrito en la presente comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera κ humana.

En algunas modalidades, cuando se desea la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR humano que comprende una región constante de cadena pesada de IgGl humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas modalidades, cuando no se desea la función efectóra, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR humano que comprende una región constante de cadena pesada de IgG2 o IgG4 humana. Ejemplos adicionales de anticuerpos anti-CSFIR

Los ejemplos de anticuerpos anti-CSFIR también incluyen, de modo no taxativo, anticuerpos de ratón, ω

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INSTITUTO MEXICANO W

DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL co σ>

humanizados, humanos, quiméricos y modificados que comprenden, por ejemplo, una o más secuencias de CDR descritas en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena pesada descrita en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena ligera descrita en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena pesada descrita en la presente y una región variable de cadena ligera descrita en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada descritas en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera descritas en la presente. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada descritas en la presente y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera descritas en la presente.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena pesada de un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada de un anticuerpo que se selecciona de anticuerpos humanizados Abl a Abl6. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de anticuerpos humanizados Abl a Abl6 . Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR también incluyen anticuerpos que comprenden una región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de anticuerpos humanizados Abl a Abl6. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden .los siguientes pares de regiones variables de cadena ligera y pesada: las SEQ ID NO: 9 y 10; las SEQ ID

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NOs: 11 y 12; las SEQ ID NOs: 13 y 14; las SEQ ID NOs: 39 y 40; las SEQ ID NOs: 41 y 42; las SEQ ID NOs: 43 y 44; las SEQ ID NOs: 45 y 46; las SEQ ID NOs: 47 y 48; las SEQ ID NOs: 49 y 50; las SEQ ID NOs: 51 y 52. Los ejemplos no taxativos de 5 anticuerpos anti-CSFIR también incluyen anticuerpos que comprenden los siguientes pares de cadenas ligera y pesada: las SEQ ID NO: 33 y 34; las SEQ ID NOs: 35 y 36; las SEQ ID NOs: 37 y 38.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR 10 comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada de un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 15, 16 y 17; las SEQ ID 15 NOs: 21, 22 y 23; las SEQ ID NOs: 27, 28 y 29.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311. Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que 20 comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 18, 19 y 20; las SEQ ID NOs: 24, 25 y 26; las SEQ ID NOs: 30, 31 y 32.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y 25 CDR3 de cadena ligera de un anticuerpo que se selecciona de

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Fabs 0301, 0302 y 0311.

Los ejemplos no taxativos de anticuerpos anti-CSFIR incluyen anticuerpos que comprenden los conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada y CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena ligera mostrados en la Tabla 1.

Ejemplos adicionales de anticuerpos

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52, donde el anticuerpo se une a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo antiCSFIR comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 ω

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INSTITUTO MEXICANO 00

DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL σ>

a 45; y una cadena ligera que comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a la secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52; donde el anticuerpo se une a CSF1R.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una de las CDR descritas en la presente. Es decir, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR que se selecciona de una CDR1 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR2 de cadena pesada .descrita en la presente, una CDR3 de cadena pesada descrita en la presente, una CDR1 de cadena ligera descrita en la presente, una CDR2 de cadena ligera descrita en la presente y una CDR3 de cadena ligera descrita en la presente. Además, en algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR mutada en función de una CDR descrita en la presente, donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos con relación a la CDR descrita en la presente. En algunas modalidades, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras. Un experto en la técnica puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas para una secuencia de CDR particular, donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL conservadoras adecuadas alteren de manera significativa las propiedades de unión del anticuerpo que comprende la CDR mutada.

Los ejemplos de anticuerpos anti-CSFIR también incluyen 5 anticuerpos que compiten por unirse a CSF1R con un anticuerpo descrito en la presente. Por lo tanto, en algunas modalidades, se proporciona un anticuerpo anti-CSFIR que compite por unirse a CSF1R con un anticuerpo que se selecciona de Fabs 0301, 0302 y 0311; y versiones de anticuerpos bivalentes (es decir, con dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras) de estos Fabs.

Ejemplos de regiones constantes de anticuerpo

En algunas modalidades, un anticuerpo descrito en la presente comprende una o mas regiones constantes humanas. En 15 algunas modalidades, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo que se selecciona de IgA, IgG y IgD. En algunas modalidades, la región constante de cadena ligera humana es de un isotipo que se selecciona de κ y λ. En algunas modalidades, un anticuerpo descrito en la presente 20 comprende una región constante de IgG humana. En algunas modalidades, un anticuerpo descrito en la presente comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de las modalidades, un anticuerpo descrito en la presente comprende una mutación S241P en la región constante 25 de IgG4 humana. En algunas modalidades, un anticuerpo

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL descrito en la presente comprende una región constante de IgG4 humana y una cadena ligera κ humana.

Tal como se indica anteriormente, si se desea o no una función efectora puede depender del método de tratamiento particular pretendido para un anticuerpo. Por lo tanto, en algunas modalidades, cuando se desea la función efectora, se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR que comprende una región constante de cadena pesada de IgGl humana o una región constante de cadena pesada de IgG3 humana. En algunas modalidades, cuando no se desea la función efectora,. se selecciona un anticuerpo anti-CSFIR que comprende una región constante de cadena pesada de IgG2 o IgG4 humana.

Ejemplos de regiones variables de cadena pesada anti-CSFIR

En algunas modalidades, se proporcionan regiones variables de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR es una región variable de ratón, una región variable humana o una región variable humanizada.

Una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, FR2, CDR2, FR3 y CDR3 de cadena pesada. En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende adicionalmente FR1 y/o FR4 de cadena pesada. Los ejemplos no taxativos de regiones variables de cadena pesada incluyen, de modo no taxativo, regiones variables de cadena pesada que tienen una

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL secuencia de aminoácidos que se selecciona de la SEQ ID NO: 9, 11, 13 y 39 a 45.

En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR1 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 15, 21 y 27.

En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR2 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 16, 22 y 28.

En algunas modalidades, una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR3 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 17, 23 y 29.

Los ejemplos no taxativos de regiones variables de cadena pesada incluyen, de modo no taxativo, regiones variables de cadena pesada que comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 15, 16 y 17; las SEQ ID NOs: 21, 22 y 23; las SEQ ID NOs: 27, 28 y 29.

En algunas modalidades, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98% o al menos 99% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 9, 11, 13 y 39 a 45, donde la cadena

INSTITUTO MEXICANO pesada junto con una cadena ligera es capaz de formar· un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas modalidades, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una de las CDR descritas en la presente. Es decir, en algunas modalidades, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR que se selecciona de una CDR1 de cadena pesada descrita anteriormente, una CDR2 de cadena pesada descrita anteriormente y una CDR3 de cadena pesada descrita anteriormente. Además, en algunas modalidades, una cadena pesada de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR mutada en función de una CDR descrita en la presente, donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos con relación a la CDR descrita en la presente. En algunas modalidades, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras. Un experto en la técnica puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas para una secuencia de CDR particular, donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas alteren de manera significativa las propiedades de unión de la cadena pesada que comprende la CDR mutada.

En algunas modalidades, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada. En algunas modalidades, una cadena pesada comprende una región constante de cadena

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL pesada humana. En algunas modalidades, la región constante de cadena pesada humana es de un isotipo que se selecciona de ^9^, IgG y IgD. En algunas modalidades, la región constante de cadena pesada humana es una región constante de IgG. En algunas modalidades, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana. En algunas de las modalidades, la región constante de cadena pesada de IgG4 humana comprende una mutación S241P.

En algunas modalidades, cuando se desea la función efectora, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgGl o IgG3 humana. En algunas modalidades, cuando es menos deseable la función efectora, una cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 o IgG2 humana.

Ejemplos de regiones variables de cadena ligera anti-CSFIR En algunas modalidades, se proporcionan regiones variables de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR es una región variable de ratón, una región variable humana o una región variable humanizada.

Una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende CDR1, FR2, CDR2, FR3 y CDR3 de cadena ligera. En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende adicionalmente FR1 y/o FR4 de cadena ligera. Los ejemplos no taxativos de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL regiones variables de cadena ligera incluyen, regiones variables de cadena ligera que tienen una secuencia de aminoácidos que se selecciona de la SEQ ID NO: 10, 12, 14 y 46 a 52.

En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR1 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 18, 24 y 30.

En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR2 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 19, 25 y 31.

En algunas modalidades, una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende una CDR3 que comprende una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 20, 26 y 32.

Los ejemplos no taxativos de regiones variables de cadena ligera incluyen, de modo no taxativo, regiones variables de cadena ligera que comprenden conjuntos de CDR1, CDR2 y CDR3 que se seleccionan de: las SEQ ID NO: 18, 19 y 20; las SEQ ID NOs: 24, 25 y 26; las SEQ ID NOs: 30, 31 y 32.

En algunas modalidades, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende una secuencia de región variable que es al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos

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98% o al menos 99% idéntica a una secuencia que se selecciona de las SEQ ID NOs: 10, 12, 14 y 46 a 52, donde la cadena ligera junto con una cadena pesada es capaz de formar un anticuerpo que se une a CSF1R.

En algunas modalidades, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una de las CDR descritas en la presente. Es decir, en algunas modalidades, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR que se selecciona de una CDR1 de cadena ligera descrita anteriormente, una CDR2 de cadena ligera descrita anteriormente y una· CDR3 de cadena pesada descrita anteriormente. Además, en algunas modalidades, una cadena ligera de anticuerpo anti-CSFIR comprende al menos una CDR mutada en función de una CDR descrita en la presente, donde la CDR mutada comprende 1, 2, 3 o 4 sustituciones de aminoácidos con relación a la CDR descrita en la presente. En algunas modalidades, una o más de las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras. Un experto en la técnica puede seleccionar una o más sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas para una secuencia de CDR particular, donde no se prevé que las sustituciones de aminoácidos conservadoras adecuadas alteren de manera significativa las propiedades de unión de la cadena ligera que comprende la CDR mutada.

En algunas modalidades, una cadena ligera comprende una

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL región constante de cadena ligera humana. En algunas modalidades, una región constante de cadena ligera humana se selecciona de una región constante de cadena ligera κ humana y λ humana.

Ejemplos adicionales de moléculas de unión a CSF1R

En algunas modalidades, se proporcionan moléculas adicionales que se unen a CSF1R. Las moléculas incluyen, de modo no taxativo, estructuras no canónicas, tales como anticalinas, adnectinas, repeticiones de anquirina, etc. Véase, por ej., Hosse et ál., Prot. Sci. 15:14 (2006); Fiedler, M. and Skerra, A., Non-Antibody Scaffolds, pp.467499 en Handbook of Therapeutic Antibodies, Dubel, S., ed., Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2007.

Ejemplos de propiedades de anticuerpos anti-CSFIR

En algunas modalidades, un anticuerpo que tiene una estructura descrita anteriormente se une al CSF1R con una afinidad de unión (Kd) de menos de 1 nM, bloquea la unión de CSF1 y/o IL34 a CSF1R, e inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1 y/o IL34.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR se une al dominio extracelular de CSF1R (ECD de CSF1R). En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR tiene una afinidad de unión (Kd) por CSF1R menor a 1 nM, menor a 0.5 nM, menor a 0.1 nM o menor a 0.05 nM. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR tiene una Kd de entre 0.01 y 1 nM,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL entre 0.01 y 0.5 nM, entre 0.01 y 0.1 nM, entre 0.01 y 0.05 nM o entre 0.02 y 0.05 nM.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR bloquea la unión del ligando a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR bloquea la unión de CSF1 a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR bloquea la unión de IL34 a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR bloquea la unión de CSF1 y IL34 a CSF1R. En algunas modalidades, un anticuerpo que bloquea la unión del ligando se une al dominio extracelular de CSF1R. Se considera que un anticuerpo bloquea la unión del ligando a CSF1R cuando reduce la cantidad de unión detectable de un ligando a CSF1R en al menos 50%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 7. En algunas modalidades, un anticuerpo reduce la cantidad de unión detectable de un ligando a CSF1R en al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% o al menos 90%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 7. En algunas de las modalidades, se dice que el anticuerpo bloquea la unión del ligando en al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, etc.

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por CSF1. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por IL34. En algunas modalidades, un anticuerpo

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anti-CSFIR inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por IL34 e inducida por CSF1. Se considera que un anticuerpo inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando cuando reduce la cantidad de fosforilación detectable de CSF1R inducida por el ligando en al menos 50%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 6. En algunas modalidades, un anticuerpo reduce la cantidad de fosforilación detectable de CSF1R inducida por el ligando en al menos 60%, al menos 70%, al menos 80% o al menos 90%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 6. En algunas de las modalidades, se dice que el anticuerpo inhibe la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando en al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, etc.

En algunas modalidades, un anticuerpo inhibe las respuestas de supervivencia y/o proliferación de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL34. Se considera que un anticuerpo inhibe respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos” cuando reduce la cantidad de respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL34 en al menos 50%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 10. En algunas modalidades, un anticuerpo reduce la cantidad de respuestas de proliferación y/o supervivencia de monocitos en presencia de CSF1 y/o IL34 en al menos 60%, al menos 70-s, al menos 80% o al menos 90%, usando el ensayo descrito en el Ejemplo 10. En algunas de las modalidades, se dice que el anticuerpo inhibe las respuestas de fosforilación

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL y/o supervivencia de monocitos en al menos 50%, al menos 60%, al menos 70%, etc.

Ejemplos de conjugados de anticuerpos

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR está conjugado a un marcador y/o agente citotóxico. Tal como se usa en la presente, un marcador es un resto que facilita la detección del anticuerpo y/o facilita la detección de una molécula a la que se une el anticuerpo. Los ejemplos no taxativos de marcadores incluyen, de modo no taxativo, radioisótopos, grupos fluorescentes, grupos enzimáticos, grupos quimioluminiscentes, biotina, etiquetas de epítopos, etiquetas de unión a metales, etc. Un experto en la técnica puede seleccionar un marcador adecuado de acuerdo con la aplicación pretendida.

Tal como se usa en la presente, un agente citotóxico es un resto que reduce la capacidad proliferativa de una o más células. Una célula tiene capacidad proliferativa reducida cuando la célula se vuelve menos apta para proliferar, por ejemplo, debido a que la célula se somete a apoptosis o de otra forma muere, la célula no logra transcurrir el ciclo celular y/o no logra dividirse, la célula se diferencia, etc. Los ejemplos no taxativos de agentes citotóxicos incluyen, de modo no taxativo, radioisótopos, toxinas y agentes quimioterapéuticos. Un experto en la técnica puede seleccionar un agente citotóxico adecuado de acuerdo con la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL aplicación pretendida.

En algunas modalidades, un marcador y/o agente citotóxico se conjuga a un anticuerpo usando métodos químicos in vitro. Los ejemplos no taxativos de métodos químicos de conjugación son conocidos en la técnica e incluyen servicios, métodos y/o reactivos comercialmente disponibles de, por ej., Thermo Scientific Life Science Research Produces (anteriormente Pierce; Rockford, IL), Prozyme (Hayward, CA) , SACRI Antibody Services (Calgary, Canadá), AbD Serotec (Raleigh, NC), etc. En algunas modalidades, cuando un marcador y/o agente citotóxico es un polipéptido, el marcador y/o agente citotóxico puede expresarse desde el mismo vector de expresión con al menos una cadena de anticuerpos para producir un polipéptido que comprende el marcador y/o agente citotóxico fusionado a una cadena de anticuerpos. Un experto en la técnica puede seleccionar un método adecuado para conjugar un marcador y/o agente citotóxico a un anticuerpo de acuerdo con la aplicación pretendida.

Ejemplos de secuencias líder

Para que algunas proteínas secretadas expresen y secreten en grandes cantidades, puede desearse una secuencia líder de una proteína heteróloga. En algunas modalidades, una secuencia líder se selecciona de las SEQ ID NOs: 3 y 4, que son secuencias líder de cadena ligera y cadena pesada , respectivamente. En algunas modalidades, emplear secuencias

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL líder heterólogas puede ser ventajoso en que un polipéptido maduro resultante puede permanecer inalterado cuando la secuencia líder se quite a ER durante el proceso de secreción. Puede requerirse la adición de una secuencia líder heteróloga para expresar y secretar algunas proteínas.

Se describen determinados ejemplos de secuencia líder, por ej., en la Base de datos de secuencias líder en línea mantenida por el Departamento de Bioquímica, National University of Singapore. Véase Choo et ál. , BMC Bioinformatics, 6: 249 (2005); y publicación PCT No. WO 2006/081430.

. Moléculas de ácido nucleico que codifican anticuerpos anti-CSFIR

Se proporcionan moléculas de ácido nucleico que comprenden polinucleótidos que codifican una o más cadenas de anticuerpos anti-CSFIR. En algunas modalidades, una molécula de ácido nucleico comprende un polinucleótido que codifica una cadena pesada o una cadena ligera de un anticuerpo antiCSFIR. En algunas modalidades, una molécula de ácido nucleico comprende tanto un polinucleótido que codifica una cadena pesada como un polinucleótido que codifica una cadena ligera de un anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, una primera molécula de ácido nucleico comprende un primer polinucleótido que codifica una cadena pesada y una segunda molécula de ácido nucleico que comprende un segundo

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL polinucleótido que codifica una cadena ligera.

En algunas de las modalidades, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan de una molécula de ácido nucleico, o de dos moléculas de acido nucleico separadas, como dos polipéptidos separados. En algunas modalidades, tales como cuando un anticuerpo es un scFv, un solo polinucleótido codifica un solo polipéptido que comprende una cadena pesada y una cadena ligera unidas entre sí.

En algunas modalidades, un polinucleótido que codifica una cadena pesada o una cadena ligera de un anticuerpo antiCSFIR comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia líder, que, al traducirse, se ubican en el NTerminal de la cadena pesada o cadena ligera. Tal como se describe anteriormente, la secuencia líder puede ser la secuencia líder de cadena ligera o pesada nativa, o puede ser otra secuencia líder heteróloga.

Las moléculas de ácido nucleico pueden construirse usando técnicas de ADN recombinante convencionales en la técnica. En algunas modalidades, una molécula de ácido nucleico es un vector de expresión adecuado para expresión en una célula hospedadora seleccionada.

Expresión y producción de anticuerpos anti-CSFIR Vectores

Se proporcionan vectores que comprenden polinucleótidos que codifican cadenas pesadas anti-CSFIR y/o cadenas ligeras

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anti-CSFIR. También se proporcionan vectores que comprenden polinucleótidos que codifican cadenas pesadas anti-CSFIR y/o cadenas ligeras anti-CSFIR. Los vectores incluyen, de modo no taxativo, vectores de ADN, vectores de fagos, vectores 5 virales, vectores retrovirales, etc. En algunas modalidades, un vector comprende una primera secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena pesada y una segunda secuencia de polinucleótidos que codifica una cadena ligera. En algunas modalidades, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan 10 desde el vector como dos polipéptidos separados. En algunas modalidades, la cadena pesada y la cadena ligera se expresan como parte de un solo polipeptido, tal como, por ejemplo, cuando el anticuerpo es un scFv.

En algunas modalidades, un primer vector comprende un 15 polinucleótido que codifica una cadena pesada y un segundo vector que comprende un polinucleótido que codifica una cadena ligera. En algunas modalidades, el primer vector y el segundo vector se transfectan en células hospedadoras en cantidades similares (tales como cantidades molares similares o cantidades Í0 de masa similares). En algunas modalidades, una relación molar o de masa de entre 5:1 y 1:5 del primer vector y el segundo vector se transfecta en células hospedadoras. En algunas modalidades, se usa una relación de masa de entre 1:1 y 1:5 para el vector que codifica la cadena pesada y el vector que ó codifica la cadena ligera. En algunas modalidades, se usa una

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL relación de masa de 1:2 para el vector que codifica la cadena pesada y el vector que codifica la cadena ligera.

En algunas modalidades, se selecciona un vector que se optimiza para la expresión de polipéptidos en células CHO o derivadas de CHO o en células NSO. Los ejemplos de los vectores se describen en, por ej . , Running Deer et ál., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004).

En algunas modalidades, se elige un vector para expresión in vivo de cadenas pesadas anti-CSFIR y/o cadenas ligeras anti-CSFIR en animales, que incluyen humanos. En algunas de las modalidades, la expresión del polipéptido está en control de un promotor que funciona de forma específica del tejido. Por ejemplo, los promotores específicos del hígado se describen en, por ej . , publicación PCT No. WO 2006/076288.

• Células hospedadoras

En varias modalidades, las cadenas pesadas anti-CSFIR y/o las cadenas ligeras anti-CSFIR pueden expresarse en células procariotas, tales como células bacterianas; o en células eucariotas, tales como células fúngicas (tales como levadura), células vegetales, células de insectos y células de mamíferos. Tal expresión puede llevarse a cabo, por ejemplo, de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica. Los ejemplos de células eucariotas que pueden usarse para expresar polipéptidos incluyen, de modo no taxativo,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL células COS, que incluyen células COS 7; células 293, que incluyen células 293-6E; células CHO, que incluyen células CHO-S y DG44; células PER.C6® (Crucell); y células NSO. En algunas modalidades, las cadenas pesadas anti-CSFIR y/o las cadenas ligeras anti-CSFIR pueden expresarse en levadura. Véase, por ej·, publicación estadounidense No. US 2006/0270045 Al. En algunas modalidades, una célula hospedadora eucariota particular se selecciona en función de su capacidad de realizar modificaciones post-traduccionales deseadas a las cadenas pesadas anti-CSFIR y/o cadenas ligeras anti-CSFIR. Por ejemplo, en algunas modalidades, las células CHO producen polipéptidos que tienen un mayor nivel de sialilación que el mismo polipéptido producido en células 293.

La introducción de uno o más ácidos nucleicos en una célula hospedadora deseada puede lograrse mediante cualquier método, que incluyen de modo no taxativo, transfección de fosfato de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrano, transfección mediada por lípidos catiónicos, electroporación, transducción, infección, etc. Los ejemplos de métodos no taxativos se describen en, por ej., Sambrook et ál. , Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3era ed. Coid Spring Harbor Laboratory Press (2001). Los ácidos nucleicos pueden transfectarse de forma transitoria o estable en las células hospedadoras deseadas, de acuerdo con cualquier

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL método adecuado.

En algunas modalidades, uno o más polipéptidos pueden producirse in vivo en un animal que se modificó genéticamente o transfectó con una o más moléculas de ácido nucleico que codifican los polipéptidos, de acuerdo con cualquier método adecuado.

Purificación de anticuerpos anti-CSFIR

Los anticuerpos anti-CSFIR pueden purificarse mediante cualquier método adecuado. Los métodos incluyen, de modo no taxativo, el uso de matrices de afinidad o cromatografía de interacción hidrofóbica. Los ligandos de afinidad adecuados incluyen ECD del CSF1R y ligandos que unen regiones constantes de anticuerpo. Por ejemplo, una Proteína A, Proteína G, Proteína A/G o una columna de afinidad de anticuerpos puede usarse para unir la región constante y para purificar un anticuerpo anti-CSFIR. La cromatografía interactiva hidrofóbica, por ejemplo, una columna de butilo o fenilo, también puede ser adecuado para purificar algunos polipéptidos. En la técnica se conocen varios métodos adecuados de purificación de polipéptidos.

Producción sin células de anticuerpos anti-CSFIR

En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR se produce en un sistema sin células. Los ejemplos no taxativos de sistemas sin células se describen, por ej., en Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends

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Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et ál., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003).

Composiciones y métodos terapéuticos • Métodos para tratar enfermedades usando anticuerpos antiCSFIR

Los anticuerpos de la invención y composiciones que comprenden anticuerpos de la invención, se proporcionan para usar en métodos de tratamiento para humanos o animales. También se proporcionan métodos para tratar una enfermedad que comprende administrar anticuerpos anti-CSFIR. Los ejemplos no taxativos de enfermedades que pueden tratarse con anticuerpos anti-CSFIR incluyen, de modo no taxativo, RA, MS, cáncer, pérdida de masa ósea osteolítica inducida por metástasis, trastornos osteoliticos y pérdida de masa ósea inducida por hipercalcemia.

En algunas modalidades, se proporcionan los métodos para tratar afecciones inflamatorias que comprenden administrar un anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, una afección inflamatoria se selecciona de psoriasis, SLE (lupus), COPD, dermatitis atópica y ateroesclerosis, síndrome de activación de macrófagos e histiocitosis X.

En algunas modalidades, se proporcionan métodos para tratar una afección inflamatoria que comprende administrar un anticuerpo anti-CSFIR, donde la afección inflamatoria se selecciona de: enfermedad vascular proliferativa, síndrome de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL distrés respiratorio agudo, toxicidad mediada por citocinas, toxicidad de interleucina-2, apendicitis, úlceras pépticas, gástricas y duodenales, peritonitis, pancreatitis, colitis ulcerosa, pseudomembranosa, aguda e isquémica, diverticulitis, epiglotitis, acalasia, colangitis, colecistitis, hepatitis, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, enteritis, enfermedad de Whipple, asma, alergia, choque anafiláctico, enfermedad inmune compleja, isquemia de órganos, lesión por reperfusión, necrosis de órganos, fiebre del heno, sepsis, septicemia, choque endotóxico, caquexia, hiperpirexia, granuloma eosinofílica, granulomatosis, sarcoidosis, aborto séptico, epididimitis, vaginitis, prostatitis, uretritis, bronquitis, enfisema, rinitis, fibrosis quística, neumonitis, alvealitis, bronquiolitis, faringitis, pleuritis, sinusitis, influenza, infección por virus sincicial respiratorio, infección por herpes, infección por VIH, infección por el virus de la hepatitis B, infección por el virus de la hepatitis C, bacteremia diseminada, fiebre del dengue,. candidiasis, malaria, filariasis, amebiasis, quiste hidático, ardor, dermatitis, dermatomiositis, quemaduras de sol, urticaria, verrugas, ronchas, vasulitis, angitis, endocarditis, arteritis, ateroesclerosis, tromboflebitis, pericarditis, miocarditis, isquemia de miocardio, periarteritis nodosa, fiebre reumática, enfermedad de Alzheimer, enfermedad

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL celíaca, insuficiencia cardíaca congestiva, meningitis, encefalitis, infarto cerebral, embolismo cerebral, síndrome de Guillain-Barre, neuritis, neuralgia, lesión de la médula espinal, parálisis, uveitis, artritides, artralgias, osteomielitis, fasciitis, enfermedad de Paget, gota, enfermedad periodontal, sinovitis, miastenia gravis, tiroiditis, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Goodpasture, síndrome de Behcets, rechazo de aloinjerto, enfermedad injerto-versus-huésped, espondilitis anquilosante, enfermedad de Berger, diabetes tipo 1, diabetes tipo 2, enfermedad de Berger, síndrome de Retier y enfermedad de Hodgkins o para tratar inflamación asociada con estas afecciones.

En algunas modalidades, se proporcionan los métodos para tratar el cáncer que comprenden administrar un anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, el cáncer es un cáncer que secreta CSF1. En algunas modalidades, el cáncer es uno o más cánceres que se seleccionan de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer endometrial, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, cáncer de esófago, carcinoma de células escamosas, melanoma uveal, linfoma folicular, carcinoma de células renales, cáncer cervical y cáncer de ovario. En algunas modalidades, un anticuerpo anti-CSFIR es útil para tratar uno o más cánceres que se seleccionan de cáncer de pulmón, cáncer colorrectal, cáncer de cerebro, cáncer

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL pancreático, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de hígado, leucemia, linfoma, enfermedad de Hodgkin, mieloma múltiple, melanoma, astrocitoma, cáncer de estómago y adenocarcinoma pulmonar.

Rutas de administración y portadores

En varias modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse in vivo por varias rutas, que incluyen, de modo no taxativo, oral, intra-arterial, parenteral, intranasal, intramuscular, mtracardíaca, intraventricular, 10 intratraqueal, bucal, rectal, intraperitoneal, intradérmica, tópica, transdérmica e intratecal, o de otra forma por implante o inhalación. Las composiciones en cuestión pueden formularse en preparaciones en formas sólida, semisólida, líquida o gaseosa, que incluyen, de modo no taxativo, 15 comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, ungüentos, soluciones, supositorios, enemas, inyecciones, inhaladores y aerosoles. Una molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-CSFIR puede recubrirse con micropartículas de oro y administrarse intradérmicamente por un dispositivo de 20 bombardeo de partículas, o pistola de genes, tal como se describe en la bibliografía (véase, por ej . , Tang et ál. , Nature 356:152-154 (1992)) . La formulación y vía de administración apropiada puede seleccionarse de acuerdo con la solicitud pretendida.

En varias modalidades, las composiciones que comprenden

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpos anti-CSFIR se proporcionan en formulaciones con una gran variedad de portadores farmacéuticamente aceptables (véase, por ej., Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20a ed. (2003); Ansel et ál., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7a ed. , Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et ál., Handbook of Pharmaceutical Excipiente, 3a ed., Pharmaceutical Press (2000)). Existen varios portadores farmacéuticamente aceptables disponibles, que incluyen vehículos, adyuvantes y diluyentes. Además, también hay disponibles varias sustancias auxiliares farmacéuticamehte aceptables, tales como agentes amortiguadores y que ajustan el pH, agentes que ajustan la tonicidad, estabilizadores, agentes humectantes y similares. Los ejemplos no taxativos de portadores incluyen solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de estos.

En varias modalidades, las composiciones que comprenden anticuerpos anti-CSFIR pueden formularse para inyección, que incluyen administración subcutánea, disolviéndolos, suspendiéndolos o emulsificándolos en un solvente acuoso o no acuoso, tales como aceites vegetales u otros, glicéridos de ácido alifático sintético, ásteres de ácidos alifáticos mayores o propilenglicol; y si se desea, con aditivos convencionales tales como solubilizantes, agentes isotónicos,

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL agentes suspensores, agentes emulsificantes, estabilizadores y conservadores. En varias modalidades, las composiciones pueden formularse para inhalación, por ejemplo, usando propelentes aceptables presurizados tales como diclorodifluorometano, propano, nitrógeno y similares. Las composiciones también pueden formularse, en varias modalidades, en microcápsulas de liberación sostenida, tales como polímeros biodegradables o no biodegradables. Un ejemplo no taxativo de formulación biodegradable incluye polímero de ácido poliláctico-ácido glicólico. Un ejemplo no taxativo de formulación no biodegradable incluye un éster de ácido graso de poliglicerina. Se describen determinados métodos para realizar tales formulaciones, por ejemplo, en EP 1 125 584 Al.

También se proporcionan paquetes y kits farmacéuticos que comprenden uno o más recipientes, cada uno conteniendo una o más dosis de un anticuerpo anti-CSFIR. En algunas modalidades, se proporciona una dosificación unitaria donde la dosificación unitaria contiene una cantidad predeterminada de una composición que comprende un anticuerpo anti-CSFIR, con o sin uno o más agentes adicionales. En algunas modalidades, tal dosificación unitaria se suministra mediante jeringa para inyección prellenada para un solo uso. En varias modalidades, la composición contenida en la dosificación unitaria puede comprender solución salina, sucrosa o

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL similares; un amortiguador, tal como fosfato o similares; y/p puede formularse dentro de un intervalo de pH estable y eficaz. De manera alternativa, en algunas modalidades, la composición puede proporcionarse como un polvo liofilizado 5 que puede reconstituirse tras la adición de un líquido adecuado, por ejemplo, agua estéril. En algunas modalidades, la composición comprende una o más sustancias que inhiben la agregación de proteínas, que incluyen, de modo no taxativo, sucrosa y arginina. En algunas modalidades, una composición 10 de la invención comprende heparina y/o proteoglicano.

Las composiciones farmacéuticas se administran en una cantidad eficaz de tratamiento o profilaxis de la indicación específica. La cantidad terapéuticamente eficaz depende generalmente del peso del sujeto que está siendo tratado, su 15 condición física o de salud, amplitud de la afección a tratar o la edad del sujetó que está siendo tratado. En general, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de alrededor de 10 pg/kg en peso corporal a alrededor de 100 mg/kg en peso corporal por dosis. En algunas 20 modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de alrededor de 50 pg/kg en peso corporal a alrededor de 5 mg/kg en peso corporal por dosis. En algunas modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de 25 alrededor de 100 pg/kg en peso corporal a alrededor de 10 mg/kg

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL en peso corporal por dosis. En algunas modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de alrededor de 100 pg/kg en peso corporal a alrededor de 20 mg/kg en peso corporal por dosis. En algunas modalidades, los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse en una cantidad en el intervalo de alrededor de 0.5 mg/kg en peso corporal a alrededor de 20 mg/kg en peso corporal por dosis.

Las composiciones de anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse a los sujetos tal como sea necesario. La determinación de la frecuencia de administración puede realizarse por expertos en la técnica, tales como un médico tratante en función de las consideraciones de la afección que esta siendo tratada, edad del sujeto que está siendo tratado, gravedad de la afección que está siendo tratada, estado general de salud del sujeto que está siendo tratado y similares. En algunas modalidades, una dosis eficaz de un anticuerpo anti-CSFIR se administra a un sujeto una o más veces. En varias modalidades, una dosis eficaz de un anticuerpo anti-CSFIR se administra al sujeto una vez al mes, con un intervalo mayor a una vez al mes, tal como, por ejemplo, cada dos meses o cada tres meses. En otras modalidades, una dosis eficaz de un anticuerpo anti-CSFIR se administra con un intervalo menor a una vez por mes, tal como, por ejemplo, cada dos semanas o cada semana. Una dosis eficaz de un anticuerpo anti-CSFIR se administra al sujeto al ω

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INDUSTRIAL Q) menos una vez. En algunas modalidades, la dosis eficaz de un anticuerpo anti-CSFIR puede administrarse múltiples veces, que incluyen períodos de al menos un mes, al menos seis meses o al menos un año.

Terapia combinada

Los anticuerpos anti-CSFIR pueden administrarse solos o con otros modos de tratamiento. Pueden proporcionarse antes, prácticamente de forma contemporánea con o luego de otros modos de tratamiento, por ejemplo, cirugía, quimioterapia, terapia de radiación o la administración de un agente biológico, tal como otro anticuerpo terapéutico. Para el tratamiento de la artritis reumatoide, pueden administrarse anticuerpos anti-CSFIR con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, metotrexato, agentes anti-TNF tales como Remicade, Humira, Simponi y Enbrel; glucocorticoides tales como prednisona;

Leflunomida; Azotioprina; inhibidores de JAK tales como CP 590690; inhibidores de SYK tales como R788; anticuerpos anti-IL-6; anticuerpos anti-IL-6R; anticuerpos anti-CD-20; anticuerpos anti-CD19; anticuerpos anti-GM-CSF y anticuerpos anti-GM-CSF-R. Para el tratamiento de esclerosis múltiple, pueden administrarse anticuerpos anti-CSFIR con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, interferón alfa; interferón beta; prednisona, anticuerpos de anti integrina alfa4 tal como Tysabri; anticuerpos

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anti-CD20 tales como Rituxan; FTY720 (Fingolimod) y Cladribine (Leustatin).

EJEMPLOS

Los ejemplos descritos a continuación pretenden ser puramente ejemplos de la invención y no deberían considerarse como taxativos de la invención de ningún modo. Los ejemplos no pretenden representar que los experimentos a continuación son todos o los únicos experimentos realizados. Se han realizado esfuerzos para asegurar la exactitud con respecto a números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero se deben tener en cuenta algunos errores experimentales y desviaciones. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio, la temperatura se da en grados centígrados y la presión es la atmosférica o cercana a esta.

Ejemplo 1: Selección de Fabs que se unen al dominio extracelular (ECD) de CSF1R

Se inmunizaron ratones con una fusión Fe de dominio extracelular de CSF1R humano, ECD.506-Fe de hCSFIR (SEQ ID NO: 6) . Los bazos de ratones inmunizados se aislaron y se creo una biblioteca de expresión de fagos Fab a partir de esplenocitos. Se seleccionó un fago que expresa Fab para unirse al ECD del CSF1R humano. Los Fabs de fagos de unión positiva se expresaron y purificaron de bacterias. Se selecciono un total de 1056 clones de Fab para análisis

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL adicional.

Se analizaron Fabs por la capacidad de unirse al ECD del CSF1R humano, unión de bloqueo de CSF1 humano al ECD del CSF1R humano, y unión de bloqueo de IL34 humana al ECD del CSF1R humano. Luego se realizó el análisis de secuencias y agrupamiento de Fabs que se seleccionaron de ese análisis y se seleccionaron determinados Fab únicos.

Los Fab únicos se analizaron adicionalmente por la capacidad de unirse al ECD del CSF1R humano, la capacidad de unirse al ECD del CSF1R de macaco y la capacidad de unirse al ECD del CSF1R de ratón. Los Fabs también se analizaron por la capacidad de bloquear la unión de CSF1 humano al ECD del CSF1R humano y la capacidad de bloquear la unión de IL34 humana al ECD del CSF1R humano y la capacidad de inhibir la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando en presencia de CSF1 o IL34. (No se muestran los datos).

• Ejemplo 2: Reformateo de Fabs anti-CSFIR para realizar anticuerpos quiméricos

Posterior a la caracterización de Fab, se seleccionaron once de los Fabs para reformatearlos en anticuerpos quiméricos. Cada Fab se reformateó en un anticuerpo quimérico que comprende una región constante de cadena pesada de IgG4 humana con la mutación S241P, y una región constante de cadena ligera κ humana. Brevemente, las regiones VH de Fab se

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL clonaron y expresaron del vector pTT5 (Biotechñology Research Institute, Montreal, Canadá; y National Research Research Council of Cañada, Ottawa, Canadá) modificado para contener una secuencia líder IgH de ratón (SEQ ID NO: 4) y una región constante de cadena pesada de IgG4 humana con la mutación S241P (SEQ ID NO: 94) . Las regiones VL de Fab se clonaron y expresaron del vector pTT5 modificado para contener una secuencia líder de IgK de ratón (SEQ ID NO: 3) y una región constante de cadena ligera de IgK humana (SEQ ID NO: 95) . Las regiones V de Fab se insertaron de forma tal de no introducir secuencias de aminoácido no derivadas de anticuerpos en las proteínas finales.

• Ejemplo 3: Expresión y caracterización de anti cuerpos quiméricos

Los anticuerpos quiméricos se expresaron transitoriamente y purificaron sustancialmente tal como se describe más adelante en el Ejemplo 5.

Los 11 anticuerpos quiméricos se sometieron a ensayo para unión al ECD del CSF1R humano, de macaco y de ratón. Los anticuerpos quiméricos también se sometieron a ensayo por la capacidad de bloquear la unión de CSF1 humano al ECD del CSF1R humano, la capacidad de bloquear la unión de IL34 humano al ECD del CSF1R humano, la capacidad de bloquear la unión

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL de CSF1 humano al ECD del CSF1R de macaco y la capacidad de inhibir la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando en presencia de CSF1 o IL34 . Los anticuerpos quiméricos se ensayaron adicionalmente para la unión de CSF1R a la superficie de células. Finalmente, los anticuerpos quiméricos se ensayaron para confirmar que no inducen la fosforilación de CSF1R en ausencia del ligando. (No se muestran los datos).

• Ejemplo 4: Humanización de anticuerpos antiCSFIR

De los análisis descritos anteriormente, se seleccionaron para humanización los anticuerpos antiCSFIR quiméricos 0301, 0302 y 0311. Los anticuerpos se humanizaron cambiando determinados residuos de aminoácidos en las regiones marco de las regiones variables de cadena pesada y ligera. Los criterios usados para humanización fueron tal como se describió previamente, por ej., en la publicación estadounidense No. US 2009/0136500.

Para cAb 0301, se diseñaron tres regiones variables humanizadas de cadena pesada y dos regiones variables humanizadas de cadena ligera, para un total de seis anticuerpos humanizados, Abl a Ab6 . Para cAb 0302, se diseñaron dos regiones variables humanizadas

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL de cadena pesada y tres regiones variables humanizadas de cadena ligera, para un total de seis anticuerpos humanizados, Ab7 a Abl2. Para cAb 0311, se diseñaron dos regiones variables humanizadas de cadena pesada y dos regiones variables humanizadas de cadena ligera, para un total de cuatro anticuerpos humanizados, Abl3 a Abl6.

Las secuencias para cada una de las regiones variables humanizadas de cadena pesada y regiones variables humanizadas de cadena ligera, alineadas con las secuencias de las regiones variables de anticuerpo quimérico parental y las secuencias de las regiones marco variables aceptoras humanas se muestran en las Figuras 1A-1C (cadenas pesadas) y 2 (cadenas ligeras). Los cambios en las secuencias de regiones variables humanizadas con relación a las secuencias de regiones marco variables aceptoras humanas están recuadrados. Cada una de las CDR para cada una de las regiones variables se muestra en una región recuadrada, y se marca como CDR sobre las secuencias recuadradas.

La Tabla 8, a continuación, muestra las secuencias completas para las cadenas pesadas humanizadas y cadenas ligeras humanizadas de los anticuerpos Abl a Abl6. El nombre y SEQ ID NOs de la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL cadena pesada humanizada y cadena ligera humanizada de cada uno de esos anticuerpos se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2: Cadenas pesadas y cadenas ligeras humanizadas de Abl a Abl6

<td> Anticuerpo humanizado</td><td> HC humanizado</td><td> | SEQ ID ÑO 4</td><td> LC humanizado</td><td> SEQ ID NO</td>

INSTITUTO MEXICANO • Ejemplo 5: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados se unen al ECD del CSF1R de humano y de macaco, pero no al ECD del CSF1R de ratón.

Los 16 anticuerpos humanizados se expresaron de forma transitoria en células CHO, de la siguiente forma. Las células CHO-3E7 se cotransfectaron con plasmidos de expresión de cadena ligera y pesada individuales a una relación molar de 1 plásmido de cadena pesada a 2 plasmidos de cadena ligera 10 usando polietilenoinimina (PEI) a una relación ADN:PEI de 1:5. El total de ADN usado por transfección fue 1.5 pg/ml de células.

Los anticuerpos humanizados se purificaron de sobrenadantes de células transfectadas usando columnas HiTrap 15 Protein A HP (GE Healthcare) seguido por mayor purificación usando columnas Phenyl HP (GE Healthcare) . Los sobrenadantes que contienen anticuerpo se cargaron en columnas HiTrap Protein A HP preequilibradas con PBS/NaCl 0.5M. Las columnas cargadas con anticuerpo se lavaron con 10 volúmenes de 20 columna de PBS/NaCl 0.5M, y eluyeron con un gradiente de paso lineal mezclado de glicina 0.1 M, pH 2.7/NaCl 0.5 M directamente en 100 ul de amortiguador Tris 1M, pH 8.0. Los eluatos que contienen anticuerpo se dializaron contra PBS, luego de lo cual se agregaron (NH4)2SO4 2.4 M (Sigma) para 25 lograr una conductividad igual a la de fosfato de potasio

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

10mM pH7.0/(NH4) 2SO4 1.2 M. Los anticuerpos se cargaron luego en columnas Fenil HP de 1 mi (GE Healthcare) preequilibradas con fosfato de potasio 10 mM pH7.0/(NH4) 2SO4 1.2 M. Las columnas cargadas con anticuerpo se lavaron con 15 volúmenes de columna de fosfato de potasio 10 mM pH7.0/(NH4) 2SO4 1.2 M, y se eluyeron con un gradiente de 20 volúmenes de columna de fosfato de potasio 10 mM, pH 7.0. Las fracciones que contienen anticuerpos se agruparon y dializaron contra PBS.

Los anticuerpos humanizados, junto con sus anticuerpos quiméricos parentales (cAbs), se ensayaron para unión al ECD del CSF1R de humano, macaco y ratón, de la siguiente manera.

Actividad de unión de CSF1R humano

Las placas ELISA de fondo transparente de noventa y seis pocilios se cubrieron durante la noche con 1 pg/ml de ECD.506-Fc de hCSFIR recombinante (SEQ ID NO: 6; FivePrime Therapeutics) o quimera de M-CSF R Fe humano (R&D Systems) en PBS. La mañana siguiente, los pocilios se lavaron cuatro veces con Tween20 0.05% en PBS (PBST) y se bloquearon con Blocker-Blotto (Pierce). 50 μΐ de 0.5x de diluciones seriales del anticuerpo humanizado o anticuerpo quimérico parental, comenzando con 2000 ng/ml, diluido 1:1 en Blocker-Blotto se agregaron a los pocilios recubiertos con CSF1R. Luego de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL incubarse a temperatura ambiente (RT, por sus siglas en inglés) durante 90 min, los pocilios se lavaron cuatro veces con PBST, y se agregó una dilución 1:5000 de anticuerpo de cadena ligera kappa de cabra antihumano conjugado con peroxidasa (Sigma) en Blocker-Blotto a cada pocilio. Luego de la incubación a RT durante 60 min, los pocilios se lavaron cuatro veces con PBST, y se agregaron 50 μΐ de diclorhidrato d® o-fenilenodiamina del sustrato de peroxidasa (Sigma) a cada pocilio. Luego de la incubación a RT durante 30 min, los valores A450 de cada pocilio se leyeron directamente en un espectrofotómetro SpectraMaxPlus con software SoftMaxPro (Molecular Devices).

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 3A-3C. Todos los anticuerpos humanizados se unieron al ECD del CSF1R humano dentro del intervalo de concentraciones.

Curva de unión de CSF1R de macaco

La curva de unión para cada anticuerpo humanizado que se une al ECD del CSF1R de macaco se determinó tal como se describe anteriormente para CSF1R de humano, excepto los pocilios de placas ELISA de fondo transparente que se recubrieron durante la noche con 2 pg/ml de ECD-Fc de cynoCSFIR recombinante (FivePrime Therapeutics, SEQ ID NO: 8, pero sin la secuencia líder de aminoácido 19).

Los resultados de ese experimento se muestran en las

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Figuras 4A-4C. Todos los anticuerpos humanizados se unieron al ECD del CSF1R de macaco dentro del intervalo de concentraciones.

Curva de unión de CSF1R de ratón

La curva de unión para cada anticuerpo humanizado que se une al ECD del CSF1R de ratón se determinó tal como se describe anteriormente para CSF1R humano, excepto los pocilios de placas ELISA de fondo transparente que se recubrieron durante la noche con 2 pg/ml de ECD-Fe de mCSFIR recombinante (FivePrime Therapeutics, SEQ ID NO: 93).

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 5A-5C. Ninguno de los anticuerpos humanizados o los anticuerpos quiméricos parentales, se unieron detectablemente al ECD de CSF1R de ratón sobre el intervalo de concentraciones sometidas a prueba.

Cálculo de las EC50

La Tabla 3 muestra la EC50, calculada usando el algoritmo de análisis de regresión no linear (ajustado a la curva) del software GraphPad Prism (GraphPad Software) para cada unión de anticuerpo humanizado al ECD del CSF1R humano y ECD del CSF1R de macaco. Debido a que ninguno de los anticuerpos quiméricos se unió detectablemente al ECD del CSF1R de ratón, una EC50 no pudo calcularse á partir de esos datos. La Tabla 3 también incluye las EC50 calculadas para los anticuerpos quiméricos parentales.

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Tabla 3: Actividad de unión de anticuerpos anti-CSFIR humanizados

<td> Anticuerpo humanizado</td><td> EC50 de ECD í del CSFIR humano (ng/ml)</td><td> EC50 de ECD del CSFIR de macaco(ng/ml)</td>

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL • Ejemplo 6: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados inhiben la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando

El CSF1R se fosforila en presencia de los ligandos CSF1 o IL34. Los anticuerpos humanizados, junto con sus anticuerpos quiméricos parentales (cAbs), se sometieron a prueba por su capacidad de inhibir la fosforilación del CSF1R inducida por cualquier ligando, de la siguiente manera. Inhibición de la fosforilación inducida por CSF1

Las células CHO transfectadas con CSF1R (SEQ ID NO: 2) se incubaron con diluciones seriales de cada anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico parental, comenzando en 8 gg/ml, durante 60 min en hielo, luego de lo cual se agregaron 3.3 nM de CSF1 humano (M-CSF, R&D Systems) a las células. (Para la serie 0301 de anticuerpos humanizados, se usaron diluciones seriales comenzando en 2 pg/ml de anticuerpo humanizado y anticuerpo quimérico parental.) Las células se incubaron durante 3 minutos a 37°C, y luego se lisaron por adición de l/10x volumen de lOx amortiguador de lisis celular (Cell Signaling Technology). La cantidad de CSF1R fosforilado en los Usados celulares se cuantificó usando un kit ELISA fosfo-M-CSF R humano (R&D Systems) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 6A a 6C. Todos los anticuerpos humanizados pudieron inhibir la fosforilación inducida por CSF1 humano del ECD del

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CSF1R humano dentro del intervalo de concentraciones sometidas a prueba.

Inhibición de la fosforilación inducida por IL-34

Las células CHO transfectadas con CSF1R (SEQ ID NO: 2) se incubaron con 0.002 a 8 yg/ml de cada anticuerpo humanizado o un anticuepo quimérico parental durante 60 min en hielo, luego de lo cual se agregaron 3.3 nM de IL34 humano (FivePrime Therapeutics; SEQ ID NO: 68) a las células. Las células se incubaron durante 3 minutos a 37°C, y luego se lisaron por adición de l/10x volumen de lOx amortiguador de lisis celular (Cell Signaling Technology). La cantidad de CSF1R fosforilado en los Usados celulares se cuantificó usando un kit ELISA fosfo-M-CSF R humano (R&D Systems) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 7A a 7C. Todos los anticuerpos humanizados pudieron inhibir la fosforilación inducida por IL34 humano del CSF1R humano dentro del intervalo de concentraciones sometidas a prueba.

• Ejemplo 7: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados bloquean CSF1 humano e IL34 humana que se unen a CSF1R de humano y macaco.

Actividad de bloqueo de CSF1R/CSF1 humano

Los anticuerpos humanizados, junto con los anticuerpos quiméricos parentales (cAbs), se sometieron a prueba por su

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104 capacidad de bloquear la unión del CSF1 de humano al ECD del CSF1R de humano y macaco, de la siguiente manera.

El CSF1 humano recombinante (M-CSF; R&D Systems) se biotiniló usando un kit marcador NH2-Biotina (Dojindo Molecular Technologies) . Cien μΐ de 1 pg/ml de CSF1 biotinilado en PBST/0.1% de BSA se agregó a los pocilios de placas renubiertas con Estreptavidina Reacti-Bind (Pierce) prebloqueadas con amortiguador de bloqueo SuperBlock (Pierce) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 50 μΐ de 0.5x de diluciones seriales del anticuerpo humanizado o anticuerpo quimérico parental, comenzando con 2000 ng/ml, se incubaron con 50 ng/ml de ECD.506-Fc de hCSFIR (SEQ ID NO: 6; FivePrime Therapeutics) o 50 ng/ml de ECD-Fe de cynoCSFIR (FivePrime Therapeutics, SEQ ID NO: 8, pero sin la secuencia líder de aminoácido 19) en 100 μΐ de PBST/0.1% de BSA durante 90 min a RT, luego de lo cual la mezcla se transfirió a uno o más pocilios de una placa recubierta con ligando. Luego de 90 min a RT, los pocilios se lavaron con PBST, y se agregó una dilución 1:5000 de una IgG de cabra antihumana conjugada con peroxidasa específica de fragmento Fe (Jackson Immuno Research) en PBST/0.1% de BSA a cada pocilio. Luego de la incubación a RT durante 60 min, los pocilios se lavaron con PBST/0.1% de BSA, y se agregó diclorhidrato de o-fenilenodiamina del sustrato de peroxidasa (Sigma) a cada pocilio. Luego de la incubación a RT durante 30 min, los valores A450 de cada pocilio se leyeron

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL directamente en un espectrofotómetro SpectraMaxPlus con software SoftMaxPro (Molecular Devices).

Los resultados de ese experimento para CSF1R de macaco se muestran en las Figuras 8A a 8C. Todos los anticuerpos humanizados basados en Fabs 0301 y 0311 pudieron bloquear la unión de CSF1 humano al ECD del CSF1R de macaco dentro del intervalo de concentraciones sometidas a prueba. Ninguno de los anticuerpos humanizados basados en Fab 0302 mostró actividad de bloqueo similar en ese experimento en comparación con la actividad de bloqueo de cAb 0302.

Actividad de bloqueo de CSF1R/IL34 humano

Los anticuerpos humanizados se sometieron a prueba por su capacidad de bloquear la unión de IL34 humana al ECD del CSF1R humano. La actividad de bloqueo de cada anticuerpo humani7!ado se determinó tal como se describe anteriormente para el bloqueo de CSF1, excepto IL34 humana recombinante (FivePrime Therapeutics; SEQ ID NO: 68) que se biotiniló usando un kit marcador de NH2-Biotina (Dojindo Molecular Technologies), y luego 100 μΐ de 1 pg/ml de IL34 recombinante biotinilado en PBST/0.1% de BSA se agregó a los pocilios de placas recubiertas con Estreptavidina Reacti-Bind (Pierce) prebloqueadas con amortiguador de bloqueo SuperBlock (Pierce) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Los resultados de ese experimento para CSF1R de macaco se muestran en las Figuras 9A a 9C. Todos los anticuerpos humanizados basados en Fabs 0301 y 0311 pudieron bloquear la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL unión de IL34 humano al ECD del CSF1R de macaco dentro del intervalo de concentraciones sometidas a prueba. Ninguno de los anticuerpos humanizados basados en Fab 0302 mostró actividad de bloqueo similar en ese experimento en comparación con la actividad de bloqueo de cAb 0302.

Cálculo de las IC50

La Tabla 4 muestra la IC50, calculada usando al algoritmo de análisis de regresión no linear (ajustado a la curva) del software GraphPad Prism (GraphPad Software) para la inhibición de la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando por cada anticuerpo humanizado. La Tabla 4 también muestra la IC50, calculada usando al algoritmo de análisis de regresión no linear (ajustado a la curva) del software GraphPad Prism (GraphPad Software) para bloquear la unión del ligando al ECD del CSF1R por cada anticuerpo humanizado. Finalmente, la Tabla 4 muestra la cantidad de aminoácidos en las regiones marco de la cadena pesada y ligera de cada anticuerpo humanizado que se retromutaron en el residuo de aminoácidos de ratón correspondiente. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado h0301LlHl tiene un aminoácido en una región marco de cadena ligera que se retromutó en el aminoácido de ratón, y un aminoácido en las regiones marco de cadena pesada que se retromutó en el aminoácido de ratón. Con referencia a las Figuras 1A-1C y 2A-2C, el aminoácido retromutado en el marco de cadena ligera está en la posición 1 en el marco 1, y el aminoácido retromutado en la

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL cadena pesada está en la posición 71 en el marco 3 de acuerdo con la numeración de Kabat (véase la Figura IB).

Tabla 4: Actividad de bloqueo de anticuerpos anti-CSFIR humanizados

<td colspan="2"> 1 IIC50 de ECD</td><td rowspan="2"> IC50 de ECD del CSF1R humano/ IL34 hiunano (ng/ml)</td><td rowspan="2"> IC50 de ECD de cynoCSFIR/ CSF1 humano (ng/ml)</td><td rowspan="2"> IC50 de ECD de cynoCSFIR/ IL34 humano (ng/ml)</td><td rowspan="2"> Residuos l de ratón 1 retromuta do ί enFR | (L+H) i</td>

<td> Anticuerpo humanizado</td><td> del CSF1R humano/ CSF1 humano (nginl)</td>

<td> h03l1-Lllll</td><td> 507.5</td><td> 667.4 ;</td><td> 24.68 '</td><td> 53.69</td><td> 2 x 2</td>

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DE LA PROPIEDAD 00

INDUSTRIAL Q)

Ejemplo 8: Constantes de bloqueo de anticuerpos antiCSFIR humanizados

Las ka, kd y KD para la unión al ECD del CSF1R humano se determinó para cada uno de los anticuerpos humanizados de la siguiente manera.

La cinética de unión de anticuerpos anti-CSFIR humanizados al ECD del CSF1R se determinó usando Biacore T100 Surface Plasmon Resononance (SPR) (GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NY) . Cada uno de los anticuerpos antiCSFIR humanizados se capturó en un chip sensor CMS inmobilizado con anticuerpo IgG antihumano usando el kit de captura de anticuerpos humanos (GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NY) en 150RU de modo que el valor Rmáx para la unión de ECD. 506 de hCSFIR (SEQ ID NO: 5) fue 100RU. Se recomiendan los valores de Rmáx menores a 150RU para determinar de forma precisa los valores cinéticos. Se usó 10 mM Hepes de solución salina, pH 7.4, con Tween20 al 0.05% (HPS-P; GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NY) como el amortiguador de dilución y ejecución. Se inyectó ECD.506 de hCSFIR en seis concentraciones (90 nM, 30 nM, 10 nM, 3,33 nM, 1.11 nM y 0 nM) durante 2 minutos y se observó disociación durante 5 minutos para determinar parámetros cinéticos de unión de anticuerpo humanizado/ECD de hCSFIR. La constante de asociación, constante de disociación, afinidad y capacidad de unión de cada uno de los Fabs para ECD del CSF1R humano se

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL calculó usando el paquete de software Biacore T100 Evaluation usando el modelo de unión 1:1.

Los resultados de las determinaciones cinéticas se muestran en la Tabla 5.

———Afinidad—de—unión de anticuerpos humanizados para CSF1R humano

<td> Γ huAbAb</td><td> k.</td><td> Ki«')</td><td> Kn (nM)</td>

Todos menos dos anticuerpos humanizados mostraron afinidades de unión sub-nanomolar para ECD del CSF1R humano, y los restantes dos anticuerpos humanizados mostraron afinidades de unión para ECD del CSF1R humano menores a 2 nM.

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL • Ejemplo 9: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados bloquean la fosforilación inducida por el ligando

Según los datos anteriores, incluyendo la unión de CSF1R e inhibición del ligando, y la probabilidad de la inmunogenicidad para cada anticuerpo humanizado, se seleccionaron tres anticuerpos humanizados para estudio adicional: 0301-L0H0, 0301-L1H0 y 0311-L0H1.

Luego de confirmar que cada 0301-L0H0, 0301-L1H0 y 0311-L0H1 se une a CSF1R en la superficie de las células (no se muestran los datos), cada uno de los anticuerpos se sometió a prueba por la raparί dad de bloquear la fosforilación de CSF1R inducida por el ligando en células CHO, tal como se describe en el Ejemplo 6.

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 10A-10B. Los tres anticuerpos humanizados sometidos a prueba bloquearon tanto la fosforilación inducida por CSF1 (A) e inducida por IL34 (B) de CSF1R en células CHO. La Tabla 6 muestra el IC50 para bloquear la fosforilación de CSF1R inducido por el ligando para cada anticuerpo.

Tabla 6: IC50 que bloquea la fosforilación inducida por el ligando para anticuerpos humanizados

<td> | Anticuerpo</td><td colspan="2"> I IC50 de bloqueo j IC50 de bloqueo</td>

<td> । humanizado______</td><td> de CSF1 (ng/ml)</td><td> de IL34, (ng/ml)</td>

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL • Ejemplo 10: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados bloquean las respuestas de proliferación/supervivencia inducidas por el ligando de monocitos humanos principales

Los anticuerpos humanizados 0301-L0H0, 0301-L1H0 y

031Í-L0H1 se sometieron a prueba por su capacidad de bloquear las respuestas de proliferación/supervivencia de monocitos inducidos por el ligando, de la siguiente manera.

Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) humanas se aislaron de sangre de donantes sanos por centrifugación en un cojín Ficoll-Paque (GE Healthcare Bio-Sciences) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los monocitos de sangre periférica se aislaron posteriormente de la fracción de PBMC recuperada por centrifugación en un cojín Percoll™ al 48.5% (GE Healthcare Bio-Sciences). Luego de la recuperación del cojín Percoll™, los monocitos de sangre periférica purificada se estimularon con 162 pM de CSF1 humano recombinante o 1.6 nM de IL34 humano recombinante (ambos de R&D Systems) en presencia o ausencia de diluciones seriales de anticuerpo humanizado 0301-L0H0, anticuerpo humanizado 0301-L1H0 o anticuerpo humanizado 0311-L0H1. Luego de la incubación a 37°C durante 48 horas, el contenido relativo de ATP celular de cada cultivo individual se evaluó usando reactivo CellTiter Glo® (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En este ensayo, el contenido de ATP celular relativo es

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD ' INDUSTRIAL directamente proporcional a la cantidad de células viables en cultivo, y por ende refleja las respuestas de supervivencia/proliferación de monocitos.

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 11A-11B. Todos los tres anticuerpos humanizados sometidos a prueba pudieron bloquear las respuestas de supervivencia/proliferación de monocitos luego de la estimulación de CSF1 (A) o IL34 (B) . La Tabla 7 muestra los IC50 para bloquear las respuestas de proliferación/supervivencia de monocitos inducidos por el ligando para cada anticuerpo. Los valores mostrados en la Tabla 7 representan el intervalo observado a partir de tres donantes principales diferentes sometidos a prueba.

Tabla 7; IC50 de bloqueo déla supervivencia/proliferación de monocitos para anticuerpos humanizados

<td> Anticuerpo</td><td colspan="2"> | ÍC5Ó de bloqueo ’ IC50 de bloqueo</td>

<td> humanizado</td><td> de CSF1 (ng/ml)</td><td> de IL34 (n^nil)</td>

• Ejemplo 11: Los anticuerpos anti-CSFIR humanizados no estimulan directamente las respuestas de supervivencia o proliferación de monocitos humanos principales.

Los anticuerpos humanizados 0301-L0H0, 0301-L1H0 y

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0311-L0H1 se sometieron a prueba por su capacidad de estimular directamente la proliferación y/o supervivencia de monocitos principales, de la siguiente manera.

Los monocitos de sangre periférica humana se aislaron tal como se describe en el Ejemplo 10. Las diluciones seriales del anticuerpo humanizado 0301-L0H0, anticuerpo humanizado 0301-L1H0 o anticuerpo humanizado 0311-L0H1 se agregaron a los monocitos en ausencia de estimulación ya sea por CSF1 exógeno o por IL34 exógena. Luego de la incubación a 37 °C durante 48 horas, el contenido relativo de ATP de cada cultivo individual se evaluó usando reactivo CellTiter Glo® (Promega) como en el Ejemplo 10. El experimento se llevó a cabo en monocitos de sangre periférica de tres donantes diferentes.

Los resultados de ese experimento se muestran en las Figuras 12A-12C. Ninguno de los anticuerpos humanizados estimulo la proliferación o la supervivencia de monocitos principales de cualquiera de las preparaciones de monocitos principales sometidos a prueba.

• Tabla de secuencias

La Tabla 8 proporciona determinadas secuencias discutidas en la presente. Todas las secuencias de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL anticuerpos y polipéptidos se muestran sin las secuencias líder, a menos que se indique lo contrario.

Tabla 8: Breve descripción de las secuencias

<td> SEQ ID NO</td><td> Descripción</td><td> Secuencia</td>

<td> 1 I</td><td> hCSFIR (longitud completa, sin secuencia líder) i</td><td> IPVIEPSVPE LVVKPGATVT LRCVGNGSVE WDGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCTSPGD PLGGSAATKL YVKDPARPWN VLAQEWVFE EQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RKTNYSFSPW RGFTIHRAKF IQSQDYQCSA IiMGGRKVMSI SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFDVFLQH NNTKLAIPQQ SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD j FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMFFRWESA YLNbSSEQNL IQEVTVGEGL | NLKVMVEAYP GLCGFNWTYL GFFSDHQP3? KLANATTKDT YRHTFTLSL? | RLKPSBAGRY SFLARNPCGW RALTF3L7LR YPPEVSVIWT FINGSGTLLC 1 ; AASGYPQPKV TWLQCSGHTD RCD3AQVLQV WDDPYPEVLS Q3PFHKVTVQ | SLLTVETLEH NQTYSCPAÜN SVGSGSWAFI P2SAGAHTHP PBEFLFTPW ' VACKSIMALL Z-LLLLLbLYK YKQKPKYQVR WXIIESYEGK SYTFIDPTOL PYNEKWEFFR NNLQFGKTÍX? AGAFGKWEA TAFGLGKEDA VLKVAVKMbK ’ STAHADEKEA bMSELKIMSH LGQHEN7VNL LGACTHGGPV LVI7EYCCYG DbbNFLRRKA 2AMLGPSLSP GQDPEGGVDY KNIHLEKKYV RRDSGFSSQG VDTYVEMRPV STSSNDSFSE QDbDKSDGRP LELRDbLHFS SQVAQGMAFL | ASKNCIHRDV AARNVLLTNG HVAKIGDFGL ARDIMNDSNY IVKGNARLPV ! ' KWMAPESIFD CVYTVQSDVW SYGZLLWKIF SLGLNPYPGI LVNSKFYKLV = KDGYQMACPA FAPKNIYSIM QACWALEPTE RPTFQQICSF LQEQAQEDRR ERDYTNLPSS SRSGGSGSSS SELEEESSSE HLTCCECGDI AQPLLQPNNY QFC</td>

<td> i 2 I</td><td> hCSFIR (longitud completa + secuencia líder)</td><td> MGl’GVLLLLL VATAWHGQGI PVIEPSVP2L WKPGATVTL KCVGÑGSV3W DGPPSPHWTL YSDGSSSIL5 TNNATFQNTG TYRCTEPGDP LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAQSVWFED GDALLPCLL-T DPVLEAGVSu VRVRGRPLMR | HTNYSFSPWH GFTIHRAKFX QSQDYQCSAL MGGRKVMSIS IRLKVQKVIP gppaltl.vpa slvrirgbaa qivcsassvd vnfdvflqhn ntklaipoqs 1 DFHNNRYQKV bTLNLDQTOF QHAGNYSCVA SNVQGKHSTS MFFRWESAY LKLSSEQNLx QEVTVGSGLN LKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTY RHTFTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTPELTLRY PP3VSVIW1F INGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCSGHTDR CDRACVLQVW DDPYPEVLSQ EPFHKVTVQS LbTV3TL3HN QTYECRAHKS VGSGSWAFIP ISAGAHTHPP DEFLFTPVVV ACWSIMALLL LLLLLLLYKY KQKPKYQVRW KIIESYEGNS YTFIDPTQLP YNEKWEFPRJT KLQFGKTLGA GAFGKWEAT AFGLGKEDAV bKVAVKMLKS TAHADHKEAL MSELKIMSKL GQHENIVN’LL GACTHGGPVL VITEYCCYGD LLNFLRRKAE AMLGPSLSFG QDPEGGVDYK</td>

I NIHLEKKYVR RDSGFSSQGV DTYVEMRPVS T9SNDSFSEQ DLDKBCGRPL

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<td></td><td> Γ I ΐ 1</td><td> ELRDLLEFSS QVAQGXAFLA SKNCIHRDVA ARWLLTNGH VAKIGDFGLA RDIMNDSNYI VKGNARLPVK WMAPESIFEC VYTVQSDVWS VGILLWEIFS LGLNPYPGIL VKSKFYKLVK DGYQMAQPAF APKNIYSIMQ ACWALEPTHR PTFQQICSFL QEQAQ3ORRE RDYTNLPSSS RSGGSGSSSS ELEEESSS.EH LTCCEQGJZA QPLLQPKNYQ FC</td>

<td> 5 s</td><td> 1 i 1 ECD.506 de hCSFIR</td><td> 1PVIEPSVPE LWKPGATV? LRCVGNGSVE WEGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCTEPGD PLGGSAAIEL YVKCPARPWN VLAQEWVFE DQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RHTNYSFSPW HGFTIHRAKF IQSQDYQCSA LMGGRKVMSI SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFEVFLQH NNTKIAIPQG SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMFPRVVESA YLNLSSEQNL IQEVTVGEGL NLKVMVEAYP GLQGFNWTYL GPFSDHQPEP KLANATTKDT YRHTFTLSLP RLKFSEAGRY SFÍ.ARNPGGW RALTF3LTLR YPPEVSVIWT F1NGSG7LLC AASGYPQPNV TWLQCSGHTE RCDEAQVLQV WDDPYPEVLS QEPFEKVTVQ SLLTV3TLEH NQTYECRAKN SVGSGSWAFI PÍSAGAH</td>

<td> i f ' 6</td><td> ECD506-Fc de hCSFIR</td><td> IPVIEPSVP2 LWKPGATVT LRCVGNGSVE WDGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCT3PGD PLGGSAAIHL YVKDPARPWN VLAQ3WVFE DQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RHTNYSFSPW HGFTIHRAKF IQSQDYQCSA LMGGRKVMSI. SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFDVFLQH NNTKLAIPQQ SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMPFRWESA YLNLSSEQNL IQEVTVGEGL NLKVMVEAYP GLQGFNWTYL GPFSDHQPEP KLANATTKDT YRHTFTLSLP RLKPSEAGRY SFLARNPGGW RALTFELTLR YPPEVSVIWT FINGSGTLLC AASGYPQPNV TWLQCSGHTD RCDEAQVLQV WDDPYPEVLS QEPFHKVTVQ SLLTVETLEH NQTY3CRAHN SVGSGSWAFI PISAGAHEPK SSDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKT3.SK akgqprepqv YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL vkgfypsdia VSWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFPLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK ______________________________________________________________________________________________________________________________________ 1</td>

<td> i 7 !</td><td> ECD de cyuoCSFIR । (con I secuencia líder) 1</td><td> MGPGVLLL.LL WTAWHGQGI PVIEPSGPEL WKPGETWL RCVGNGSVEW DGPISPHWTL YSDGPSSVLT TTNATFQNTR TYRCTEPGD? LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAKEWVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRLRGRPLLR IITNYSFSPWH GFTIHRAKFI QGQDYQCSAL MGSRKVMSIS IRLKVQKVIP gppaltlvpa elvrirgeaa qivcsasnid vdfdvflqhn TTKLAIPQRS DFHDNRYQKV LTLSLGQVDF QHAGNYSCVA SNVQGKHS7S MFFRWESAY LDLSSEQNLI QSVTVGEGLN LKVMVEAYPG I.QGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTY RKTPTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR AL7FELTLRY PPEVSVIWTS INGSGTbLCA ASGYPQPNVT WLQCAGHTDR CDEAQVLQVW VDPHPEVLSQ EPFQKVTVQS LLTA3TLEHN QTYECRAHNS VGSGSWAFIP 1 ISAGAR 1</td>

<td> 8</td><td> ECD-Fc de cyuoCSFIR (con secuencia líder) _________i</td><td> MGPGVLLLLL W7AWHGQGI PVISPSGPBL VVKPGETVTL RCVGNGSVSW ! DGPISPHWTL YSDGPSSVLT TTNATFQNTR 7YRCTEPGDP LGGSAAIHLY j VKDPARPWNV LAKEWVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRLRGRPLLR HTNYSFSPWH GFTIHRAKFI QGQDYQCSAL MGSRKVT4SIS IRLKVQKVIP i GPPALTLVPA ELVRIRGSAA QIVCSASNID VDFDVFLQHN TTKLAIPQRS ·· DFHDNRYQKV LTLSLGQVDF QHAGNYSCVA SNVQGKHSTS MFFRWESAY 1 LDLSSEQNLI QEVTVGEGLN LKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK · LAKATTKDTY RHTFTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRY ! PPEVSVIWTS INGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCAGETDR CDEAQVLQVW ] VDPHPEVLSQ EPFQKVTVQS LLTAETLEHN QTYECRAHNS VGSGSWAFIP ' ISAGARGSEP KSSDKTHTCP PCPAPSLLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP 1 EVTCWVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRWSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGOP EWYKTTPPV LOSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MH2ALEXHYT QKSLSLSPGK</td>

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<td></td><td> 3</td><td> Secuencia líder de cadena ligera</td><td> METDTLLLKV LLLWVFGSTG ' i'</td>

<td></td><td> 4</td><td> Secuencia líder de cadena pesada</td><td> MAVLGLLLCL VTFPSCVLS f</td>

<td> 5</td><td> 9</td><td> Región variable de cadena pesada Fab 0301</td><td> EVQLQQSGPE LVRPGASVKM SCKASGYTFT DNYMIWKQS HGKSLEWTGD ! INPYNGGTTF NQKFKGKATL 7VFKSSSTAY MQLNSLTS3D SAVYYCARSS PYFSNLYVMD YWGQGTSVTV SS ·</td>

<td></td><td> 10</td><td> Región variable de cadena ligera Fab 0301</td><td> NIVLTCSPAS LAVSLGQRAT TSCKASQSVD YDGDKYMNWY QQKFGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFrLNIH PVEESDAATY YCHLSNEDLS TFGGGTKLEI K</td>

<td></td><td> 11</td><td> Región variable de cadena pesada Fab 0302</td><td> ·. SIQLQGSGPB LVKPGASVKM SCKASGYTFS DFNXHWKQK PGQGLEWlGY INPY7DVTVY NBKFKGKATL TSDRSSSTAY MDLSSLTSED SAVYYCASYP DGTFDYALDY WGQG7SITVS S</td>

<td> 10</td><td> 12</td><td> Región variable de cadena ligera Fab 0302</td><td> DVWTQTPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVC NYGI.SFMNWP QQKFGQPPKL LIYTASNLES GIPARFSGGG SRTDFTLTID PVEADDAATY FCQQSKELPW TFGGGTRLE1 K |</td>

<td></td><td> 13.</td><td> Región variable de cadena pesada Fab 0311</td><td> EZQLQQSGPD LMKPGASVKM SCKASGYJFT DYNMHWVKQN QGKSLEWMGE INPNNGWVY NQKFKGTTTL TVDKSSSTAY MDLHSLTSED SAVYYCTRAL YHSNPGWYFD SWGKGTTLTV SS</td>

<td></td><td> 14</td><td> Región variable de cadena ligera Fab 0311</td><td> í DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD yDGDSHrmW QQKPGQPPKL LIYTASNLES GIPARl'SGSQ SGADFTLTIH PVEE2DAATY YCCQGNEDPW 1 TFGGGT2L3I K i_________|</td>

<td> 15</td><td> 15</td><td> CDR1 cadena , pesada 0301</td><td> [ GY^FTDNYMr ·</td>

<td></td><td> 16</td><td> CDR2 cadena pesada 0301</td><td> DINPYNGGT? FNQXFKG</td>

<td></td><td> 17</td><td> CDR3 cadena pesada 0301</td><td> ÜSFYFSNLYV NOY</td>

<td></td><td> 18</td><td> CDR1 cadena ligera 0301</td><td> KASQSVDYDG DKYXN j 1</td>

<td rowspan="2"> 20</td><td> 19</td><td> CDR2 cadena ligera 0301</td><td> AASNLES ί</td>

<td> 20</td><td> CDR3 cadena Hgeia 0301</td><td> H5SNEBLST .</td>

<td></td><td> 21</td><td> CDR1 cadena pesada 0302</td><td> GYTFSDPNIH i</td>

<td></td><td> 22</td><td> CDR2 cadena pesada 0302</td><td> . YIXPYTDVTV YNEKFKG</td>

<td></td><td> 23</td><td> CDR3 cadena pesada 0302</td><td> YFDGTFDYAL DY</td>

<td> 25</td><td> 24</td><td> CDR1 cadena ligera 0302</td><td> RASESVDNYG LSFMN 1</td>

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<td> 25 ü</td><td> ’DR2 de cadena gera 0302</td><td> ' -.......... Ί TASNLES :</td>

<td> t 26 b</td><td> ?DR3 de cadena gera 0302</td><td> QQSKELPWT</td>

<td> 27 1</td><td> JDR1 de cadena jesada 0311</td><td> GYIFTDYNMH</td>

<td> C 28 l</td><td> ?DR2 de cadena jesada 0311</td><td> EINPNNGVW YNQKFKG ¡</td>

<td> 29 i</td><td> ?DR3 de cadena jesada03ll</td><td> ALYHSNFGWY FDS ‘</td>

<td>30 í</td><td> ?DR1 de cadena igera 0311</td><td> KASQSVDYDG DSHMN</td>

<td> 31 J</td><td> ¿’DR2 de cadena Ligera 031 í</td><td> TASNLES i</td>

<td colspan="2"> ¡CDR3 de cadena 32 ligera 0311</td><td> OQGNfiDPWT ! _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________I</td>

<td> i 1 i 33 ¡</td><td> cadena pesada cAb 0301</td><td> EVQLQQSGPR LVRPGASVKM SCKASGYTFT DNYMIWVKQS HGKSLSWLGD : INPYNGGTTF NQKFKGKATL TVEKSSSTAY MQLNSLTSED SAVYYCARES < PYFSNLYVMD YWGQGTSVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL i VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT 1 KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCFP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK ! DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS j TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV ! ‘ YTLPPSQEEM TKNQVSbTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL i DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK I</td>

<td> 34</td><td> cadena ligera cAb 0301</td><td> NIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQPPKL j LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAATY YCHLSNEDLS i TFGGGTKLEl KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASWCLL NNFYFREAW QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV T11QGLSSPVT KSFNRQEC</td>

<td> 35 i</td><td> cadena pesada cAb 0302</td><td> EIQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFS DFNIHWVKQK PGQGLEWIGY | INPYTDVTVY NEKFKGKATL TSDRSSSTAY MDLSSLTSED SAVYYCASYF ' DGTFDYALDY WGQGTSITVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV í KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP 3NTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD j TLMISRTPEV TCVWDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST ¡ YRWSVLTVL HQDWLNGKEY KGKVSNKGL? SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV ETOSNCOPEN NYKTTPPVLD | SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK |</td>

<td> 36</td><td> cadena ligera cAb 0302</td><td> DVWTQTPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQPPKL. I LIYTASNLES GIPARFSGGG SRTDFTLTID PVEADDAATY FCQCSKELPW 1 TFGGGTRLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASWCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQÉSVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKEKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 37</td><td> cadena pesada cAb 0311</td><td> EIQLQQSGPD LMKPGASVKM SCKASGYIFT DYNMHWVKQN QGKSLEWMGE INPNNGWVY NQKFKGTTTL TVDKSSSTAY .MDLHSLTSED SAVYYCTRAL YHSNFGVÍYFD SWGKGTTLTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCWVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK</td>

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<td></td><td> cadena ligera cAb 0311</td><td> DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQPPKL 1 LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTCK PVESEDAATY YCQQGÑEDPW í TFGGGTRLSI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASWCLL NNFYPREAKV ¡ QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY FKHKVYAC3V | THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td>3,</td><td> Región variable de cadena pesada hO301-H0</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLSWMGD ¡ 1NPYNGGTTF NQKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES | PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS ;</td>

<td> 40</td><td> Región variable de cadena pesada h0301-HI</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS j</td>

<td> 41</td><td> Región variable de cadena pesada hO3Ol-H2</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA FGQGL3WIGD IKPYNGGTTF NQKFKGRATL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS</td>

<td> 42</td><td> Región variable de cadena pesada 110302-111</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWRQA PGQGLEWMGY j ZNPYTDVTVY NEKFKGRVTI TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS S i</td>

<td colspan="2"> Región variable ¡de cadena 43 ¡pesada ¡H0302-H2 j</td><td> ί QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWIGY ‘ ZNPYTDVTVY NEKPKGRATL TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF I DGTFDYALDY WGQGTLVTVS S</td>

<td> 44</td><td> Región variable de cadena pesada H03H-HI</td><td> ί QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVWY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SS</td>

<td> 45</td><td> Región variable de cadena pesada H03H-H2</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVWY NQKFKGTTTL T^OKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVW SS ¡</td>

<td> ; 46</td><td> Región variable de cadena ligera 1)0301-1.0</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI K</td>

<td> i47</td><td> Región variable de cadena ligera h()301-L1</td><td> NIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMWY QQKPGQAPRL ¡ LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS ; TFGGGTKVEI K 1</td>

<td> 4S !</td><td> Región variable de cadena ligera HO3O2-LO</td><td> i EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI K</td>

<td> ΐ i 49 ?</td><td> Región variable de cadena ligera H0302-L1</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSPMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI K</td>

<td> ! : 50</td><td> Región variable de cadena ligera H0302-L2</td><td> EIWTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQAPRL | LIYTASKLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW ! TFGQGTKVEI K j</td>

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<td> i 51</td><td> región variable ΐ de cadena ¡ligera H03M-L0</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARPSGSG SGTDFTLTIS SLEFEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI K</td>

<td> 52</td><td> región variable de cadena ligera H0311-LJ</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNSDPW TFGQGTKVEI K</td>

<td> 53</td><td> cadena pesada 110301 -J10</td><td> QVQuVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPI.APCSRST SESTAALGCL iVKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCKVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPRSEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKS YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHY7Q KSLSLSLGK</td>

<td> 54</td><td> cadena pesada h0301-Hl</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK ÍDTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPRSEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM 7KNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK</td>

<td> 55</td><td> cadena pesada h0301-I12</td><td> i QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWIGD INPYNGGTTF NQKFKGRATL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPRSEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL; DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK</td>

<td> 56</td><td> cadena pesada 110302-H1</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWMGY INPYTDVTVY NEKFKGRVTI TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TbMISRTPEV TCVWDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRWSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK</td>

<td>57</td><td> cadena pesada H0302-H2 i i i</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFXrHIÍVRQA PGQGLEWIGY INPYTDVTVY NEKFKGRATL TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSW TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRWSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK</td>

<td>58 ¡ 1</td><td> cadena pesada | H0311-H1 i _ ... 1</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVW^Y NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT</td>

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<td></td><td> Ί</td><td> KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPSFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKG1. PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK</td>

<td> 59</td><td> cadena pesada H03H-H2</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVP.QA PGQGLEWMGE INPNNGWVY NQKFKGTTTL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRWSVLTV LKQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK</td>

<td> 60</td><td> cadena ligera hOSOl-LO</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 61</td><td> cadena ligera hO3O1-Ll</td><td> NIVLTQSPA7 LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYIÍNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPSDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 62</td><td> cadena ligera HO3O2-LO</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 63</td><td> cadena ligera H0302-L1</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 64</td><td> cadena ligera H0302-L2 í</td><td> EIWTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASWCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 1 í 65 j</td><td> cadena ligera · H0311-L0</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> 66</td><td> j cadena ligera H031MJ</td><td> DIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTK’TEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC</td>

<td> í 67 1</td><td> CSF1 humano</td><td> EEVSEYCSHM IGSGHLQSLQ RL’.DSQMETS CQITFEFVDQ EQLKDPVCYL । KKAFLLVQDI MEDTMRFRDN TPNAIAIVQL QELSLRLKSC FTKDYEEHDK ί ACVRTFYETP LQLLEKVKNV FWETKNLLDK DWNIFSKNCN NSFAECSSQG HERQSEGS</td>

<td> 6S</td><td> 1L34 humana</td><td> NBPLEMWPLT QNEECTVTGF LRDKLQYRSR LQYMKHYFPI MYKISVPYEG ! VFRIANVTRT., QRAQVSERED RYLWVLVSLSATESVQDVLL 2GHPSWKYLQ ¡</td>

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<td></td><td> 1</td><td> : aVQTLLLNVQ QGLTDVEVSP ¡SVESVLSLLN APGPNLKLVR PKALLDNCFR VMELLYCSCC KQSSVLNWQD CEVPSPQSCS PEPSLQYAAT QLYPPPPWS** SSPPKSTG3V RPVRAQGEGL LP</td>

<td> 69</td><td> FR1 j aceptóla i humana A</td><td> i QVQLVQSGAE VKX1OSSVKV SCKAS</td>

<td> 70</td><td> 1 FR2 i aceptóla i humana A</td><td> WVRQAPGQGL EWMG</td>

<td> 71</td><td> FR3 aceptóla humana A</td><td> RVTITADKST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR</td>

<td> t 72</td><td> FR4 aceptora humana A</td><td> WGQGTLVTVS S</td>

<td> i 73 |-----------</td><td> FR1 aceptóla humana B</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS</td>

<td></td><td> FR2 aceptóla humana B</td><td> WVRQAPGQGL EWMG</td>

<td> í 75 1</td><td> FR3 aceptora humana B</td><td> RVTITADKST STAYMBLSSL RSEDTAVYYC AR</td>

<td> π</td><td> FR4 aceptóla humana B</td><td> WGQGTLVTVSS</td>

<td> í 77</td><td> FR1 aceptóla humana C</td><td> QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS</td>

<td> 78</td><td> FR2 aceptora humana C</td><td> WVRQAPGQGL EWMG</td>

<td> 79</td><td> FR3 aceptora humana C</td><td> RVTITADKST STAYMRWSL- RSBDTAVYTC AR</td>

<td> 80</td><td> FR4 •aceptora humana C</td><td> WGQGTLVTVS S</td>

<td> 81</td><td> FR1 aceptora humana D</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC ---------------------------------------------------------------1</td>

<td> 82</td><td> FR2 aceptora humana D</td><td> WYQQKPGQAP RLLIY</td>

<td> 83</td><td> FR3 aceptora Inmiana D</td><td> GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC</td>

<td> 84</td><td> FR4 aceptora humana D</td><td> FGGGTKVEIK j</td>

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<td> 1 í ; 85 1 1----</td><td> ! FRl aceptara luunanaE</td><td> E-lVLTQSPAT lslspgerat lsc</td>

<td> 1 ; 86</td><td> FR2 aceptara humana E</td><td> WYQQKPGQAP RLLIY : i ___________ 1</td>

<td> ! 87</td><td> í FR3 aceptara humana E</td><td> GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC ; ¡ -_______________________________.________i</td>

<td> í 88</td><td> [ FR4 : aceptara humana E</td><td> FGQGTKVEIK i</td>

<td> 1 < 89</td><td> FRl aceptara luunana F</td><td> EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC j</td>

<td> 90</td><td> FR2 aceptara humana F</td><td> WYQQKPGQAP RLLIY j ________________________________________________________________________________________I</td>

<td> i 91</td><td> FR3 aceptora humana F</td><td> GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC (</td>

<td> 92</td><td> FR4 aceptora humana F</td><td> FGQGTKVEIK</td>

<td> 93</td><td> ECD-Fc de mCSFIR</td><td> APVIEPSGPE LWEPGETVT LRCVSNGSVE WDGPISPYWT LDPESPGSTL ! TTRNATFKNT GTYRCTELSD PMAGSTTIHL YVKDPAHSWN LLAQEVTWE GQEAVLPCLI T3PALKDSVS LMREGGRQVL RKTVYFFSPW RGFZIRKAKV LDSNTYVCKT MVNGRSSTST GIWLKVNRVE PEPPQIKLEP SKLVRIRGEA AQIVCSATNA FVGFNVILKR GDTKLEIPLN SDFQDNYYKK VRALStNAVD ; PQDAGIYSCV ASNDVGTRTA TMNFQWESA YLNLTSEQSL LQEVSVGDSL i 1LTVHADAYP SIQHYNWTYL GPFFEDQRKL EFITQRAIYR YTFKLFLNRV KASEAGQYFL MAQNKAGWNN LTFELTLRYP PEVSVTWMPV NGSDVLFCDV ; SGYPQPSVTW MECRGHTDRC DEAQALQVWN DTHPEVLSQK PFDKVIIQSS j LPIGTLKHNM TYFCKTHNSV GNSSQYFRAV SLGQSKQEPK SSDKTHTCPF ¡ CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLM2SRTPE VTCVWDVSH EDPEVKFNWY i VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRWSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL j PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM : HEALHNHYTG KSLSLSPGK í</td>

<td> 94</td><td> S241P de lgG4 Humana</td><td> ASTKGPSVFP LAPCSRSTS3 STAALGCLVK DYFPEPVTVS WSGALTSGV 1 HTFPAVLQSS GLYSLSSWT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEF.LGGPSV FLFPFKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSQED í PSVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNS'i'Y RWSVLTVLH QDWLNGKEYK ¡ CKVSNKGLPS SIEXTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK i GFYPSDIAVE WESKGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG ¡ NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS L.SLSLGK |</td>

<td> 95</td><td> IgK Humana i</td><td> RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASWCLLN NPYPREAKVQ WKVDNALOSG í NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACBVT HQGLSSPVTK í SFNRGEC j</td>

123

IMPI

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

IMPI

124

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL

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