MX376642B

Methods for use of sex sorted semen to improve genetic management in swine

Abstract

The invention relates to methods of increasing genetic merit in pigs using sexed semen by establishing a plurality of mating subtypes for a pig line and determining a percentage of progeny that are male for each of the mating subtypes, or a percentage of progeny that are female for each of the mating subtypes, which would result, with respect to the control, in an increase in genetic merit in the line.

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Term

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Expires 11 September 2035.

4 claims: 4 independent, 0 dependent

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REIVINDICACIONES IMPI § INSTITUTO MEXICANO F DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL M MX/a/2018/010569 1. Un método para aumentar el progreso genético de cerdos dentro de un núcleo genético, caracterizado porque comprende las etapas de:proporcionar una población de cerdos en una línea paterna en el núcleo genético;establecer una subpoblación de machos y hembras de la población de cerdos disponible para reproducción y crianza de progenie;inseminar una o más hembras en la subpoblación con una muestra de espermatozoides sexados de uno o más machos en la subpoblación de modo que aproximadamente 10 a 35% de la progenie de la subpoblación sean machos, de esta manera aumentando el progreso genético dentro del núcleo genético.
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El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque aproximadamente 15 a 30% de la progenie son machos.
3
Un método para aumentar el progreso genético de cerdos dentro de un núcleo genético, caracterizado porque comprende las etapas de:proporcionar una población de cerdos en una línea materna en el núcleo genético;establecer una subpoblación de machos y hembras de la población de cerdos disponible para reproducción y crianza de progenie;inseminar una o más hembras en la subpoblación con una muestra de espermatozoides sexados de uno o más machos en la subpoblación de modo que aproximadamente 5 a 30% de la progenie de la subpoblación sean machos, de esta manera incrementando el progreso genético dentro del núcleo genético.
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El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque aproximadamente 10 a 25% de la progenie son machos. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a métodos para aumentar el mérito genético en porcinos utilizando semen sexado al establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea 5 porcina y determinar un porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o un porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, que resultaría, con respecto al control, en un aumento del mérito genético en la línea. IMPI §

Independent claims4

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MÉTODOS PARA USO DE SEMEN SEXADO PARA MEJORAR LA GESTIÓN GENÉTICA EN CERDOS

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REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica el beneficio y la prioridad de la Solicitud de los

EE.UU. No. 13/840,598, presentada el 15 de marzo de 2013, que reivindica la prioridad de la Solicitud de los EE.UU. No. 61/656,446, presentada el 6 de junio de 2012.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a métodos para utilizar semen sexado de cerdos de línea pura de una línea porcina en apareamientos para aumentar el mérito genético de cerdos a nivel de producción comercial porcina. La mejora de la gestión genética de la línea es el resultado de 1) aumento del progreso genético en la línea y/o 2) mejora de la diseminación genética (es decir, el mérito genético del producto comercial es más cercano al mérito genético en el núcleo genético).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La producción porcina en la actualidad puede representarse mediante una pirámide de múltiples niveles, utilizándose determinadas crías en cada nivel para la reproducción en el siguiente nivel inferior. El nivel superior de la pirámide es el núcleo genético (GN). Los niveles siguientes desde la parte superior hasta la parte inferior son generalmente el núcleo hija (DN), el multiplicador, o unidad de multiplicación, y finalmente el nivel comercial, que comprende en general granjas donde se producen cerdos para sacrificio, respectivamente.

Típicamente, el progreso genético de una línea se produce en la población de línea pura en el núcleo genético. Los animales del GN tendrán parientes en niveles inferiores de la pirámide de raza pura así como cruzados. Los datos de rasgos recogidos de estos parientes contribuyen a la estimación del mérito genético de los animales del GN. Dentro de una línea en el GN, una vez seleccionados, los genitores que producen la siguiente generación en general se aparean aleatoriamente entre sí, aunque se evitan los apareamientos entre individuos relacionados estrechamente, con el objetivo de aumentar el mérito genético de la siguiente generación. Un aumento en el mérito genético de la siguiente generación constituye un progreso genético. Un aumento en el mérito genético, en este contexto, significa que para un rasgo o conjunto de rasgos dado, los individuos en la generación siguiente expresarán el rasgo o conjunto de rasgos deseado con más intensidad que sus genitores. En relación con los rasgos indeseables, un aumento en el mérito genético significa que los individuos en la generación siguiente expresarán el rasgo o conjunto de rasgos con menos intensidad que sus genitores.

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El cambio genético, incluido el cambio genético deseable (es decir, progreso genético por año), (dG) se puede medir como la diferencia entre el nivel genético promedio de toda la progenie nacida en un año y toda la progenie nacida el año siguiente. La diferencia es el resultado de genitores seleccionados que tienen un mérito genético más alto que el mérito genético promedio de todos los candidatos de la selección (los animales disponibles para la selección). En condiciones ideales, que esto suceda depende de la heredabilidad (h2) del rasgo y de la diferencia entre el rendimiento promedio de los genitores seleccionados y el de los candidatos de la selección. La heredabilidad de un rasgo (h2) es la proporción de diferencias observables (varianza fenotípica, o2p) en un rasgo entre individuos dentro de una población que se debe a la genética aditiva (A), en oposición a las diferencias ambientales (E), (h2= o2a/o2p = o2a/(o2a+o2e)). La diferencia entre el rendimiento promedio de los genitores seleccionados y el de todos los candidatos de la selección (de los cuales los genitores seleccionados son un subconjunto) también se conoce como selección diferencial.

El progreso genético por año es el resultado de la superioridad genética de machos seleccionados y de hembras seleccionadas. Esto se expresa en la siguiente ecuación:

dG — {(RiH*Í)machos + (RlH*¡)hembras}'*CJH/(Lmach0S + Lhembras),

Donde, R = la precisión de la selección, i = la intensidad de la selección, oH = variación genética y L = intervalo de generación, para genitores macho o hembra.

H = objetivo de reproducción que combina el mérito genético (g) de los rasgos (1 para m) que deben producirse ponderados por los valores económicos (v) de los rasgos (H=Vigi + v2g2 + + vmgm). El valor económico es positivo si la selección es para valores fenotípicos mayores y negativo si la selección es para valores fenotípicos menores.

I = un índice que combina toda la información de los rasgos en el individuo y sus parientes y es la mejor estimación de valor de H para el individuo.

La selección es más eficaz cuando se eliminan los efectos no genéticos (por ejemplo, al comparar cada registro de rendimiento con el promedio del grupo contemporáneo) y cuando se utiliza la información de los parientes además de la del propio animal. Esto se logra a través del cálculo de los valores de reproducción estimados (EBV) utilizando, por ejemplo, métodos BLUP de múltiples rasgos. Los factores ambientales tales como HYS (siglas para hato-año-estación) están en el modelo para corregir los efectos ambientales y se incluye simultáneamente la información de los parientes a través del uso de la matriz de relaciones. Cuanto más información sobre rasgos de los parientes, mayor será la precisión (RIH) del EBV.

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En una población grande, la intensidad de selección depende de cuántos animales se evalúan y cuántos se seleccionan, cuanto menor sea la proporción seleccionada, mayor será la intensidad de selección y mayor será el progreso genético, siendo todo lo demás igual. Por consiguiente, a efectos de maximizar el progreso genético, se debería clasificar a todos los animales evaluados en función del EBV y luego seleccionar una cantidad mínima de los cerdos y cerdas superiores necesarios para mantener la línea, raza y/o tamaño de hato y para evitar problemas de endogamia. Esto asegura que el EBV promedio de los animales seleccionados es sustancialmente más alto que el EBV promedio de todos los animales evaluados. En especial, a través del uso de la inseminación artificial (AI), se deben seleccionar menos cerdos que cerdas primerizas y la intensidad de selección para los machos es más alta que para las hembras.

El intervalo de generación para los machos (o hembras) es la edad promedio de los genitores macho (o de los genitores hembra) cuando nace la progenie. En general, las cerdas producen más de una camada en el GN y el L para las hembras tiende a ser mayor que el L para los machos.

La tasa anual de progreso genético depende del intervalo de generación y de la superioridad de los EBV del genitor en comparación con la de los candidatos de la selección. En general, los machos contribuyen más al progreso genético por año que las hembras.

Los ejemplos de rasgos importantes en la industria de los porcinos incluyen la eficacia alimentaria, es decir, una medida de la eficacia de un animal para convertir masa alimentaria en masa corporal aumentada (también conocida como conversión alimentaria o relación entre alimentación y ganancia de peso), y la ganancia promedio de peso diaria para un animal. Los rasgos se miden en diferentes unidades (por ejemplo, cantidad de cerdos, libras por día, pulgadas, etc.), no tienen igual importancia económica en todos los mercados del mundo y no reciben influencia genética en el mismo grado (es decir, diferentes coeficientes de heredabilidad). En términos generales, los rasgos de producción tales como eficiencia alimentaria y ganancia promedio de peso diaria tienen una heredabilidad alta. En cambio, los rasgos de reproducción tales como fertilidad y tamaño de camada generalmente tienen baja heredabilidad.

Existe la necesidad en la industria porcina de aumentar la tasa de progreso genético en líneas así como disminuir los costos operativos de la reproducción y de las granjas de porcinos comerciales.

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BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Determinadas modalidades de la invención comprenden un método para aumentar el mérito genético de los porcinos que comprende las etapas de establecer una pluralidad de

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INDUSTRIAL M subtipos de apareamiento para una línea; determinar un porcentaje de progenie que son machos para cada subtipo de apareamiento, o un porcentaje de progenie que son hembras para cada subtipo de apareamiento, que resultaría, con respecto a un control, en un aumento del mérito genético; clasificar una muestra de espermatozoides de un cerdo en uno de los subtipos de apareamiento en una o más subpoblaciones de espermatozoides, donde una mayoría de espermatozoides en una subpoblación de espermatozoides tiene cromosomas X o cromosomas Y; inseminar una o más cerdas en uno de los subtipos de apareamiento con la subpoblación de espermatozoides para lograr el porcentaje de progenie que son machos o el porcentaje de progenie que son hembras determinado para aumentar el mérito genético con respecto a un control; y producir progenie de una o más cerdas. En una modalidad adicional, el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, resulta en un aumento del mérito genético y en ningún aumento de la endogamia en la línea con respecto a un control. En una modalidad adicional, la etapa de inseminar puede reemplazarse por una etapa de fertilizar, ya sea in vivo o in vitro, uno o más óvulos de una o más cerdas en uno de los subtipos de apareamiento con la subpoblación de espermatozoides para lograr el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético con respecto al control. En determinadas modalidades de la invención, la línea, el macho, dichas una o más hembras, y/o la progenie pueden pertenecer o ser miembros de un núcleo genético, un núcleo hija o un multiplicador. En otras modalidades de la invención, cualquiera o todas las etapas mencionadas anteriormente pueden llevarse a cabo como parte de un programa de reproducción. Se entenderá que determinadas modalidades de la invención comprenden una o más de las etapas mencionadas anteriormente.

Se entenderá que en determinadas modalidades de la invención, al menos aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% de los espermatozoides en la subpoblación de espermatozoides tienen cromosomas X o cromosomas Y.

En determinadas modalidades de la invención, el mérito genético de un porcino o una línea puede ser una función de, basarse en o determinarse por, el EBV cuantitativo o genómico. En otras modalidades de la invención, el mérito genético puede ser una función de, basarse en o determinarse por, uno o más rasgos, incluidos, a modo no taxativo, la fertilidad, tamaño de camada, producción de leche, eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal, así como los marcadores genéticos para dichos rasgos. En una modalidad adicional, el mérito genético puede ser una función de, basarse en o determinarse por, la capacidad para sexar y/o congelar a los espermatozoides en función de la viabilidad, fertilidad y/o motilidad de los

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MX/a/2018/010569 espermatozoides después de la clasificación y/o congelación, así como un marcador genético para dicho rasgo.

En determinadas modalidades de la invención, una línea puede comprender una línea paterna o una línea materna. En determinados aspectos de la invención, una línea puede comprender una línea paterna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 10 y 35% o 15 a 30%. En otros aspectos, una línea puede comprender una línea materna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 5 y 30% o 10 a 25%. En aspectos adicionales, el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento puede estar entre aproximadamente 0 y 10% o entre aproximadamente 90 y 100% y la progenie producida puede ser miembro de un núcleo hija o de un multiplicador.

En determinadas modalidades de la invención, aproximadamente 50% de la progenie son machos en el control. En otras modalidades, todas las cerdas que se van a aparear se inseminan con muestras de semen no clasificado en el control.

En algunos aspectos de la invención, se puede definir una categoría o clase de cerdos en uno o más de los subtipos de apareamiento mediante una o más características, incluido el mérito genético o la edad. En otros aspectos, se puede definir una categoría o clase de cerdas en uno o más de los subtipos de apareamiento mediante una o más características, incluido el mérito genético o la cantidad de partos. En algunas modalidades, cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento puede comprender solo un cerdo y/o solo una cerda de la línea. En algunas modalidades de la invención, un subtipo de apareamiento puede constar de uno o más subgrupos y/o uno o más subgrupos de hembras, donde un subgrupo se define por o basa en uno o más criterios, incluidos, a modo no taxativo, función en la pirámide productiva, edad, cantidad de partos, mérito genético (por ejemplo, EBV) y marcadores o mutaciones genéticos. Algunas modalidades de la invención comprenden la etapa de clasificar o dividir a los machos y/o hembras disponibles para apareamiento en una pluralidad de subgrupos, donde los subgrupos se definen por o basan en uno o más criterios, incluidos, a modo no taxativo, función en la pirámide productiva, edad, cantidad de partos, mérito genético (por ejemplo, EBV) y marcadores o mutaciones genéticos.

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En una modalidad adicional, la etapa mencionada anteriormente de clasificar o dividir se lleva a cabo en una línea o como parte de un programa de reproducción o como una etapa en la creación de un plan de apareamiento para una línea. En determinadas modalidades, el subgrupo de machos se define por o basa en, uno o más criterios que incluyen, a modo no taxativo, función en la pirámide reproductiva, edad, mérito genético (por ejemplo, EBV) y marcadores o mutaciones genéticos. En determinadas modalidades, el subgrupo de hembras se define por o basa en, uno o más criterios que incluyen, a modo no taxativo, función en la pirámide reproductiva, cantidad de partos, edad, mérito genético (por ejemplo, EBV) y marcadores o mutaciones genéticos. En algunas modalidades de la invención, uno o más subgrupos de machos pueden abarcar a uno o más machos. En otras modalidades de la invención, uno o más subgrupos de hembras pueden abarcar a una o más hembras.

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Se entenderá que en determinadas modalidades de la invención, los porcentajes de progenie macho y/o hembra que aumentan el mérito genético pueden determinarse utilizando un método estocástico o determinativo, o una combinación de estos.

En determinadas modalidades de la invención, el mérito genético de un porcino o una línea puede ser una función de, basarse en o determinarse por, el EBV. En otras modalidades de la invención, el mérito genético puede ser una función de, basarse en o determinarse por, uno o más rasgos, incluidos, a modo no taxativo, la fertilidad, tamaño de camada, producción de leche, eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal, así como los marcadores genéticos para dichos rasgos. En una modalidad adicional, el mérito genético puede ser una función de, basarse en o determinarse por, la capacidad para sexar y/o congelar a los espermatozoides en función de la viabilidad, fertilidad y/o motilidad de los espermatozoides después de la clasificación y/o congelación, así como un marcador genético para dicho rasgo. En determinadas modalidades de la invención, el mérito genético de un porcino o una línea puede evaluarse genotipificando un porcino o un embrión.

En determinadas modalidades de la invención, el semen sexado puede comprender espermatozoides sexados, o espermatozoides sexados y uno o más componentes distintos de un eyaculado. En otras modalidades, una muestra de espermatozoides sexados puede comprender una muestra de espermatozoides en la que los espermatozoides que tienen cromosomas X o Y en la muestra se consideran incapaces para fertilización debido, por ejemplo, a muerte. En otras modalidades, el proceso de sexar una muestra de espermatozoides o una muestra de semen incluye cualquier proceso en el que los espermatozoides que tienen cromosomas X o Y en la muestra se identifican y se consideran incapaces para fertilización.

Otros aspectos de la invención abarcan inseminar a una cerda de dicha línea o raza con espermatozoides sexados utilizando un catéter intrauterino profundo o una aguja insertada a

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INDUSTRIAL M través de una membrana de dicha cerda. Algunas de estas modalidades abarcan técnicas quirúrgicas y no quirúrgicas conocidas que pueden utilizarse para colocar espermatozoides en el tracto reproductivo de una cerda, incluidas laparotomía (procedimiento quirúrgico que implica una gran incisión a través de la pared abdominal para acceder a la cavidad abdominal). Esta modalidad contempla inseminar a una cerda utilizando 1 x 109 o menos espermatozoides totales.

En otras modalidades, se puede emplear un catéter intrauterino profundo para administrar una muestra de espermatozoides en porciones distales de un tracto reproductivo de una cerda tales como uno o más cuernos uterinos o una o más uniones útero-tubáricas. En otro aspecto de la invención, el catéter intrauterino profundo consta de un tubo o funda externo y una sonda flexible interna. En un aspecto adicional de la invención, la sonda flexible interna comprende un conducto interno flexible a través del cual pueden pasar fluidos o células. En determinadas modalidades de la invención, el tubo externo y la sonda flexible interna pueden ser de un plástico, y en otras modalidades, pueden ser de metal configurándose para ser flexibles tal como en una configuración de bobina o resorte. En una modalidad adicional, el catéter intrauterino profundo comprende una cámara de video o endoscopio para visualizar la ubicación de la porción distal del catéter intrauterino profundo dentro de un tracto reproductivo de una cerda. En una modalidad alternativa, el catéter intrauterino profundo puede visualizarse dentro del tracto reproductivo de la cerda utilizando radiografía o fluoroscopia. En otras modalidades de la invención, se puede utilizar un catéter intrauterino profundo para insertar o retirar embriones o cigotos de las porciones distales de un tracto reproductivo de una cerda, tales como uno o más cuernos uterinos o una o más uniones útero-tubáricas.

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Con respecto a la inseminación con un catéter intrauterino profundo, se contempla administrar una dosis de 1 x 109 espermatozoides o menos a un porcino hembra. Dichos espermatozoides pueden ser espermatozoides sexados. En una modalidad de la invención, se administra una dosis de espermatozoides sexados (por ejemplo 600 x 106, pero pueden ser más, o tan pocos como 10 x 106 si se colocan en la ubicación óptima en el momento óptimo del estro) en uno o ambos cuernos uterinos (por ejemplo, 300 x 106 espermatozoides en cada cuerno) de una cerda mediante un catéter intrauterino profundo. En otras modalidades, las dosis pueden variar en el rango de o en cualquier punto entre alrededor de 300 x 106, alrededor de 150 x 106, alrededor de 140 x 106, alrededor de 100 x 106, alrededor de 70 x 106, alrededor de 50 x 106 o alrededor de 5 x 106 espermatozoides sexados o menos y pueden administrarse en uno o ambos cuernos uterinos de una cerda.

Las dosis mencionadas anteriormente pueden administrarse en varios volúmenes, incluidos, a modo no taxativo, 5 mi para cada 150 x 106 espermatozoides, o la misma cantidad de células en una volumen en el rango de 5 mi, 10 mi, 15 mi, 20 mi, 25 mi, 30 mi o 100 mi, o en algún

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MX/a/2018/010569 punto entre 5-10 mi, 10-20 mi, 20-30 mi, 30-40 mi, 40-50 mi, 50-60 mi, 60-70 mi, 70-80 mi, 80-90 mi o 90-100 mi.

Los espermatozoides sexados para uso en cualquier modalidad de la invención pueden crioconservarse y luego descongelarse, o alternativamente se pueden utilizar espermatozoides sexados nuevos (es decir, que nunca se congelaron). Las dosis mencionadas anteriormente también pueden administrarse en una o más uniones útero-tubáricas de una cerda.

La presente modalidad de la invención también abarca el uso de un laparoscopio para visualizar la inserción de una aguja a través de una membrana de una cerda para la administración de una muestra de espermatozoides sexados. Tanto la aguja utilizada para inyectar la muestra de espermatozoides y el laparoscopio, así como la manipulación de instrumentos tales como el fórceps, pueden insertarse en el abdomen de una cerda a través de pequeñas incisiones típicas de los procedimientos laparoscópicos. La invención también abarca la inyección de una muestra de espermatozoides en una o más ubicaciones dentro del tracto reproductivo de la hembra. A modo de ejemplo nada más, la muestra de espermatozoides puede inyectarse en una o más ubicaciones dentro del útero de una cerda, incluidos uno o más cuernos uterinos, oviductos, ampolla, istmo o unión útero-tubárica. En otra modalidad de la invención, se pueden insertar o retirar embriones o cigotos del tracto reproductivo de una cerda a través de laparoscopia.

Con respecto a la inseminación a través de laparoscopia, se contempla administrar una dosis de 1 x 109 espermatozoides o menos a una cerda. Dichos espermatozoides pueden ser espermatozoides sexados. En una modalidad de la invención se puede inyectar una dosis de alrededor de 500 x 106 espermatozoides sexados o menos en uno o ambos oviductos (por ejemplo, 250 x 106 espermatozoides en cada oviducto) de una cerda mediante laparoscopia; en otra modalidad, se pueden inyectar dosis en el rango de o en cualquier punto entre alrededor de 10 x 106, alrededor de 5 x 106, alrededor de 3 x 106, alrededor de 2,0 x 106, alrededor de 1.2 x 106, alrededor de 1 x 106 o 0.6 x 106 espermatozoides sexados o menos en uno o ambos oviductos de una cerda.

En una modalidad adicional, los espermatozoides sexados pueden inyectarse en regiones específicas del oviducto, incluidos, a modo no taxativo, el istmo, la ampolla y/o la unión útero-tubárica. En determinadas modalidades, se puede inyectar una dosis en el rango de o en cualquier punto entre alrededor de 5 x 106, alrededor de 2 x 106, alrededor de 1 x 106, alrededor de 600 x 103, alrededor de 500 x 103, alrededor de 300 x 103 o alrededor de 150 x 103 espermatozoides sexados o menos, en una o más regiones del oviducto, ya sea unilateralmente o bilateralmente.

En una modalidad adicional con respecto a la inseminación a través de laparoscopia, los espermatozoides sexados se pueden inyectar en diversos sitios en el oviducto utilizando dosis en el rango de o en cualquier punto entre alrededor de 500 x 103 espermatozoides sexados inyectados

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INDUSTRIAL bO en cada ampolla con alrededor de 1 x 106 espermatozoides sexados inyectados en cada unión úterotubárica; o una dosis de alrededor de 1 x 106 espermatozoides sexados inyectados en cada ampolla con alrededor de 2 x 106 espermatozoides sexados inyectados en cada unión útero-tubárica; o una dosis de alrededor de 5 x 105 espermatozoides sexados en cada ampolla con alrededor de 2 x 106 espermatozoides sexados inyectados en cada unión útero-tubárica; o una dosis de alrededor de 5 x 105 espermatozoides sexados en cada ampolla con alrededor de 1 x 106 espermatozoides sexados inyectados en cada unión útero-tubárica. Las dosis mencionadas anteriormente pueden estar contenidas en diversos volúmenes, a modo de ejemplo, 100 pl por cada 1 x 106 millones de

MX/a/2018/010569 espermatozoides, o la misma cantidad de espermatozoides en uno de los siguientes o en cualquier volumen entre: 50 pl, 100 μΙ, 200 μΙ, 300 μΙ, 400 μΙ ο 500 μΙ.

Otro aspecto de la invención comprende sincronizar el estro y/o inducir la ovulación programada en una cerda que será inseminada utilizando las modalidades divulgadas en la presente mediante la administración de una o más hormonas o análogos de hormona a la cerda. En una modalidad, dichas una o más hormonas o análogos de hormona comprenden PG600 (que comprende gonadotropina sérica de yegua preñada [PMSG] y gonadotropina coriónica humana [hCG]; Intervet), OvuGel (acetato de triptorelina en una fórmula de liberación lenta a través de un sistema de administración intravaginal; Gel Med Sciences, Inc.), gonadotropina coriónica equina (eCG), hCG, progestina, altrenogest o regumate.

En una modalidad adicional de la invención, dicha una o más hormonas o análogos de hormona se administran mediante un dispositivo programable colocado en el tracto reproductivo de dicha cerda. El dispositivo programable contemplado en la presente es capaz de liberar dicha una o más hormonas o análogos de hormona de forma progresiva sin que el reproductor tenga que monitorear el dispositivo ni proporcionar ninguna entrada excepto la programación de los parámetros iniciales para la liberación de dicha una o más hormonas o análogos de hormona. En otra modalidad de la invención, la sincronización del estro/ovulación programada pueden inducirse en la cerda mediante la administración de 1250 a 1500 UI de eCG y luego 750 UI de hCG 72 a 80 horas después. En otra modalidad de la invención, se puede inducir el estro en una cerda mediante la administración de 400 a 2000 UI de PMSG y luego 500 a 1000 UI de hCG 72 a 83 horas después.

Otras modalidades además contemplan detectar la ovulación en una cerda examinando los folículos de dicha cerda. En una modalidad específica de la invención, dichos folículos de la cerda se examinan utilizando ecografía. En una modalidad adicional, dichos ovarios de cerda se examinan mediante ecografía transrectal cada 3-5 horas comenzando 25-35 horas después de la inyección de hCG para determinar la presencia de folículos preovulatorios. En una modalidad adicional de la invención, se selecciona la cerda que exhibe múltiples folículos preovulatorios para inseminación 2-3 horas después de la ecografía.

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BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS ω

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La Figura 1 muestra un ejemplo de una pirámide de producción para la producción de cerdos genitores y cerdas primerizas genitoras cruzados.

La Figura 2 muestra el aumento de dG y la reducción en el porcentaje general de la progenie macho que resulta cuando se aplica la Reproducción con Precisión con niveles aumentados de sofisticación en ambas líneas materna y paterna.

La Figura 3 ¡lustra esquemáticamente un citómetro de flujo que puede utilizarse para clasificar muestras de espermatozoides en una o más poblaciones que tienen los cromosomas X o Y.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Los métodos divulgados en la presente aumentan el mérito genético de los porcinos a nivel comercial al aumentar la tasa de progreso genético de una línea y/o reducir el retraso genético entre el GN y la producción comercial, volviendo a la vez más rentable y beneficiosa la multiplicación.

Línea, tal como se usa en la presente, se refiere a porcinos que tienen un origen común y características de identificación similares. Línea pura, tal como se usa en la presente, es equivalente a línea y se puede utilizar a continuación para distinguir un Individuo o apareamiento de raza pura de un Individuo o apareamiento cruzado.

Programa de reproducción, tal como se usa en la presente, comprende uno o más programas de desarrollo de líneas.

Porcino comercial se refiere a un porcino sacrificado por su carne para venta en el mercado o a cerdas que producen porcinos por su carne para venta en el mercado.

Granja comercial, tal como se usa en la presente, se refiere a una instalación para alojar porcinos comerciales.

Multiplicador o unidad de multiplicación, tal como se usa en la presente, se refiere a una o más poblaciones de cerdos y cerdas, que comprenden una o más líneas que son parte de un programa de multiplicación para aumentar la cantidad de Individuos con mérito genético aumentado, utilizándose individuos que son productos de línea pura o cruzados como genitores, genitores secundarlos o genitores primarlos de porcinos comerciales.

Núcleo hija, tal como se usa en la presente, se refiere a una o más poblaciones de cerdos y cerdas usados para multiplicación de línea pura.

Núcleo genético, tal como se usa en la presente, se refiere a una o más poblaciones de cerdos y cerdas, que comprenden una o más líneas que son parte de un programa de

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INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL reproducción para aumentar el mérito genético de una o más líneas, y puede incluir o comprender las funciones de un núcleo hija.

Subtipo de apareamiento, tal como se usa en la presente, se refiere a una clase definida de apareamiento potencial entre: 1) una categoría, clase o tipo definido de macho y hembras disponibles; 2) machos disponibles y una categoría, clase o tipo definido de hembra; o 3) una categoría, clase o tipo definido de macho y una categoría, clase o tipo definido de hembra.

Línea paterna, tal como se usa en la presente, se refiere a una línea que contribuye a la producción de cerdos genitores utilizados en granjas comerciales.

Línea materna, tal como se usa en la presente, se refiere a una línea que contribuye a la producción de cerdas primerizas/cerdas genitoras utilizadas en granjas comerciales.

En cada nivel de la pirámide de producción porcina, para cada tipo de apareamiento, desde el núcleo genético (GN) hasta la producción comercial, se pueden elegir machos (cerdos y/o su semen) y hembras (cerdas primerizas/cerdas y/o sus óvulos) para la producción de la progenie.

En el GN, se producen los apareamientos de línea pura, se producen machos y hembras y los mejores machos y hembras evaluados se utilizan para producir la siguiente generación. En general (pero no siempre), solo se utilizan machos GN (o su semen) para la diseminación genética en los niveles inferiores de la pirámide (núcleo hija [DN] o multiplicador [M]).

Generalmente, los genitores secundarios de cerdos para sacrificio se producen en el DN y los genitores de los cerdos para sacrificio se producen en el nivel M. En el ejemplo dado en la Figura 1, solo uno de los dos sexos debe producirse en el nivel DN o M para un tipo de apareamiento. A nivel comercial los cerdos genitores y las cerdas primerizas/cerdas genitoras producen los cerdos para sacrificio. La división entre los niveles de la pirámide de producción depende de las características específicas de un sistema de producción. En una estructura comercial de hato cerrado, se pueden encontrarse diversos niveles dentro de una granja (estructura). Pero en términos de apareamiento, en general todavía se maneja con tipos de apareamiento tal como se describe en la Figura 1.

En referencia a la Figura 1, cada letra, A,B,C,D y E, representa una línea pura donde A y B son líneas paternas y C, D y E son líneas maternas. En cada bloque cuadrado de la Figura 1, se muestran un tipo o tipos de apareamiento (por ejemplo, A*A,D*E,C*DE, etc.) y el sexo deseado de los lechones (V y/o ?). Los detalles de una estructura de multiplicación (DN y M, donde M generalmente comprende un cerdo genitor M y una cerda primeriza genitora M) depende de la empresa de reproducción (grande o pequeña), sus clientes (grandes o pequeños) y el producto final (cruzamiento de 3, 4 o 5 vías). La Figura 1 proporciona un ejemplo de una pirámide de producción. Se ven líneas paternas (por ejemplo, B) produciendo cerdas primerizas y líneas

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INDUSTRIAL M maternas (por ejemplo, C) produciendo cerdos. Para cada una de las líneas, los cerdos evaluados con mayor superioridad se pasan a una estación de AI y se utiliza su semen: 1) para apareamientos de línea pura en el GN, que producen una progenie macho Y hembra deseada y 2) para apareamiento de línea pura o apareamientos cruzados en DN/M que producen una progenie macho O hembra deseada.

Un aumento del progreso genético en el GN generalmente implica la producción, evaluación y selección de cerdos y cerdas primerizas. En una situación tradicional (es decir, con el uso de semen no clasificado), hay efectivamente dos vías de selección: las líneas paternas producen líneas paternas y maternas y las líneas maternas producen líneas paternas y maternas. El uso del semen sexado crea una oportunidad de usar cuatro vías de selección (es decir, que las líneas paternas produzcan líneas paternas [SS], que las líneas paternas produzcan líneas maternas [SD], que las líneas maternas produzcan líneas paternas [DS] y que las líneas maternas produzcan líneas maternas [DD]) y de aumentar el mérito genético y la tasa de progreso genético a nivel comercial. La tasa de progreso genético por año en una línea en el GN es una función de la precisión de selección, intensidad de selección, variación genética e intervalo de generación:

dG = {(R*¡)ss + (R*¡)sd +(R*Í)ds + (R*¡)dd}*Oh/(LSs+ Lsd + LDS + LDD), donde,

R es la precisión de selección siendo en general Rss = RSD> RDS = RDD

L es el intervalo de generación, siendo LSs el promedio de cerdos cuando nace la progenie macho, LSD la edad promedio de los cerdos cuando nace la progenie hembra, LDS la edad promedio de las cerdas cuando nace la progenie macho y LDD la edad promedio de las cerdas cuando nace la progenie hembra.

'i' es la intensidad de selección para cada una de las cuatro vías.

Con cuatro vías de selección disponibles, se puede elegir seleccionar cuál genitor macho específico o cuál genitor hembra específico dentro de una población produce crías macho, y cuál genitor macho específico o cuál genitor hembra específico dentro de una población produce crías hembra. El concepto de Reproducción con Precisión, tal como se divulga en la presente, permite precisar los mejores genitores macho y hembra para la producción de un género específico a efectos de aumentar el mérito genético y la tasa de progreso genético a nivel comercial a través de un plan de apareamiento, evaluación y selección utilizando semen sexado. El uso de este nuevo abordaje de reproducción se denomina Reproducción con Precisión.

Un principio básico subyacente de la Reproducción con Precisión es que para cada tipo de apareamiento, tal como se ilustra en la Figura 1, hay machos (cerdos y/o su semen) y hembras (cerdas primerizas/cerdas y/o sus óvulos) en el GN y el DN/M disponibles para la producción de progenie macho y/o hembra. A efectos de generar un plan de apareamiento para un

MX/a/2018/010569 tipo de apareamiento utilizando la Reproducción con Precisión, los machos y/o hembras disponibles para el apareamiento se clasifican o dividen primero en subgrupos en función de determinados criterios que incluyen, a modo no taxativo, función en la pirámide de reproducción, edad, cantidad de partos, mérito genético (por ejemplo, EBV) y/o marcadores o mutaciones genéticos.

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TABLA 1

<td colspan="2" rowspan="2"> % de progenie machoa)</td><td colspan="5"> Subgrupos de machosb)</td>

<td rowspan="4"> Subgrupos de hembrasc)</td><td> 1</td><td> Pll</td><td> P12</td><td> P13</td><td> P14</td><td> P15</td>

a) El porcentaje de progenie machos en camadas (Pij) producido por un subgrupo de machos y un subgrupo de hembras genitoras.

b) Los machos disponibles para apareamiento se dividen en 5 subgrupos en función de la edad y/o mérito.

c) Las hembras disponibles para apareamiento se dividen en 4 subgrupos en función de la edad y/o mérito.

En el ejemplo de la Tabla 1, aparecen definidos cinco subgrupos para los machos y cuatro subgrupos para las hembras. Para cada combinación de subgrupo de ith macho y jth hembra (cada combinación de subgrupo representa un subtipo de apareamiento) se puede determinar el porcentaje de progenie macho (P¡j) y de progenie hembra (Q¡j) que resulta en el mayor aumento del mérito genético. Pg + Q¡j = 100. Py puede variar de 0 a 100.

Los machos pueden dividirse en subgrupos por edad a y dentro de cada subgrupo de edad, dividirse en subgrupos adicionales b basados en su EBV. Por ejemplo, las cerdas pueden dividirse en subgrupos por cantidad de partos p en el GN y en subgrupos por cantidad de partos q en el DN/M. Además, dentro de cada subgrupo por cantidad de partos, las cerdas pueden dividirse en subgrupos adicionales n basados, por ejemplo, en su EBV. Esto resultará en subgrupos ab para machos y subgrupos (p+q)n para hembras que proporcionan un total de subtipos de apareamiento ab(p+q)n para un tipo de apareamiento específico ilustrado en la Figura 1.

En una modalidad de la Reproducción con Precisión, cada macho y cada hembra se trata como un subgrupo de apareamiento y el porcentaje de progenie macho que produce el mayor

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MX/a/2018/010569 aumento en el mérito genético se determina para cada apareamiento potencial.

Este principio general puede aplicarse en distintas situaciones y con objetivos distintos. En general, a efectos de implementar la tecnología de Reproducción con Precisión en un programa de mejora genética, hay varias etapas que pueden llevarse a cabo:

Una etapa es determinar los recursos disponibles para el desarrollo de líneas y multiplicación. Los recursos relevantes incluyen, a modo no taxativo, la cantidad de lugares de cerdas en el GN y DN/M, la capacidad de evaluación de rendimiento en el GN y DN, la cantidad de progenies cruzadas para evaluar en las granjas comerciales por cerdo de GN (cerdos de línea pura utilizados para reproducción en el GN) y el presupuesto.

Otra etapa es definir un programa de mejora genética que no utilice la tecnología de Reproducción con Precisión. En determinadas modalidades de la invención, un programa de mejora genética puede diseñarse para proporcionar un progreso genético máximo para un nivel dado de endogamia y/o como una función de los recursos disponibles. Los principales elementos incluyen, a modo no taxativo, la cantidad de partos máxima, la cantidad de cerdos GN seleccionados para reproducción por año, el período (cantidad de días) durante los cuales un cerdo GN seleccionado se utiliza para reproducción, la meta de reproducción y la recolección de datos fenotípicos.

Una etapa adicional es estimar la mejora genética por año con un programa de desarrollo de línea utilizando métodos determinativos y/o estocásticos.

Una etapa adicional es definir un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión y semen sexado. En determinadas modalidades de la invención, además de definir el programa de desarrollo de línea junto con parámetros convencionales, también comprenderá dividir los machos y hembras disponibles para apareamiento en subgrupos. Por ejemplo las hembras pueden dividirse en subgrupos por cantidad de partos n y en subgrupos por EBV p dentro de cada subgrupo por cantidad de partos. Esto resulta en subgrupos de hembras n*p. Los machos pueden dividirse en subgrupos por edad a y en subgrupos por EBV b dentro de cada subgrupo por edad. Esto resulta en subgrupos de machos a*b. A continuación se puede desarrollar un plan de apareamiento utilizando una matriz de los subtipos de apareamiento np*ab.

Otra etapa es desarrollar un plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión. En general, la meta para dicho plan de apareamiento es aumentar el progreso genético sin aumentar la endogamia en la línea, con respecto a un plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea en el cual no se utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión (es decir, un control).En relación con un plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con

Precisión, se puede determinar un porcentaje, o un rango de porcentajes, de progenie que son macho o hembra para cada subtipo de apareamiento que resulta en un aumento del progreso genético, y en ningún aumento en la endogamia, con respecto a un control, utilizando métodos

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MX/a/2018/010569 estocásticos y/o determinativos. En determinadas modalidades de la invención, el porcentaje de progenie que son macho o hembra para cada subtipo de apareamiento que resulta en un aumento del progreso genético, y en ningún aumento en la endogamia, con respecto a un control, puede determinarse utilizando métodos estocásticos y/o determinativos.

Una etapa adicional que puede llevarse a cabo en un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión es inseminar una o más hembras en un subtipo de apareamiento con semen sexado para lograr un porcentaje de progenie que son macho o hembra tal como se determina en un plan de apareamiento. A tal efecto, el semen sexado puede obtenerse de uno o más machos en el mismo subtipo de apareamiento que las hembras.

En determinadas modalidades de la invención, un control puede comprender los mismos individuos que aquellos utilizados en un plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza tecnología de Reproducción con Precisión y puede simularse utilizando cualquier método conocido en la técnica. Además, se puede definir un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión y un programa de desarrollo de línea para un control idéntico excepto por aquellas características que solamente se encuentran en un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión.

Una condición que debe suponerse para el plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza tecnología de Reproducción con Precisión y el control es que cada hembra en cualquier punto de tiempo solamente puede utilizarse en combinación con un macho, a no ser que se utilice semen mezclado. En relación con el control, se puede suponer además que las hembras seleccionadas como genitoras se aparean aleatoriamente con los machos disponibles, con la excepción de que se evitan los apareamientos entre individuos relacionados estrechamente tales como hermanos biparentales y hermanos uniparentales, y que cada camada tiene en promedio una división 50/50 entre progenie macho y hembra. Alternativamente, en relación con el plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión, se puede suponer que cada subtipo de apareamiento tendrá un objetivo para producción de un porcentaje promedio determinado de machos o hembras, que varía de 0 a 100% y para cada camada en general, un objetivo de 0, 50 o 100%.

En determinadas modalidades de la invención, un plan de apareamiento para un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión puede comprender simplemente un marco o directrices generales que derivan de los porcentajes objetivo

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INDUSTRIAL M específicos determinados para subtipo de apareamiento. Por ejemplo, una directriz general puede ser que cada generación comprende un porcentaje determinados de machos en general o que los genitores jóvenes, con EBV alto deben producir preferiblemente solo machos. Un marco o directrices generales se implementarán en general para aumentar el progreso genético, sin un aumento en la endogamia, con respecto a un control.

Otra etapa es incluir apareamientos en el nivel DN/M en un plan de apareamiento con porcentajes óptimos de porcinos macho o hembra a efectos de hacer un uso óptimo de la capacidad de producción de semen por cerdo y utilizar los cerdos con mayor superioridad para contribuir en la mejora genética y el control de la endogamia así como la diseminación genética para el nivel comercial en última instancia.

Como alternativa, o adicionalmente, para evaluar o valorar a la progenie fenotípicamente, en determinadas modalidades de la invención, se puede implementar selección genómica o selección asistida por mutación. En relación con la selección asistida por mutación, los animales reproductores de GN tendrán una cantidad conocida de mutaciones favorables y ciertos individuos pueden volverse muy importantes para un programa de mejora genética. Por ejemplo, si hay tres mutaciones de interés y la frecuencia del alelo favorable es 0.5, solo 1.56% de los animales serán homocigóticos para los tres alelos favorables. Si la cantidad de mutaciones favorables identificadas aumenta y/o las frecuencias de alelos favorables disminuyen, el porcentaje de individuos con el genotipo ideal se reducirá.

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Aplicación de la teoría de contribución genética óptima en la Reproducción con Precisión

La selección intensiva en especies tales como la porcina aumenta el riesgo de pérdida de la diversidad genética a través de un aumento de la endogamia y las relaciones entre animales en una población, que resulta en un porcentaje más alto de genes recesivos nocivos en el estado homocigótico y en depresión endogámica. La endogamia, en general, no es problemática para los programas de reproducción existentes ya que se toma en cuenta la endogamia. Entre estos programas de reproducción existentes, la endogamia generalmente se restringe a menos de 1% de aumento por generación.

Inicialmente, la endogamia se controlaba restringiendo la cantidad de hermanos biparentales y uniparentales producidos y/o seleccionados y evitando los apareamientos entre hermanos biparentales y uniparentales. En la actualidad, la mayoría de los programas de reproducción limitan la endogamia implementando reglas basadas en la teoría de la contribución genética óptima (OGC). La OGC maximiza el progreso genético mientras limita la tasa de endogamia o las relaciones entre candidatos seleccionados (véase Woolliams, J. and Meuwissen, T.,

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22 o

1993, Decisión rules and variance of response in breeding schemes, Anim. Prod. 56:179-186; y ® σ>

Meuwissen, T., 1997, Maximizing the response of selection with a predefined rate of inbreeding. 1 ω

Anim. Sc¡. 75:934-940).

La aplicación de la OGC en los programas de reproducción generalmente comprende dos etapas:

1. Elegir a los genitores seleccionados entre los candidatos para selección y asignar contribuciones genéticas para la siguiente generación a cada candidato seleccionado.

2. Desarrollar un plan de apareamiento en el que participen los candidatos seleccionados que minimice la endogamia promedio en la siguiente generación.

En los porcinos funciona de la siguiente forma:

- Se produce una cantidad determinada de progenie macho y hembra por generación o por período (por ejemplo, por semana).

- Después de la prueba de rendimiento se deben tomar decisiones de selección. El uso de la teoría OGC resulta en el cálculo de la contribución genética óptima para cada uno de los individuos sometidos a prueba para determinar su rendimiento. Los individuos con una contribución calculada por debajo de un umbral determinados (umbrales diferentes para machos y hembras) se descartan y los individuos seleccionados a continuación quedan disponibles para reproducción.

- En cada período hay una cantidad de machos y hembras disponible para reproducción y se pueden utilizar algoritmos para desarrollar el plan de apareamiento que resulte en una endogamia promedio mínima.

Existen diversos paquetes de programas informáticos disponibles en el mercado para implementar los conceptos expuestos anteriormente. Para utilizar la OGC, existen paquetes tales como GENCONT, EVA (Nordgen) y TGRM™ (X'Prime), y para diseñar el apareamiento se puede utilizar un algoritmo de apareamiento simulado (Sonesson, A. y Meuwissen, T., 2000, Mating schemes for optimum contribution selection with constrained rates of inbreeding, Genet. Sel. Evol. 32:231-248) o X'Mate™ (X'Prime) si el desarrollo de programas informáticos interno no es confiable.

En determinadas modalidades de la invención, se puede implementar la OGC para limitar o controlar la endogamia en un programa de desarrollo de línea utilizando tecnología de Reproducción con Precisión.

Los programas informáticos de OGC generalmente exigen información de linaje y una descripción de la estructura de un programa de reproducción que incluye, a modo no taxativo, tamaño de población, capacidad de prueba y cantidad de partos máxima de las cerdas. Con el uso de la tecnología de Reproducción con Precisión, también se debe incluir la definición de las subclases de edad y mérito genético.

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En lugar de calcular la contribución genética óptima para cada uno de los individuos sometidos a prueba para determinar su rendimiento, cuando se utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión, se calcula la contribución genética óptima para cada uno de los individuos sometidos a prueba para determinar su rendimiento para la producción de una progenie macho y la contribución genética óptima para cada uno de los individuos sometidos a prueba para determinar su rendimiento para la producción de una progenie hembra. Los individuos con una contribución calculada por debajo de un umbral determinado para la producción de machos y por debajo de un umbral determinado para la producción de hembras se descartan y los individuos seleccionados quedan disponibles para reproducción para producir progenie macho y/o hembra. Se produce un plan de apareamiento que minimiza la endogamia y resulta en las contribuciones que se calcularon.

La Tabla 2 a continuación proporciona un ejemplo de las contribuciones calculadas de los candidatos para selección (machos así como hembras) para producir progenie macho y/o hembra.

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TABLA 2

<td colspan="4"> Contribuciones ^enéticas: cantidad de progenie v?</td><td> i:: : |</td><td colspan="4"> Contribuciones genéticas: cantidad de progenie</td><td> : ¿ig g</td>

<td colspan="2"> ....¿.Candidatosde .</td><td colspan="2"> ^Contnbucion para T</td><td colspan="3"> Seleccionado ¡ i Candidatos de .</td><td colspan="2"> ::: Contribución para</td><td> Seleccionado</td>

<td colspan="2"> . ¡Selección</td><td colspan="2"> ....¡producir .¿..¿.¡Ί</td><td> /....... ;S;W</td><td colspan="2"> . : Selección</td><td colspan="2"> ¡producir</td><td> VÑ .....g’</td>

<td> W L.J</td><td>: Sexo .</td><td> ^machos .</td><td> = hembras .</td><td></td><td> n>.....</td><td> : Sexo :</td><td> ¡¡machos ü</td><td> ^hembras</td><td> g Γ::*::'</td>

<td> 1</td><td> macho</td><td> 32</td><td> 72</td><td> OS1 s</td><td> 7</td><td> hembra</td><td> 8</td><td> 32</td><td> J^!sí.....v</td>

<td> 2</td><td> macho</td><td> 0</td><td> 48</td><td></td><td> 8</td><td> hembra</td><td> 0</td><td> o</td><td> g . No</td>

<td> 3</td><td> macho</td><td> 0</td><td> 16</td><td></td><td> 9</td><td> hembra</td><td> 0</td><td> 16</td><td> i '3!</td>

<td> 4</td><td> macho</td><td> 64</td><td> 56</td><td> ^;|sí.....</td><td> 10</td><td> hembra</td><td> 16</td><td> 40</td><td> i . Si</td>

<td> 5</td><td> macho</td><td> 0</td><td> 0</td><td> ¿íNo ¿</td><td> 11</td><td> hembra</td><td> 24</td><td> 40</td><td> f^Sl -i::·</td>

<td> 6</td><td> macho</td><td> 0</td><td> 0</td><td> ¡i^gNo</td><td> 12</td><td> hembra</td><td> 0</td><td> 0</td><td>: Ño</td>

<td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> 13</td><td> hembra</td><td> 8</td><td> 24</td><td> ¡’Sl</td>

<td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> 14</td><td> hembra</td><td> 40</td><td> 40</td><td> F . Sí</td>

<td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> 15</td><td> hembra</td><td> 0</td><td> 0</td><td></td>

<td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> 16</td><td> hembra</td><td> 0</td><td> 0</td><td></td>

<td></td><td></td><td></td><td> ·. ·. -7-7-: -^-^^^^7-7-7-7-7-7-: ví</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> gggggg......’ÍH:</td>

El proceso puede utilizar repetición, más probablemente algoritmos evolutivos, para encontrar la solución óptima que cumple con todos los requisitos definidos. En este ejemplo los requisitos podrían haber sido:

Un nivel máximo definido de aumento de la endogamia

Maximizar la mejora genética dada la restricción de la endogamia

Cada contribución es un múltiple de 8.

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Si se definen subgrupos de animales, el objetivo para cada animal dentro de un grupo será el mismo.

Los costos financieros asociados con el proceso de sexado son un factor de su implementación en una pirámide de producción. Sin embargo, estos costos pueden mitigarse utilizando técnicas de inseminación a dosis bajas divulgadas en la presente y/o reduciendo la cantidad de dosis (inseminaciones) por estro de dos a una utilizando técnicas de sincronización de estro divulgadas en la presente.

El proceso de producir muestras de espermatozoides sexados en general lleva mucho tiempo y es costoso, típicamente requiere el uso de equipos de citometría de flujo especializados, técnicos con gran nivel de capacitación y procesos complejos. Infelizmente, la dosis típica de espermatozoides de cerdo necesaria para una fertilización exitosa utilizando técnicas de inseminación artificial convencionales tales como inseminación intracervical es 1 x 109 espermatozoides a 3 x 109 espermatozoides, conteniendo el eyaculado típico de un cerdo aproximadamente 6 x 1010 espermatozoides. Por lo tanto, el eyaculado típico de cerdo contiene aproximadamente 20 a 60 dosis de inseminación artificial, lo que limita en gran medida la aplicación comercial de muestras de espermatozoides sexados en la reproducción de porcinos. Además, tal como se indicó anteriormente, en general se insemina a las hembras dos veces por ciclo de estro. Por consiguiente, si se puede reducir la cantidad total de espermatozoides necesaria para una fertilización exitosa, se puede producir una cantidad mayor de dosis de inseminación artificial para un cerdo dado en una cantidad de tiempo dada, haciendo que el uso de muestras de espermatozoides sexados sea más deseable desde un punto de vista comercial. A fin de expandir la aplicación comercial de las muestras de espermatozoides sexados en porcinos, determinadas modalidades de la presente invención abarcan métodos de inseminación a dosis bajas, que incluyen la inseminación a través de un catéter intrauterino profundo y laparoscopia, y métodos para sincronizar el estro. Estos métodos posibilitan la opción de reducir la cantidad de machos producidos por reproducción en una pirámide de producción y, en consecuencia, la cantidad de cerdas utilizadas para producir estos machos utilizados para reproducción en una pirámide de producción. De forma alternativa, en lugar de reducir la producción de machos utilizados para reproducción, se puede acelerar la diseminación genética a través de la pirámide de producción al seleccionar menos machos con mérito genético más alto para reproducción en cada nivel de producción, lo que resulta en última instancia en un porcino comercial de mayor calidad.

Los siguientes Ejemplos se divulgan únicamente a modo de ejemplo y no se pretende que limiten las modalidades de la invención divulgadas en la presente en ningún sentido.

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EJEMPLOS

EJEMPLO 1

En el siguiente Ejemplo, el interés se centra en la predicción del efecto promedio del uso de la tecnología de Reproducción con Precisión en un programa de reproducción de porcinos utilizando un método determinativo.

Etapa 1: Definir un programa de reproducción sin el uso de la tecnología de Reproducción con Precisión (control):

Etapa 1.1: Definir el hato de cerdas para una línea en el GN en función de las siguientes variables:

Cantidad de cerdas por cantidad de partos

Cantidad de cerdas primerizas seleccionadas que ingresan al hato de cerdas por período (por ejemplo, semana, año)

Cantidad de partos máxima para líneas Paternas y líneas Maternas

Edad en la producción de la primera camada y las posteriores

Etapa 1.2: Definir la población de cerdos

Cantidad de cerdos seleccionados por período (por ejemplo, semana, año)

Cantidad de días en que se utiliza a los cerdos para reproducción.

Edad del cerdo en la que nace la primera progenie

Etapa 1.3: Producción de progenie

Las cerdas primerizas y cerdas disponibles se aparean aleatoriamente con los cerdos disponibles y cada camada tiene una división 50/50 entre progenie macho y hembra.

Lechones por camada (4 machos y 4 hembras) disponibles para la prueba de rendimiento.

Cantidad de machos y hembras en la progenie disponibles para llevar a cabo la prueba de rendimiento por período.

Etapa 1.4: prueba de rendimiento

Someter a prueba ocho progenies por camada.

NSd = cantidad de cerdas primerizas a seleccionar por período; NPTd = cantidad de sometidos a prueba de rendimiento por período. La fracción seleccionada de cerdas primerizas (pd) = NS^NPrí De forma similar, la fracción seleccionada de cerdos (ps) = NS7NPT5. La d significa línea materna y la s significa línea paterna.

Los valores -p- pueden convertirse en intensidades de selección utilizando una función de p, o pueden buscarse en las tablas.

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Ld es la edad promedio de las cerdas (líneas maternas) cuando nace la progenie.

Ls es la edad promedio de los cerdos (líneas paternas) cuando nace la progenie.

Mejora genética dG = RIH * oH * (id +¡s)/(Ld+Ls). La oH, variación genética, es una constante y se supone que la precisión de la selección RIH es la misma para las cerdas primerizas y cerdos sometidos a prueba. Por lo tanto, se pueden evaluar las opciones de programa de reproducción comparando los valores (id +¡s)/(Ld+Ls).

Etapa 2: Definir un programa de reproducción con el uso de la tecnología de Reproducción con Precisión. Los siguientes detalles son Importantes además de los descritos anteriormente:

Etapa 2.1: Definir el hato de cerdas:

Dividir a las cerdas en subgrupos en función del mérito genético (CerdaGGM).

Cantidad de cerdas por subclase de Cantidad de partos*CerdaGGM.

Etapa 2.2: Definir la población de cerdos.

Dividir a los cerdos del período que se usan para reproducción en subgrupos en función de la edad y el mérito genético (CerdoGGM).

Edad promedio de los cerdos en la que nace la progenie para cada subgrupo de Edad*CerdoGGM.

Etapa 2.3: Producción de progenie

Para cada combinación (Cantidad de partos*CerdaGGM) * (Edad*CerdoGGM) (es decir, para cada subtipo de apareamiento) asignar un porcentaje determinado de progenie macho que se producirá, siendo lo restante progenie hembra. Si, por ejemplo, hay dos clases de cantidad de partos y tres de CerdaGGM, dos clases de edad del cerdo y dos clases de CerdoGGM, el porcentaje de progenie macho debe asignarse a 24 clases de apareamiento (es decir, 2*3*2*2 =24).

Cantidad de progenie macho y hembra disponible para llevar a cabo la prueba de rendimiento por período % de progenie macho producida por cantidad de partos.

% de progenie macho por grupo de edad de los cerdos.

Etapa 2.4: prueba de rendimiento

Las cerdas primerizas y los cerdos seleccionados se dividen en subgrupos en función de su mérito genético y el grupo de los mejores individuos tendrá una intensidad de selección más alta que el segundo mejor grupo, etc. El valor I se puede calcular para cada clase de CerdaGGM y para cada clase de CerdoGGM.

En el programa de reproducción sin Reproducción con Precisión (es decir, la situación control), las mismas cerdas producen la progenie macho y de hembras. En el programa de

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INDUSTRIAL M reproducción que utiliza la Reproducción con Precisión, la progenie macho puede producirse con una mezcla diferente de cerdas de la de la progenie hembra. Además, en la situación control, los mismos cerdos producen la progenie macho y hembra. Mediante el uso de Reproducción con Precisión, la progenie macho puede producirse con una mezcla diferente de cerdos de la de la progenie hembra. Asimismo, cuando se utiliza la Reproducción con Precisión, hay efectivamente dos tipos de cerdas (DD - cerdas que producen progenie hembra y DS = cerdas que producen progenie macho) y dos tipos de cerdos (SD = cerdos que producen progenie hembra y SS = cerdos que producen progenie macho). Por consiguiente, cuando se usa la Reproducción con Precisión, la mejora genética dG = RIH * oH * (idd+ ids + isd + iss)/(Ldd+Lds+Lsd + Lss). La oH es una constante y se supone que la precisión de la selección RIH es la misma para todas las cerdas primerizas y cerdos sometidos a prueba. Por consiguiente, se pueden evaluar las opciones de programa de reproducción comparando los valores (idd+ ids + isd + iss)/(Ldd+Lds+ Lsd + Lss).

Etapa 3: Maximizar el progreso genético del programa de reproducción utilizando Reproducción con Precisión

Etapa 3.1: Control i/t = (¡d +¡s)/(Ld+Ls).

Etapa 3.2: Definir opciones para el porcentaje de progenie macho en las camadas en cada uno de los subtipos de apareamiento. Cada uno de los subtipos de apareamiento puede tener 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 100% de lechones macho producidos. Con, por ejemplo, 24 subtipos de apareamiento, esto resultaría en (ll)24 opciones para evaluar.

Etapa 3.3: Reproducción con Precisión i/t = (idd+ ids + isd + iss)/(Ldd+Lds+ Lsd + Lss) para cada opción.

Etapa 3.4: dGreiac¡ón = Reproducción con Precisión i/t dividido entre Control i/t.

Etapa 3.5: La opción con el valor más alto para dGreiación es cercana a lo mejor.

Etapa 3.6: Definir opciones para el porcentaje de progenie macho en las camadas en cada una de las clases de apareamiento alrededor del mejor valor encontrado en la etapa 3.5 con etapas de 1% en lugar de 10%.

Etapa 3.7: Repetir las etapas 3.3 a 3.5 y buscar el mejor valor.

De forma alternativa, la Etapa 3 puede llevarse a cabo utilizando algoritmos evolutivos. La solución comienza con una solución definida. En nuestro ejemplo podría ser 50%/50% de progenie macho/hembra por camada en cada uno de los 24 tipos de apareamiento. El programa, a continuación, define pequeñas desviaciones (por ejemplo 49/51 y 51/49 para cada tipo de apareamiento) y encuentra la mejor solución. El programa, a continuación, define pequeñas

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INDUSTRIAL M variaciones en la última solución y encuentra la mejor solución nueva etc., hasta que se estabiliza la solución.

Etapa 4: Repetir el proceso con supuestos diferentes y para estrategias diferentes

Para líneas Paternas o líneas Maternas.

Cantidad de cerdas primerizas que ingresan al hato por ciclo = 50, 100, 150,

200, 300, etc.

Cantidad de cerdos utilizados para reproducción por ciclo = 10, 20, 30, 50, 100, etc.

Cantidad de partos máxima = 1, 2, 3, 4, 5 o 6.

Período en que se utiliza a los cerdos para reproducción - 35 días, 70 días,

140 días, etc.

Dividir a las cerdas primerizas/cerdas en 2, 3, 4, ... clases por mérito genético (o no dividir).

Dividir a los cerdos para reproducción en 2, 3, 4, ... clases por mérito genético (o no dividir).

Etc.

EJEMPLO 2

Las Tablas 3 a 5 proporcionan un ejemplo de un plan de apareamiento en un programa de desarrollo de línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión. Este plan de apareamiento comprende 30 hembras divididas en tres subgrupos por cantidad de partos y 4 machos divididos en dos subgrupos por edad del macho, dividiéndose cada uno de dichos subgrupos de machos y hembras adicionalmente en dos subgrupos por mérito genético. Se supuso una tasa de partos porcinos del 100%. La Tabla 3 proporciona la cantidad de cerdas en cada una de las 24 clases de subtipo de apareamiento.

TABLA 3

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<td colspan="2" rowspan="2"> Cantidad de camadas por subtipo de apareamiento3)</td><td colspan="6"> Edad de hembrasb)</td><td rowspan="3"> Cant. total de camadas</td>

<td> Edad de machosc)</td><td> EBVd)</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td>

<td colspan="2"> Cant. de hembras</td><td> 6</td><td> 6</td><td> 5</td><td> 5</td><td> 4</td><td> 4</td><td> 30</td>

a) La tabla proporciona la cantidad de camadas producidas por subtipo de apareamiento (= combinación de subgrupo de machos y subgrupo de hembras).

b) Las hembras se dividen en tres subgrupos en función de la edad (cantidad de partos 1, 2 y 3).

c) Los machos se dividen en dos subgrupos en función de la edad (1 y 2).

d) Las hembras se dividen dentro del grupo de cantidad de partos en dos subgrupos por EBV (1 y 2) los machos se dividen dentro del grupo de edad en dos subgrupos por EBV (1 y 2).

Las hembras se dividen dentro del grupo de cantidad de partos en dos subgrupos por EBV (1 y 2) los machos se dividen dentro del grupo de edad en dos subgrupos por EBV (1 y 2).

Para cada uno de los 24 subtipos de apareamiento, se determina un objetivo para el porcentaje de progenie macho para cada subtipo de apareamiento que, con respecto a un control, maximiza el progreso genético en la línea y mantiene el aumento de la endogamia en un nivel definido. La Tabla 4 proporciona el porcentaje objetivo de progenie macho en cada una de las clases de subtipo de apareamiento.

TABLA 4

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<td colspan="2" rowspan="2"> % de progenie macho por subtipo de apareamiento3)</td><td colspan="6"> Edad de hembrasb)</td>

<td> Edad de machosc)</td><td> EBVd)</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td>

a) La tabla proporciona el porcentaje promedio de machos producidos en camadas por subtipo de apareamiento (= combinación de subgrupo de machos y subgrupo de hembras).

b) Las hembras se dividen en tres subgrupos en función de la edad (cantidad de partos 1, 2 y 3).

c) Los machos se dividen en dos subgrupos en función de la edad (1 y 2).

d) Las hembras se dividen dentro del grupo de cantidad de partos en dos subgrupos por EBV (1 y 2) los machos se dividen dentro del grupo de edad en dos subgrupos por EBV (1 y 2).

Los datos de las Tablas 3 y 4 luego pueden utilizarse para determinar la cantidad de lechones macho producidos y disponibles para someter a prueba de rendimiento, tal como se muestra en la Tabla 5. En este plan de apareamiento, se supone que 8 lechones por camada están disponibles para someter a prueba de rendimiento.

TABLA 5

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<td colspan="2" rowspan="2"> Cant. de progenie macho por subtipo de apareamiento3’</td><td colspan="6"> Edad de hembras0’</td><td rowspan="3"> Cant. de progenie macho</td>

<td> Edad de machosc)</td><td> EBVd)</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td><td> 1</td><td> 2</td>

<td colspan="2"> Cant. de progenie macho</td><td> 42</td><td> 20</td><td> 6</td><td> 0</td><td> 0</td><td> 0</td><td> 68</td>

a) La tabla proporciona la cantidad de machos producidos por subtipo de apareamiento (= combinación de subgrupo de machos y subgrupo de hembras).

b) Las hembras se dividen en tres subgrupos en función de la edad (cantidad de partos 1, 2 y 3).

c) Los machos se dividen en dos subgrupos en función de la edad (1 y 2).

d) Las hembras se dividen dentro del grupo de cantidad de partos en dos subgrupos por EBV (1 y 2) los machos se dividen dentro del grupo de edad en dos subgrupos por EBV (1 y 2).

En este ejemplo de plan de apareamiento, de todos los 240 de la progenie disponibles para someter a prueba de rendimiento, 68 (28%) son machos.

EJEMPLO 3

El siguiente Ejemplo demuestra que al aumentar la cantidad de criterios para dividir a los machos o hembras en subgrupos (por ejemplo, EBV, edad, cantidad de partos, etc.), al aumentar la cantidad de subgrupos para un criterio dado o al definir subgrupos macho y hembra, se puede aumentar el progreso genético de una línea.

Los programas que utilizan reproducción con precisión (PB) se compararon con un programa control que utiliza un abordaje determinativo tal como se describe en el Ejemplo 1.

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Parámetros del programa para línea paterna

150 cerdas para primer parto por ciclo 10 cerdos seleccionados por ciclo de 5 meses Los cerdos se dividieron en 2 grupos de edad y 2 clases de EBV que resultaron en 4 subgrupos

Las cerdas se dividieron en 2 grupos de edad (cantidad de partos 1 y 2) y 3 clases de EBV que resultaron en 6 subgrupos subtipos de apareamiento (4*6)

Parámetros del programa para línea materna

200 cerdas para primer parto por ciclo 15 cerdos seleccionados por ciclo de 5 meses Los cerdos se dividieron en 2 grupos de edad y 2 clases de EBV que resultaron en 4 subgrupos

Las cerdas se dividieron en 3 grupos de edad (cantidad de partos 1, 2 y 3-5) y 3 clases de EBV que resultaron en 9 subgrupos subtipos de apareamiento (4*9)

Para el plan de apareamiento para la línea que utiliza la tecnología de Reproducción con Precisión, los machos se clasificaron en dos grupos por edad: machos más jóvenes (los primeros tres meses en que se usan) y machos más viejos (el siguiente período de tres meses). Los machos se clasificaron además por sus EBV en dos grupos (HH y H), comprendiendo el primer grupo a los mejores cerdos (HH) y comprendiendo el segundo grupo a los segundos mejores cerdos (H). Las hembras de una línea paterna se clasificaron en dos grupos por edad: 1 (cantidad de partos 1) y 2 (cantidad de partos 2) mientras que las hembras de un línea materna se clasificaron en tres grupos por edad: 1 (cantidad de partos 1), 2 (cantidad de partos 2) y 3 (cantidad de partos 3-5). Las cerdas primerizas/cerdas se clasificaron en tres grupos de igual tamaño en función de sus EBV (HH,H y M, del más alto al más bajo valor de reproducción).

Control: 50% de progenie macho en cada subtipo de apareamiento

PB-1: El mismo porcentaje óptimo de progenie macho en cada subtipo de apareamiento

PB-2: Porcentaje óptimo de machos en la primera camada y 100% de hembras en las camadas posteriores.

PB-3s: Línea paterna. Los cerdos más jóvenes se utilizan con las cerdas primerizas para producir las primeras camadas con porcentaje óptimo de machos. Los cerdos más viejos se utilizan con las cerdas para producir las segundas camadas con 100% de hembras.

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PB-3d: Línea materna: Los cerdos más jóvenes se utilizan con las cerdas primerizas para producir las primeras camadas con porcentaje óptimo de machos y con las cerdas para producir las segundas camadas con 100% de hembras. Los cerdos más viejos se utilizan con las cerdas para producir los partos 2-5 de camadas con 100% de hembras.

PB-4s: Línea paterna: Igual que con PB-3s pero utilizando las clases de EBV. El porcentaje de progenie macho se optimiza en cada una de las 6 clases de EBV (2 clases de EBV para cerdos y 3 clases de EBV para cerdas primerizas).

PB-4d: Línea materna: Igual que con PB-3d pero utilizando las clases de EBV.

PB-5: Aumento de la cantidad de clases de EBV

PB-6: Cada individuo se trata como una clase de EBV

La evaluación se llevó a cabo para los programas PB-1 a PB-4. Los últimos dos programas, PB-5 y PB-6, se estimaron extrapolando los resultados. Los resultados se resumen en la Figura 2, que muestran que niveles aumentados de sofisticación en la Reproducción con Precisión conducen a un impacto mayor sobre dG, de hasta alrededor de +10% en líneas paternas y +13% en líneas maternas. El porcentaje global de lechones macho cae hasta alrededor de 20% en líneas paternas y 15% en líneas maternas.

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EJEMPLO 4

Preparación de muestras de espermatozoides de cerdo sexados

El siguiente proceso de preparación de una muestra de espermatozoides sexados se proporciona solamente a modo de ejemplo no taxativo. La primera etapa para producir una muestra de espermatozoides sexados es obtener un eyaculado de un cerdo adecuado. Luego de recoger el eyaculado, se puede extender en un extensor adecuado, que puede incluir un antioxidante. A continuación, se puede diluir una fracción rica en espermatozoides del eyaculado. Si es necesario transportar la muestra antes de la selección del sexo, la muestra puede mantener a una temperatura de 0-39°C (típicamente 16-17°C) durante entre alrededor de 12 horas a alrededor de 18 horas mientras se envía desde el punto de recolección hasta el citómetro de flujo para el proceso de sexado.

Una vez que la muestra de espermatozoides está en el laboratorio, se pueden llevar a cabo diversas verificaciones de calidad con la muestra de espermatozoides incluida la verificación de la motilidad (por ejemplo, a través de CASA System), viabilidad (por ejemplo, a través de un citómetro de flujo), morfología (por ejemplo, a través de microscopio) y concentración (por ejemplo, a través de NucleoCounter). Las muestras de espermatozoides que pasan estas verificaciones de calidad a continuación se preparan para la clasificación.

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Antes de pasar la muestra a través del citómetro de flujo, la muestra se tiñe con un tinte selectivo de ADN, se expone a un tinte de aplacamiento para formar una muestra de espermatozoides teñida, que posteriormente se coloca en una fuente de espermatozoides del citómetro de flujo. Específicamente, la muestra de espermatozoides en algunas modalidades puede diluirse primero con una solución amortiguadora o extensor, tal como BTS (véase Tabla 6) hasta una concentración final que en algunos casos puede ser 100 x 106 células/ml, y a continuación se agrega el tinte selectivo de ADN Hoechst 33342 (pueden ser 5mg/ml en agua MiliQ; Ref: B-2261), una buena concentración de trabajo puede ser alrededor de 5μΙ/100 millones de células/ml pero el tinte de ADN puede utilizarse a concentraciones más altas y más bajas en el rango de 0.5 a 20 ul/100 millones de células/ml. A continuación, la muestra se coloca en agua de baño cubierta entre 30 y 42°C (generalmente cercano a 35°C) durante entre 10 min y 12 horas, con tinción excepcional alrededor de 50 minutos después, y luego posteriormente se coloca en un área oscura a temperatura ambiente (21-22°C) antes de la clasificación. Antes de clasificar la muestra, la muestra se filtra para eliminar los restos y células grandes (por ejemplo con CelITricks de 0.30pm) y después de la filtración se puede agregar tinte rojo para alimentos (cuando se agrega es generalmente 0.5 - 5 μΙ, o ΙμΙ de una solución concentrada de 25mg/ml en agua MiliQ) o se puede agregar otro tinte de aplacamiento a la muestra. A continuación, la muestra puede clasificarse utilizando un citómetro de flujo con un fluido envolvente que en algunos casos puede comprender los componentes indicados en la Tabla 7, pero también se pueden utilizar otro fluidos envolventes.

La Figura 3 ilustra, de forma esquemática, parte de un citómetro de flujo utilizado para clasificar una muestra de espermatozoides para formar una o más subpoblaciones, haciéndose referencia al citómetro de flujo en general como 10. En esta modalidad específica, el sexado se lleva a cabo de forma que las subpoblaciones sean espermatozoides con el cromosoma X y espermatozoides con el cromosoma Y. La Figura 3 representa una única técnica para clasificar el esperma, pero se puede utilizar cualquier otra técnica de clasificación de células conocida en la técnica con determinadas modalidades de la invención.

Un operador puede programar el citómetro de flujo 10 de la Figura 3 para generar dos corrientes de gotas cargadas, una que contiene los espermatozoides que tienen el cromosoma X, cargada positivamente, 12, una que contiene los espermatozoides que tienen el cromosoma Y, cargada negativamente, 13, mientras que una corriente no desviada inalterada de células muertas 14 simplemente se desecha.

Un operador también puede elegir programar el citómetro de flujo de tal forma que el esperma que contiene el cromosoma X y el esperma que contiene el cromosoma Y se recojan utilizando un criterio de alta pureza (en otras palabras, que solamente se recojan los espermas con cromosomas X e Y vivos) o programar el citómetro de flujo para recoger el esperma que contiene el

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INDUSTRIAL M cromosoma X y el esperma que contiene el cromosoma Y utilizando un criterio enriquecido (en otras palabras, recogerá gotas que contienen células vivas que no se clasificaron anteriormente y excluirá todas las células nuevamente mediante el uso de lógica de Puerta Booleana disponible en la computadora que controla el citómetro de flujo). La lógica de Puerta Booleana también puede utilizarse para recoger solo uno del esperma que tiene el cromosoma X o el cromosoma Y.

Inicialmente, una corriente de espermatozoides bajo presión se deposita en la boquilla 15 de la fuente de espermatozoides 11 de forma tal que puedan estar rodeadas coaxialmente por un fluido envolvente suministrado a la boquilla 15 a presión desde la fuente de fluido envolvente 16. Un oscilador 17 que puede estar presente puede controlarse con mucha precisión a través de un mecanismo de control de oscilador 18, creando ondas de presión dentro de la boquilla 15 que se transmiten a la corriente de espermatozoides rodeada coaxialmente a medida que sale del orificio de la boquilla 19. Como resultado, la corriente de espermatozoides rodeada coaxialmente que sale 20 podría formar eventualmente y regularmente gotas 21.

La carga de las respectivas corrientes de gotas se posibilita a través del sistema de detección de células 22 que incluye un láser 23 que ilumina la corriente que sale de la boquilla 20 y la emisión de luz de la corriente fluorescente se detecta mediante un sensor 24. La información

MX/a/2018/010569 recibida por el sensor 24 se alimenta a un sistema de discriminación de clasificador 25 que muy rápidamente toma la decisión de cargar una gota que se está formando y de hacerlo, cuál carga proporcionar a la gota que se está formando y luego carga la gota 21 en consecuencia.

Una característica del esperma que tiene el cromosoma X es que absorbe más tinte de fluorocromo que el esperma que tiene el cromosoma Y debido a la presencia de más ADN, y como tal, la cantidad de luz emitida por el tinte absorbido excitado por el láser en el esperma que tiene el cromosoma X difiere de la del esperma que tiene el cromosoma Y y esta diferencia comunica al sistema de discriminación de clasificador 25 el tipo de cargar que debe aplicar a las gotas individuales que teóricamente contienen solo un espermatozoide que tiene el cromosoma X o Y. Las células muertas (o aquellas que están por morir) típicamente absorben el tinte de aplacamiento que se comunica al sistema de discriminación de clasificador 25 para que no aplique carga a las gotas que contienen dichas células.

Las corrientes de gotas cargadas y no cargadas luego pasan entre un par de placas cargadas electroestáticamente 26, que provocan que se desvíen hacia un lado o hacia el otro o no dependiendo de su carga hacia los recipientes de recolección respectivos 28 y 29 para formar respectivamente una población enriquecida por género que tiene cromosoma X y espermatozoides que tienen el cromosoma Y enriquecidos por género que tienen un tinte selectivo de ADN asociado con su ADN. La corriente de subpoblación no desviada inalterada que contiene células muertas (o que están por morir) va hacia un contenedor de desechos 30.

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La muestra de espermatozoides sexados se recoge en un tubo de 50 mi con 2,5 mi de fluido de captura, que en algunas modalidades puede ser TesTrisGlucosa (TTG) (véase Tabla 8) con 2% de yema de huevo, para cada 20 millones de célula. En esta modalidad, la muestra de espermatozoides sexados tendrá típicamente un volumen final de aproximadamente 24 mi a alrededor de 1 xlO6 células por mi. A continuación este tubo se almacena a temperatura ambiente en una habitación oscura durante alrededor de 2 horas.

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TABLA 6

Extensor BTS

<td> PRODUCTOS QUÍMICOS</td><td> CÓDIGO SYGMA</td><td> g/litro</td>

<td> Glucosa</td><td> G6152</td><td> 36,941</td>

<td> Citrato de sodio</td><td> S4641</td><td> 5,999</td>

<td> Bicarbonato de sodio</td><td> S5761</td><td> 1,261</td>

<td> Cloruro de potasio</td><td> P3911</td><td> 0,7456</td>

<td> Sulfato de kanamicina</td><td> K4000</td><td> 0,05</td>

TABLA 7

Fluido envolvente fPBSI

<td> PRODUCTOS QUÍMICOS</td><td> CÓDIGO SYGMA</td><td> g/litro</td>

<td> Cloruro de sodio</td><td> S9888</td><td> 8</td>

<td> Cloruro de potasio</td><td> P3911</td><td> 0.2</td>

<td> Fosfato monobásico de sodio monohidrato</td><td> S9638</td><td> 0.12</td>

<td> Fosfato dibásico de sodio heptahidrato</td><td> S9390</td><td> 1.717</td>

<td> Ácido EDTA</td><td> E6758</td><td> 1</td>

<td> Sal potásica de penicilina G</td><td> PENK</td><td> 0.058</td>

<td> Sulfato de estreptomicina</td><td> S6501</td><td> 0.05</td>

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TABLA 8

TesTrisGlucosa ÍTTGI

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<td> PRODUCTOS QUÍMICOS</td><td> CÓDIGO SYGMA</td><td> g/lOOml</td>

<td> GLUCOSA</td><td> G6152</td><td> 0.6</td>

<td> KANAMICINA</td><td> K4000</td><td> 0.005</td>

Una vez obtenida la muestra de espermatozoides sexados, se puede utilizar en procedimientos de inseminación artificial convencionales, tales como inseminación intracervical, fertilización in vitro o inseminación artificial con catéter intrauterino profundo o laparoscopía. De forma alternativa, la muestra de espermatozoides sexados puede crioconservarse para almacenamiento y luego posteriormente descongelarse para uso en un momento posterior.

EJEMPLO 5

Crioconservación de muestras de espermatozoides de cerdo sexados

Luego de producir la muestra de espermatozoides de cerdo sexados, la muestra de espermatozoides puede crioconservarse opcionalmente para transporte o almacenamiento para uso en un momento posterior. El siguiente método de congelación puede utilizarse con la invención, pero solo se presenta a modo de ejemplo, se puede utilizar cualquier método de crioconservación conocido en la técnica.

Después de la clasificación, los tubos de 50 mi que contienen los espermatozoides sexados (con 20 millones de células) pueden dividirse en tubos de 15 mi, con aproximadamente 12 mi de una muestra de espermatozoides sexados en cada tubo, conteniendo cada uno aproximadamente 10 millones de espermatozoides sexados. Estos tubos pueden centrifugarse a 3076 g a 21°C durante 4 minutos. El sobrenadante se decanta y el granulado puede permanecer con algo de sobrenadante en aproximadamente 50 μΙ.

A cada granulado se puede agregar a temperatura ambiente un primer medio de congelación que puede comprender una solución de 20% de yema de huevo y 80% de β-Lactosa. A continuación se puede verificar la motilidad de los espermatozoides. Si es aceptable, los tubos se pueden llevar a una máquina de control de temperatura programadle (PolyScience - MiniTube) o pueden manipularse manualmente para reducir la temperatura de alrededor de 21°C a alrededor de 5°C durante un período de alrededor de 2 horas. Después del cambio de temperatura cronometrado,

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INDUSTRIAL M las muestras se pueden colocar en una habitación fría a alrededor de 5°C donde se agrega a las muestras un segundo medio de congelación, que puede comprender yema de huevo, β-Lactosa, Glicerol y Equex Stem, o puede comprender solo un crioconservante tal como glicerol, o el crioconservante con un estabilizador osmótico que se enfría previamente hasta alcanzar 5°C. Después de 10 minutos, las muestras de espermatozoides sexados pueden colocarse en pajillas de inseminación artificial, y luego las pajillas pueden exponerse a vapores de nitrógeno líquido (aproximadamente a 4 cm del nitrógeno líquido) durante un período de tiempo corto (por ejemplo, 10 minutos) y a continuación colocarse directamente en el nitrógeno líquido para conservación a largo plazo.

Cuando las muestras de semen sexado están listas para uso, las pajillas pueden descongelarse mediante descongelación/calentamiento de las pajillas (por ejemplo, colocándolas en baño María fijado a alrededor de 37°C durante alrededor de 15 segundos). A continuación se pueden analizar la motilidad y viabilidad de los espermatozoides posdescongelación a 30, 90 y/o 150 minutos para comparaciones estándar.

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EJEMPLO 6

Sincronización de estro

La invención contempla que con fines de conveniencia, el estro se puede sincronizar y/o se puede inducir la ovulación programada en una o más cerdas que serán inseminadas. Además, debido a que el esperma sexado a menudo está precapacitado, es importante inseminar a una cerda aproximadamente en las siguientes 6 horas después de la ovulación. El estro sincronizado o la ovulación programada ayuda a asegurar que esto será así. En general, esto implica administrar una o más hormonas o análogos de hormona a la cerda(s) que se inseminará. Existen diversas formas de inducir el estro/la ovulación programada en cerdas primerizas, las cuales se describen a continuación.

La una o más hormonas o análogos de hormona pueden administrarse a la cerda a efectos de establecer una sincronización del estro así como el momento de la ovulación. Estas hormonas y análogos de hormona típicamente incluyen, por ejemplo, PG600, OvuGel, eCG, hCG y/o progestina, y pueden administrarse manualmente con inyecciones programadas o con la ayuda de un dispositivo programadle colocado en el tracto reproductivo de la cerda. El dispositivo programadle contemplado en la presente liderar una o más hormonas o análogos de hormona de forma progresiva sin que el reproductor tenga que monitorear el dispositivo ni proporcionar ninguna entrada excepto la programación de los parámetros iniciales para la liberación de dicha una o más hormonas o análogos de hormona. Cualquiera de los siguientes métodos para inducir y/o sincronizar el estro conocidos en la técnica pueden utilizarse en general con la invención, incluidos los siguientes.

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MX/a/2018/010569 (a) Estro inducido por transporte v cerdo. Las cerdas primerizas típicamente alcanzan la pubertad aproximadamente a los 180-210 días de edad. Sin embargo, sobre el proceso de alcanzar naturalmente la pubertad influyen muchos factores intrínsecos y extrínsecos, tales como el genotipo, el ambiente y el contacto con cerdos. Muchos reproductores y granjeros indican que el primer estro se observa comúnmente cuando las cerdas primerizas tienen seis meses de edad. El inicio del estro a menudo coincide con la reubicación o transporte de los animales desde el multiplicador de cerdas primerizas hasta la granja comercial. Sin dudas, el factor de estrés más conocido en cerdos es el transporte. Si la edad de las cerdas primerizas al momento del transporte es cercana al inicio normal de la pubertad, aproximadamente 25-35% de las cerdas primerizas presentará el estro en la semana siguiente al transporte. Este estro inducido por transporte puede servir para sincronizar una porción de las cerdas primerizas.

Aunque el transporte puede inducir el estro, es evidente que el contacto con cerdos es una forma potente de estimular la pubertad. El principal factor que rige la eficacia del contacto con cerdos como estímulo para la pubertad es la edad de la cerda primeriza al momento del acercamiento al cerdo. Cuando el contacto con el cerdo se inicia cuando las cerdas primerizas tienen 4 meses de edad, la respuesta puberal es mínima. Se sugirió que la cerda primeriza joven puede habituarse con el estímulo del cerdo en una etapa del desarrollo en la que es demasiado joven para responder. Por el contrario, cuando el acercamiento al cerdo se retrasa hasta el período más cercano a la pubertad (6 meses de edad o más), la respuesta vuelve a ser limitada por un motivo distinto. En virtud de las edades relativamente avanzadas, es decir, 6 meses, de las cerdas primerizas en el momento del acercamiento, las edades puberales reales de estas cerdas primerizas no se reducen demasiado con respecto a la de los animales no estimulados. Cuando el acercamiento al cerdo se produce con cerdas en las edades cercanas a los 160 días, se minimizar el intervalo con respecto al primer contacto con el cerdo hasta la pubertad y la edad de la cerda primeriza al alcanzar la pubertad, mientras se maximiza la sincronización de la aparición del estro puberal.

(b) Proqestinas orales y con liberación lenta. Este abordaje para la sincronización del estro utiliza la supresión de la actividad ovárica a través de la administración de progesterona o progestinas sintéticas administradas oralmente. Algunas progestinas pueden obtenerse en formas inyectables de liberación lenta, tales como altrenogest (véase más adelante). Alimentar a las cerdas primerizas cíclicas individualmente o en grupos a una tasa de 15-30 mg de

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INDUSTRIAL M altrenogest/cerdo/día durante 14 a 18 días consecutivos produce un inicio sincronizado del estro entre 2 y 8 días después de la última alimentación con progestina.

(c) Gonadotropinas. eCG/hCG (PG600R) En la actualidad, la combinación hormonal exógena más común para la inducción del crecimiento folicular y la ovulación en hembras acíclicas es una combinación de eCG, anteriormente denominada gonadotropina sérica de yegua preñada (PMSG) y gonadotropina coriónica humana (hCG). El producto PG600R contiene 400 UI de PMSG y 200 UI de hCG. Esta hormona puede adquirirse como un fármaco combinado y es rentable para la inducción del estro y la ovulación en cerdas acíclicas. Las cerdas primerizas generalmente presentan estro 3-6 días después del tratamiento y el tiempo de ovulación es de aproximadamente 110-120 horas. La tasa de respuesta se potencia si las cerdas primerizas tienen contacto diario con cerdos, comenzando en el momento del tratamiento. PG600 comprende gonadotropina sérica de yegua preñada, conocida también como gonadotropina coriónica equina (PMSG o eCG) y gonadotropina coriónica humana (hCG) (Intervet). OvuGel es otra gonadotropina (acetato de triptorelina) disponible en el mercado en una fórmula de liberación lenta que puede administrarse a través de un sistema de administración intravaginal (Gel Med Sciences, Inc.).

(d) Prostaqlandinas. PGF2 alfa es eficaz para inducir la luteólisis, el aborto y un retorno rápido al estro en cerdas primerizas preñadas (y pseudopreñadas) más allá de la segunda semana de preñez. Un método para la sincronización es unir a las cerdas primerizas durante tres semanas y luego, tratarlas con PGF2 alfa dos semanas después.

(e) Hormonas de liberación lenta. Otro método implica la inyección directa de una preparación disponible en el mercado, tal como altrenogest o regumate, en un punto de tiempo específico en el ciclo de estro. Por ejemplo, en una modalidad de la invención, la sincronización y la ovulación programada se logra administrado el día 11-14 de un ciclo de estro de la cerda primeriza, 15-30 mg de altrenogest/día durante 4 a 7 días. 24 horas después de suspender la administración de altrenogest, se pueden administrar 400 a 2000 UI de PMSG y luego 500 a 1000 UI de hCG, 72 a 83 horas después.

EJEMPLO 7

Detección de la ovulación

La detección de la ovulación en una cerda puede hacerse a través del examen de los folículos de la cerda. La comprensión de la importancia de establecer una reserva de esperma

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INDUSTRIAL M adecuada en el oviducto en un momento apropiado con respecto a la ovulación es fundamental para la gestión de la inseminación artificial en porcinos. Específicamente, el conocimiento de cuándo es probable que ovule una cerda durante el estro es altamente beneficioso para logra una inseminación exitosa. Con este fin, en una modalidad específica de la invención, se examinan los folículos de una cerda utilizando ecografía después de la inducción del estro. En una modalidad específica de la invención, los ovarios de cerda se examinan mediante ecografía transrectal cada 4 horas comenzando 30 horas después de la inyección de hCG para determinar la presencia de folículos preovulatorios. Las cerdas que exhiben múltiples folículos preovulatorios (diámetro de antro>6 mm) se seleccionan para inseminación 2-3 horas después de la ecografía.

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EJEMPLO 8 Inseminación utilizando laparoscopia o catéter intrauterino profundo

Luego de preparar la muestra de semen de cerdo sexado, la muestra puede utilizarse para inseminar una cerda. Cualquier técnica de inseminación artificial convencional puede utilizarse en la invención, incluida inseminación intracervical. Sin embargo, los catéteres intrauterinos profundos y la laparoscopia son específicamente relevantes en porcinos, ya que permiten el uso de una dosis reducida de espermatozoides para una fertilización exitosa, en parte debido a que son capaces de colocar a los espermatozoides en áreas clave del tracto reproductivo de la cerda, incluidos, a modo no taxativo, los cuernos uterinos, los oviductos, la ampolla, el istmo y la unión útero-tubárica. El uso de dosis reducidas de espermatozoides permite el uso de una cantidad mucho menor de cerdos genéticamente superiores con fines de reproducción, lo cual tiene el beneficio de reducir costos para los reproductores y reducir el daño ambiental que resulta de tener que mantener a una gran cantidad de cerdos.

(a) Inseminación utilizando catéter intrauterino profundo. El uso de un catéter intrauterino profundo permite colocar espermatozoides en los cuernos uterinos de la cerda y de forma ideal en la unión útero-tubárica. El uso y fabricación de dicho catéter intrauterino profundo se divulga en la Patente estadounidense número 6,695,767, cuya divulgación se incorpora a la presente por referencia en su totalidad. Dicho catéter intrauterino profundo puede comprender opcionalmente una cámara de video o endoscopio para permitir que el operador vea el trayecto del catéter, a fin de que se pueda elegir entre colocar los espermatozoides en uno o ambos cuernos uterinos. De forma alternativa, la ubicación del catéter intrauterino profundo puede visualizarse dentro del tracto reproductivo de una cerda cuando se utiliza conjuntamente con un dispositivo radiográfico o fluoroscópico. Debido a su longitud, el catéter intrauterino profundo permite que el operador alcance regiones distales del tracto reproductivo de una cerda, incluidos los cuernos uterinos, regiones que serían inalcanzables utilizando un catéter estándar utilizado para la inseminación artificial. En una modalidad de la invención, la longitud del catéter intrauterino profundo es de 1.8 m, 1-2 m, 1-2.5 m,

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MX/a/2018/010569 l-3m, 2-3m, 2-3,5m o 2.5-3m.

El catéter intrauterino profundo puede introducirse dentro del conducto cervical de una cerda en estro que puede estar superovulada pero también puede estar en su ciclo natural o inducido de otra forma. Se puede aplicar un líquido lubricante no tóxico sobre el catéter para facilitar su pasaje a través de la vagina. El catéter puede comprender un tubo o funda externo y una sonda flexible dentro del tubo o funda externo. En una modalidad de la invención, una vez que el catéter ha avanzado por el conducto cervical, la sonda flexible puede avanzar adicionalmente dentro del tubo externo del catéter. Se puede hacer avanzar la sonda flexible hasta alcanzar la porción anterior de un cuerno uterino. Cuando se hace avanzar la sonda flexible dentro del cuerno uterino, se puede doblar y, por consiguiente, continuar por el trayecto retorcido del cuerno uterino. Aunque no es absolutamente necesario, la Introducción de pequeños volúmenes de líquido a través del tubo externo del catéter puede facilitar el avance de la sonda flexible en su pasaje a través del conducto cervical y su avance a través del cuerno uterino. Luego de introducir la sonda flexible hasta su posición final dentro del cuerno uterino, se puede introducir una muestra de espermatozoides contenida en una jeringa que está conectada al extremo proximal de la sonda flexible, a través de un conducto flexible dentro de la sonda flexible, en el ambiente uterino. A fin de evitar pérdidas de espermatozoides y de asegurar que la muestra de espermatozoides ha salido en su totalidad del conducto flexible, posteriormente se puede introducir un pequeño volumen de líquido a través del conducto flexible. A continuación, se puede retirar el catéter que comprende el tubo externo y la sonda flexible. En otro aspecto de la invención, este proceso también puede utilizarse para transferir embriones a un cuerno uterino o para retirar embriones de un cuerno uterino.

(b) Inseminación utilizando laparoscopia. El uso de laparoscopia para ¡nsemlnar a una cerda tiene la ventaja de colocar espermatozoides dentro del tracto reproductivo de una cerda de forma aún más precisa que con el uso de un catéter, permitiendo así el uso adicional de dosis reducidas de espermatozoides para la inseminación. Las áreas específicas del útero a las que pueden dirigirse son el oviducto, el istmo, la ampolla o la unión útero-tubárica. A modo de ejemplo no taxativo, el siguiente procedimiento puede utilizarse con la invención para ¡nsemlnar a una cerda a través de laparoscopia.

Por ejemplo, se puede dividir un tubo de 50 mi que contiene 24 mi de una muestra de espermatozoides sexados que tiene alrededor de 1 x 106 espermatozoides por mi en 2 tubos de 15 mi y centrifugar a alrededor de 3076 g a una temperatura en el rango de alrededor de 21°C durante varios minutos (2-5 o 4 minutos). Se puede volver a centrifugar el sobrenadante en las mismas condiciones si es necesario. Los granulados de semen resultantes a continuación se mezclan

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ω σ> σ>

INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL y la concentración se verifica (a través de NucleoCounter). La muestra de espermatozoides sexados concentrados, a continuación, se diluye con BTS hasta una concentración final de 10 x 106 células/ml y se verifican la motilidad y la viabilidad de los espermatozoides. (La muestra de espermatozoides debe mantenerse a temperatura ambiente (21°C) durante todo el proceso).

Las cerdas se pueden agrupar o separar, por ejemplo, se pueden colocar individualmente en casillas en una instalación de confinamiento ventilada mecánicamente. Las cerdas

MX/a/2018/010569 (2-6 partos) se destetan alrededor de los 21 días. A continuación, se puede inducir el estro inyectando a cada hembra por vía intramuscular alrededor 1250 UI de gonadotrofina coriónica equina (eCG; Folligon, Intervet International B.V., Boxmeer, Países Bajos - o un compuesto equivalente) 24 horas después del destete; luego de 72 horas, se tratan con alrededor de 750 UI de gonadotrofina coriónica humana (hCG; VeterinCorion, Divasa, Farmavic S.A., Barcelona, España) o un equivalente. La detección del estro se lleva a cabo una vez al día (por ejemplo, a las 7:00 a.m.), comenzando 2 días después de la inyección de eCG. Una forma de detectar el estro es permitir que las hembras tengan contacto hocico con hocico con un cerdo maduro y aplicando contrapresión, para identificar a las cerdas que exhiben un reflejo de inmovilidad, la cuales se consideran en estro; en dicho momento se pueden escanear los ovarios. Los ovarios se pueden examinar a intervalos periódicos (por ejemplo, cada 4 horas) para folículos maduros iniciando alrededor de 30 horas después de la inyección de hCG mediante ultrasonografía transrectal utilizando un transductor de barridos en múltiples ángulos de 5 MHz, para buscar la presencia de folículos preovulatorios. Solo las cerdas que exhiben múltiples folículos preovulatorios (diámetro de antro>6 mm) se seleccionan para inseminación. Las inseminaciones se llevan a cabo en las 2-3 h siguientes a la ultrasonografía.

Las inseminaciones laparoscópicas luego pueden llevarse a cabo en estas cerdas luego de sedarlas (que puede lograrse mediante la administración de azaperona; Stresnil; 2 mg/kg de peso corporal, i.m.). También se puede inducir una anestesia general con un compuesto tal como tiopental sódico (Abbot; 7 mg/ kg de peso corporal, i.v.) y mantenerse con halotano (3.5-5%) o un compuesto similar. Para la cirugía, se puede colocar a la cerda en posición supina, y si hay disponibilidad, de espaldas sobre una mesa para laparoscopia. Si se utiliza una mesa, se coloca en posición de Trendelenburg (cuartos traseros hacia arriba, con la cabeza apuntando hacia abajo) en un ángulo de aproximadamente 20° sobre el horizontal.

En una modalidad, se hace una incisión (de alrededor de 1.5 cm) cerca del ombligo. A continuación, los bordes de la incisión se pueden tirar hacia arriba con contratiro y un trocar de 12 mm Optiview (Ethicon Endo-surgery Cincinnati OH, EE. UU.) haciendo avanzar una laparoscopio insertado a 0o por la herida. En el ombligo, se atraviesan el tejido adiposo subcutáneo, la fascia anterior de los músculos del recto, los músculos del recto, la fascia posterior de los músculos del recto, la fascia temporal y el peritoneo mediante cortes ligeros y presión moderada. El proceso se

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INDUSTRIAL M controla a través de retroalimentación por monitor. Aunque la tubería de CO2 está conectada al trocar, el inflado no comienza hasta que se perfora el peritoneo. Luego de ingresar a la cavidad peritoneal e iniciar el pneumoperitoneo, se retira la pieza manual del Optiview y se reemplaza por el laparoscopio a 0o. La cavidad abdominal se infla hasta alcanzar 14 mmHg con CO2. Se colocan dos puertos accesorios en la parte derecha e izquierda del hemiabdomen, que proporcionan acceso al fórceps Duval laparoscópico para manipular el cuerno uterino y sujetar el oviducto para la ajuga de inseminación, respectivamente. El oviducto se sujeta con el fórceps Duval en la región del istmo. A continuación se inserta el flujo de dosis (que contiene 0.3-0.5 millones de espermatozoides en 0.1 mi) y los espermatozoides sexados se descargan hacia el oviducto. Luego, el procedimiento se repite en el otro oviducto. Después de inseminar los dos oviductos, se retiran los trocares y se suturan las heridas de la incisión.

Los expertos en la técnica reconocerán que la invención descrita anteriormente incluye muchas modalidades inventivas, incluidas al menos las siguientes:

A. Un método para aumentar el mérito genético en porcinos que comprende las etapas de:

establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea;

determinar un porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o un porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, que resultaría, con respecto a un control, en un aumento del mérito genético en la línea;

clasificar una muestra de espermatozoides de un cerdo en uno de los subtipos de apareamiento en una o más subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 60% de los espermatozoides en una subpoblación de espermatozoides tiene cromosomas X o cromosomas Y; e inseminar una o más cerdas en uno de los subtipos de apareamiento con la subpoblación de espermatozoides para lograr el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético con respecto a un control.

Al. El método de A, donde el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético, no aumenta la endogamia en la línea con respecto al control.

A2. El método de A o Al, donde la línea comprende una línea paterna o línea materna.

A3. El método de cualquiera de A hasta A2, donde en el control,

MX/a/2018/010569 aproximadamente 50% de la progenie son machos.

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A4. El método de cualquiera de A hasta A3, donde en el control, todas las cerdas para aparear se inseminan con muestras de semen no clasificado.

A5. El método de cualquiera de A hasta A4, donde una categoría de cerdos en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o la edad.

A6. El método de cualquiera de A hasta A5, donde una categoría de cerdas en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o cantidad de partos.

A7. El método de cualquiera de A hasta A6, donde el porcentaje de espermatozoides en la subpoblación de espermatozoides que tiene los cromosomas X o los cromosomas Y se selecciona del grupo que consiste en al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%,

MX/a/2018/010569 al menos 98%, al menos 99% y al menos 100%.

A8. El método de cualquiera de A hasta A7, donde la línea comprende una línea paterna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 10 y 35%.

A9. El método de A8, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 15 y 30%.

A10. El método de cualquiera de A hasta A7, donde la línea comprende una línea materna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 5 y 30%.

All. El método de A10, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 10 y 25%.

A12. El método de cualquiera de A hasta A7, donde el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento se encuentra entre aproximadamente 0 y 10% o entre aproximadamente 90 y 100% y cualquier progenie producida es miembro de un núcleo hija o de un multiplicador.

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A13. El método de cualquiera de A hasta A12, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo o solo una cerda de la línea.

A14. El método de cualquiera de A hasta A13, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo y solo una cerda de la línea.

A15. El método de cualquiera de A hasta A14, donde los porcentajes determinados se determinan utilizando un método estocástico o uno determinativo.

A16. El método de cualquiera de A hasta A15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea materna.

A17. El método de cualquiera de A hasta A15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea paterna.

A18. El método de cualquiera de A hasta A15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de un índice de selección.

A19. El método de cualquiera de A hasta A15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de EBV.

A20. El método de A18, donde el índice de selección es una función de los datos derivados de un grupo que comprende el macho o la hembra.

A21. El método de A16, donde los rasgos comprenden fertilidad, tamaño de camada y producción de leche.

A22. El método de A17, donde los rasgos comprenden eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal.

A23. El método de cualquiera de A hasta A22, donde inseminar dichas una o más cerdas comprende administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de dichas una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo o una aguja insertada a través de la membrana de una o más cerdas.

A24. El método de A23, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo comprende colocar dichos espermatozoides en uno o más cuernos uterinos.

A25. El método de A23 o A24, donde dicho catéter intrauterino profundo comprende una cámara de video o endoscopio.

A26. El método de cualquiera de A23 a A25, que comprende además la etapa de visualizar el catéter intrauterino profundo a través de radiografía o fluoroscopia mientras se inserta

MX/a/2018/010569 en el tracto reproductivo de dicha cerda.

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A27. El método de cualquiera de A hasta A26, donde la subpoblación comprende 1 x 109 o menos espermatozoides.

A28. El método de A23, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando una aguja insertada a través de una membrana de dichas una o más cerdas comprende inyectar la subpoblación en uno o más oviductos de dichas una o más cerdas.

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A29. El método de A28, que comprende además la etapa de visualizar la inserción de dicha aguja en dichos uno o más oviductos a través de un laparoscopio o cámara de video.

A30. El método de cualquiera de A hasta A23 y A28 a A29, donde la subpoblación comprende 1 x 106 o menos espermatozoides.

A31. El método de cualquiera de A hasta A30 que comprende además la etapa de sincronizar el estro o inducir la ovulación programada en dichas una o más cerdas mediante la administración de una o más hormonas o análogos de hormona a dichas una o más cerdas.

A32. El método de A31, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona comprenden PG600, OvuGel, eCG, progestina, hCG, altrenogest o regumate.

A33. El método de A31 o A32, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona se administran mediante un dispositivo programable colocado en el tracto reproductivo de dichas una o más cerdas.

A34. El método de cualquiera de A hasta A33, que comprende además la etapa de detectar la ovulación en dichas una o más cerdas mediante el examen de uno o más folículos de dichas una o más cerdas.

A35. El método de A34, donde dichos uno o más folículos se examinan utilizando ecografía.

A36. El método de cualquiera de A hasta A35, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores en función de una medición fenotípica.

A37. El método de cualquiera de A hasta A35, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores para la línea en función del genotipo.

A38. El método de cualquiera de A hasta A35, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores utilizando selección asistida por mutación.

A39. El método de cualquiera de A hasta A35, donde el mérito genético se basa en una medición fenotípica.

A40. El método de cualquiera de A hasta A35, donde el mérito genético se basa en el genotipo.

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A41. El método de cualquiera de A hasta A40, donde el cerdo o dichas una o más cerdas son miembros de un núcleo genético, un núcleo hija o un multiplicador.

A42. El método de cualquiera de A hasta A40, donde el cerdo o dichas una o más cerdas son miembros de un núcleo genético.

A43. El método de cualquiera de A hasta A42, donde la etapa de establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de un programa de reproducción.

A44. El método de cualquiera de A hasta A42, donde la etapa de establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de la creación de un plan de apareamiento para la línea.

A45. El método de cualquiera de A hasta A44, donde cada uno de los subtipos de apareamiento para la línea consta de un subgrupo de machos o un subgrupo de hembras.

A46. El método de A45, donde el subgrupo de machos o el subgrupo de hembras se define o basa en uno o más criterios que comprenden función en la pirámide de producción, cantidad de partos, edad, mérito genético, marcadores genéticos o mutaciones genéticas.

B. Un método para aumentar el mérito genético en porcinos que comprende las etapas de:

establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea; y determinar un porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o un porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, que resultaría, con respecto a un control, en un aumento del mérito genético en la línea.

Bl. El método de B, donde el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético, no aumenta la endogamia en la línea con respecto al control.

B2. El método de B o Bl, donde la línea comprende una línea paterna o línea materna.

B3. El método de cualquiera de B a B2, donde en el control, aproximadamente 50% de la progenie son machos.

B4. El método de cualquiera de B a B3, donde en el control, todas las cerdas para aparear se inseminan con muestras de semen no clasificado.

B5. El método de cualquier de B a B4, donde una categoría de cerdos en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o la edad.

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B6. El método de cualquier de B a B5, donde una categoría de cerdas en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o cantidad de partos.

B7. El método de cualquiera de B a B6, donde al menos 80% de los espermatozoides en la primera subpoblación tienen cromosomas X o donde al menos 80% de los espermatozoides en la primera subpoblación tienen cromosomas Y.

B8. El método de cualquier de B a B7, donde la línea comprende una línea paterna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 10 y 35%.

B9. El método de B8, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 15 y 30%.

B10. El método de cualquier de B a B7, donde la línea comprende una línea materna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 5 y 30%.

BU. El método de B10, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 10 y 25%.

B12. El método de cualquiera de B a B7, donde el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento se encuentra entre aproximadamente 0 y 10% o entre aproximadamente 90 y 100% y cualquier progenie producida es miembro de un núcleo hija o de un multiplicador.

B13. El método de cualquiera de B a B12, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo o solo una cerda de la línea.

B14. El método de cualquiera de B a B13, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo y solo una cerda de la línea.

B15. El método de cualquiera de B a B14, donde los porcentajes determinados se

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macho o

DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL M macho o macho o macho o

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B16. El método de cualquiera de B a B15, donde el mérito genético de un de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea materna.

B17. El método de cualquiera de B a B15, donde el mérito genético de un de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea paterna.

B18. El método de cualquiera de B a B15, donde el mérito genético de un de una hembra es una función de un índice de selección.

B19. El método de cualquiera de B a B15, donde el mérito genético de un de una hembra es una función de EBV.

B20. El método de B18, donde el índice de selección es una función de los datos derivados de un grupo que comprende el macho o la hembra.

B21. El método de B16, donde los rasgos comprenden fertilidad, tamaño de camada y producción de leche.

B22. El método de B17, donde los rasgos comprenden eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal.

C. Un método para aumentar el mérito genético en una línea paterna que comprende las etapas de:

clasificar una o más muestras de espermatozoides de uno o más cerdos en la línea paterna en una o más subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 70% de los espermatozoides en una subpoblación de espermatozoides tiene cromosomas X o cromosomas Y; e inseminar una o más cerdas en la línea paterna con la subpoblación para lograr un porcentaje de progenie que son machos para la línea paterna que está entre aproximadamente 10 y 35%.

Cl. El método de C, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea paterna está entre aproximadamente 15 y 30%.

C2. El método de cualquiera de C o Cl, donde inseminar dichas una o más cerdas comprende administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de dichas una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo o una aguja insertada a través de la membrana de una o más cerdas.

C3. El método de C2, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo comprende colocar dichos espermatozoides en uno o más cuernos uterinos.

C4. El método de C2 o C3, donde dicho catéter intrauterino profundo comprende una cámara de video o endoscopio.

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C5. El método de cualquiera de C2 a C4, que comprende además la etapa de visualizar el catéter intrauterino profundo a través de radiografía o fluoroscopia mientras se inserta en el tracto reproductivo de dicha cerda.

C6. El método de cualquiera de C a C5, donde la subpoblación comprende 1 x 109 o menos espermatozoides.

C7. El método de C2 o C6, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando una aguja insertada a través de una membrana de dichas una o más cerdas comprende inyectar la subpoblación en uno o más oviductos de dichas una o más cerdas.

C8. El método de C7, que comprende además la etapa de visualizar la inserción de dicha aguja en dichos uno o más oviductos a través de un laparoscopio o cámara de video.

C9. El método de cualquiera de C a C8, donde la subpoblación comprende 1 x 106 o menos espermatozoides.

CIO. El método de cualquiera de C a C9 que comprende además la etapa de sincronizar el estro o inducir la ovulación programada en dichas una o más cerdas mediante la administración de una o más hormonas o análogos de hormona a dichas una o más cerdas.

CU. El método de CIO, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona comprenden PG600, OvuGel, eCG, progestina, hCG, altrenogest o regumate.

C12. El método de CIO o Cll, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona se administran mediante un dispositivo programable colocado en el tracto reproductivo de dichas una o más cerdas.

C13. El método de cualquiera de C a C12, que comprende además la etapa de detectar la ovulación en dichas una o más cerdas mediante el examen de uno o más folículos de dichas una o más cerdas.

C14. El método de C13, donde dichos uno o más folículos se examinan utilizando ecografía.

D. Un método para aumentar el mérito genético en una línea materna que comprende las etapas de:

clasificar una o más muestras de espermatozoides de uno o más cerdos en la línea materna en una o más subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 70% de los espermatozoides en una subpoblación de espermatozoides tiene cromosomas X o cromosomas Y; e inseminar una o más cerdas en la línea materna con la subpoblación para lograr un porcentaje de progenie que son machos para la línea paterna que está entre aproximadamente 5 y

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30%.

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DI. El método de D, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea materna está entre aproximadamente 10 y 25%.

D2. El método de cualquiera de D o DI, donde inseminar dichas una o más cerdas comprende administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de dichas una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo o una aguja insertada a través de la membrana de una o más cerdas.

D3. El método de D2, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando un catéter intrauterino profundo comprende colocar dichos espermatozoides en uno o más cuernos uterinos.

D4. El método de D2 o D3, donde dicho catéter intrauterino profundo comprende una cámara de video o endoscopio.

D5. El método de cualquiera de D2 a D4, que comprende además la etapa de visualizar el catéter intrauterino profundo a través de radiografía o fluoroscopia mientras se inserta

MX/a/2018/010569 en el tracto reproductivo de dicha cerda.

D6. El método de cualquiera de D a D5, donde la subpoblación comprende 1 x 109 o menos espermatozoides.

D7. El método de D2 o D6, donde administrar la subpoblación a un tracto reproductivo de una o más cerdas utilizando una aguja insertada a través de una membrana de dichas una o más cerdas comprende inyectar la subpoblación en uno o más oviductos de dichas una o más cerdas.

D8. El método de D7, que comprende además la etapa de visualizar la inserción de dicha aguja en dichos uno o más oviductos a través de un laparoscopio o cámara de video.

D9. El método de cualquiera de D a D8, donde la subpoblación comprende 1 x 106 o menos espermatozoides.

DIO. El método de cualquiera de D a D9 que comprende además la etapa de sincronizar el estro o inducir la ovulación programada en dichas una o más cerdas mediante la administración de una o más hormonas o análogos de hormona a dichas una o más cerdas.

Dll. El método de DIO, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona comprenden PG600, OvuGel, eCG, progestina, hCG, altrenogest o regumate.

D12. El método de DIO o Dll, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona se administran mediante un dispositivo programable colocado en el tracto reproductivo de dichas una o más cerdas.

D13. El método de cualquiera de D a D12, que comprende además la etapa de detectar la ovulación en dichas una o más cerdas mediante el examen de uno o más folículos de dichas una o más cerdas.

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ω σ> σ>

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D14. El método de D13, donde dichos uno o más folículos se examinan utilizando ecografía.

E. Un método para aumentar el mérito genético en porcinos que comprende crear un plan de apareamiento para una línea de porcinos para aumentar el mérito genético en la línea con respecto a un control, al establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para la línea y determinar un porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o un porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, que resultaría, con respecto al control, en un aumento del mérito genético en la línea.

El. El método de E, donde el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético, no aumenta la endogamia en la línea con respecto al control.

E2. El método de E o El, donde la línea comprende una línea paterna o línea materna.

E3. El método de cualquiera de E a E2, donde en el control, aproximadamente 50% de la progenie son machos.

E4. El método de cualquiera de E a E3, donde en el control, todas las cerdas para aparear se inseminan con muestras de semen no clasificado.

E5. El método de cualquier de E a E4, donde una categoría de cerdos en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o la edad.

E6. El método de cualquier de E a E5, donde una categoría de cerdas en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o cantidad de partos.

E7. El método de cualquiera de E a E6, donde al menos 80% de los espermatozoides en la primera subpoblación tienen cromosomas X o donde al menos 80% de los espermatozoides en la primera subpoblación tienen cromosomas Y.

E8. El método de cualquier de E a E7, donde la línea comprende una línea paterna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 10 y 35%.

E9. El método de E8, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 15 y 30%.

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E10. El método de cualquier de E a E7, donde la línea comprende una línea materna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 5 y 30%.

Eli. El método de E10, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 10 y 25%.

E12. El método de cualquiera de E a E7, donde el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento se encuentra entre aproximadamente 0 y 10% o entre aproximadamente 90 y 100% y cualquier progenie producida es miembro de un núcleo hija o de un multiplicador.

E13. El método de cualquiera de E a E12, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo o solo una cerda de la línea.

E14. El método de cualquiera de E a E13, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo o solo una cerda de la línea.

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E15. El método de cualquiera de E a E14, donde los porcentajes determinados se determinan utilizando un método estocástico o uno determinativo.

E16. El método de cualquiera de E a E15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea materna.

E17. El método de cualquiera de E a E15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea paterna.

E18. El método de cualquiera de E a E15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de un índice de selección.

E19. El método de cualquiera de E a E15, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de EBV.

E20. El método de E18, donde el índice de selección es una función de los datos derivados de un grupo que comprende el macho o la hembra.

E21. El método de E16, donde los rasgos comprenden fertilidad, tamaño de camada y producción de leche.

E22. El método de E17, donde los rasgos comprenden eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal.

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Ε23. El método de cualquiera de E a E22, donde la línea pertenece a un núcleo genético, un núcleo hija o un multiplicador.

E24. El método de cualquiera de E a E22, donde la línea pertenece a un núcleo genético.

E25. El método de cualquiera de E a E24, donde la etapa de establecer una ω

σ> σ>

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MX/a/2018/010569 pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de un programa de reproducción.

E26. El método de cualquiera de E a E24, donde la etapa de establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de la creación de un plan de apareamiento para la línea.

F. Un método para aumentar el mérito genético en porcinos que comprende las etapas de:

establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea;

clasificar una muestra de espermatozoides de un cerdo en uno de los subtipos de apareamiento en una o más subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 60% de los espermatozoides en una subpoblación de espermatozoides tiene cromosomas X o cromosomas Y; y fertilizar uno o más óvulos de una o más cerdas en uno de los subtipos de apareamiento con la subpoblación de espermatozoides para lograr el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético con respecto a un control.

Fl. El método de F, donde la etapa de fertilización se lleva a cabo in vivo.

F2. El método de F, donde la etapa de fertilización se lleva a cabo in vitro.

F3. El método de cualquiera de F a F2, donde el porcentaje de progenie que son machos, o el porcentaje de progenie que son hembras, determinado para aumentar el mérito genético, no aumenta la endogamia en la línea con respecto al control.

F4. El método de F a F3, donde la línea comprende una línea paterna o línea materna.

F5. El método de cualquiera de F a F4, donde en el control, aproximadamente 50% de la progenie son machos.

F6. El método de cualquiera de F a F5, donde en el control, todas las cerdas para aparear se inseminan con muestras de semen no clasificado.

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F7. El método de cualquier de F a F6, donde una categoría de cerdos en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o la edad.

F8. El método de cualquier de F a F7, donde una categoría de cerdas en uno o más de los subtipos de apareamiento se define mediante una o más características, incluido el mérito genético o cantidad de partos.

F9. El método de cualquier de F a F8, donde el porcentaje de espermatozoides en la subpoblación de espermatozoides que tiene los cromosomas X o los cromosomas Y se selecciona del grupo que consiste en al menos 65%, al menos 70%, al menos 75%, al menos 80%, al menos 85%, al menos 90%, al menos 95%, al menos 96%, al menos 97%, al menos 98%, al menos 99% y al menos 100%.

FIO. El método de cualquier de F a F9, donde la línea comprende una línea paterna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente

MX/a/2018/010569 y 35%.

FU. El método de FIO, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 15 y 30%.

F12. El método de cualquier de F a F9, donde la línea comprende una línea materna y el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento, determinado para aumentar el mérito genético de la línea con respecto a un control, resulta en un porcentaje de progenie que son machos para la línea que está entre aproximadamente 5 y 30%.

F13. El método de F12, donde el porcentaje de progenie que son machos para la línea está entre aproximadamente 10 y 25%.

F14. El método de cualquiera de F a F9, donde el porcentaje de progenie que son machos para cada uno de los subtipos de apareamiento, o el porcentaje de progenie que son hembras para cada uno de los subtipos de apareamiento se encuentra entre aproximadamente 0 y 10% o entre aproximadamente 90 y 100% y cualquier progenie producida es miembro de un núcleo hija o de un multiplicador.

F15. El método de cualquiera de F a F14, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo o solo una cerda de la línea.

F16. El método de cualquiera de F a F15, donde cada uno de los subtipos de apareamiento en la pluralidad de subtipos de apareamiento comprende solo un cerdo y solo una cerda de la línea.

F17. El método de cualquiera de F a F16, donde los porcentajes determinados se determinan utilizando un método estocástico o uno determinativo.

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F18. El método de cualquiera de F a F17, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea materna.

F19. El método de cualquiera de F a F17, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de uno o más rasgos de línea paterna.

F20. El método de cualquiera de F a F17, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función de un índice de selección.

F21. El método de cualquiera de F a F17, donde el mérito genético de un macho o de una hembra es una función del EBV.

F22. El método de F20, donde el índice de selección es una función de los datos derivados de un grupo que comprende el macho o la hembra.

F23. El método de F18, donde los rasgos comprenden fertilidad, tamaño de camada y producción de leche.

F24. El método de F19, donde los rasgos comprenden eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal.

F25. El método de cualquiera de F a F24, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores en función de una medición fenotípica.

F26. El método de cualquiera de F a F24, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores para la línea en función del genotipo.

F27. El método de cualquiera de F a F24, que comprende la etapa adicional de seleccionar genitores utilizando selección asistida por mutación.

F28. El método de cualquiera de F a F27, donde el cerdo o dichas una o más cerdas son miembros de un núcleo genético, un núcleo hija o un multiplicador.

F29. El método de cualquiera de F a F27, donde el cerdo o dichas una o más cerdas son miembros de un núcleo genético.

F30. El método de cualquiera de F a F29, donde la etapa de establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de un programa de reproducción.

F31. El método de cualquiera de F a F29, donde la etapa de establecer una pluralidad de subtipos de apareamiento para una línea se lleva a cabo como parte de la creación de un plan de apareamiento para la línea.

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G. Un método para aumentar el progreso genético en una línea o raza de porcinos que comprende las etapas de:

recoger una muestra de semen de un cerdo de dicha línea o raza;

clasificar dicha muestra de semen en al menos dos subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 80% de una primera subpoblación tiene cromosomas X o cromosomas Y;

inseminar a una cerda de dicha línea o raza con espermatozoides de dicha primera subpoblación;

producir crías de dicha cerda; y calcular un índice de selección para una o más de dichas crías;

seleccionar una o más de dichas crías que tienen un índice de selección más alto en comparación con el índice de selección promedio para dicha línea o raza para reproducirla con un porcino de dicha línea o raza con el fin de aumentar el progreso genético de dicha línea o raza.

Gl. El método de G donde dicha línea o raza es una línea de cerdas primerizas y dicha primera subpoblación tiene cromosomas X.

G2. El método de G donde dicha línea o raza es una línea de cerdos y dicha primera subpoblación tiene cromosomas Y.

G3. El método de G, donde el índice de selección para una o más de dichas crías se calcula en función de datos derivados de un grupo que comprende dicha cría.

G4. El método de G, donde dicho índice de selección para una o más de dichas crías comprende medir los rasgos de fertilidad, tamaño de camada y producción de leche.

G5. El método de G, donde dicho índice de selección para una o más de dichas crías comprende medir los rasgos de eficiencia alimentaria, ganancia promedio de peso diaria y carne magra de la canal.

G6. El método de G, donde la etapa de inseminar a una cerda de dicha línea o raza con espermatozoides de dicha primera subpoblación comprende administrar dichos espermatozoides al tracto reproductivo de dicha cerda utilizando un catéter intrauterino profundo u una aguja insertada a través de una membrana de dicha cerda.

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G7. El método de G6, donde administrar dichos espermatozoides al tracto reproductivo de dicha cerda utilizando un catéter intrauterino profundo comprende colocar dichos espermatozoides en uno o más cuernos uterinos.

G8. El método de G7, donde dicho catéter intrauterino profundo comprende una cámara de video o endoscopio.

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G9. El método de cualquiera de G7, que comprende además la etapa de visualizar el catéter intrauterino profundo a través de radiografía o fluoroscopia mientras se inserta en el tracto reproductivo de dicha cerda.

G10. El método de G7, donde la cantidad total de espermatozoides administrados es 1 x 109 o menos espermatozoides.

Gil. El método de G6, donde administrar dichos espermatozoides al tracto reproductivo de dicha cerda utilizando una aguja insertada a través de una membrana de dicha cerda comprende inyectar dichos espermatozoides en uno o más oviductos del útero de dicha cerda.

G12. El método de Gil, que comprende además la etapa de visualizar la inserción de dicha aguja en dichos uno o más oviductos a través de un laparoscopio o cámara de video.

G13. El método de Gil, donde la cantidad total de espermatozoides administrados es 1 x 106 o menos espermatozoides.

G14. El método de cualquiera de G a G13 que comprende además la etapa de sincronizar el estro o inducir la ovulación programada en dicha cerda mediante la administración de una o más hormonas o análogos de hormona a dicha cerda.

G15. El método de G14, donde dichas una o más hormonas o análogos de hormona comprenden PG600, OvuGel, eCG, progestina o hCG.

G16. El método de G14, donde dicha una o más hormonas o análogos de hormona se administra mediante un dispositivo programadle colocado en el tracto reproductivo de dicha cerda.

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G17. El método de G14, que comprende además la etapa de detectar la ovulación en dicha cerda mediante el examen de los folículos de la hembra.

G18. El método de G17, donde dichos folículos se examinan utilizando ecografía.

G19. El método de cualquiera de G a G13 donde dicha cerda es miembro de un hato de núcleo genético o multiplicador.

G20. El método de cualquiera de G a G13 donde dicho cerdo es miembro de un hato de núcleo genético o multiplicador.

H. Un método para aumentar el progreso genético de una línea o raza de porcinos que comprende las etapas de:

recoger una muestra de semen de un cerdo de dicha línea o raza;

clasificar dicha muestra de semen en al menos dos subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 80% de una primera subpoblación tiene cromosomas X o cromosomas Y;

¡nsemlnar a una cerda de dicha línea o raza con espermatozoides de dicha primera subpoblación;

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INDUSTRIAL M producir crías de dicha cerda;

obtener una valor para un rasgo en una o más de dichas crías; y seleccionar una o más de dichas crías que tienen un valor para dicho rasgo que es mayor o menor que el valor promedio para dicho rasgo en dicha línea o raza para reproducirla con un porcino de dicha línea o raza con el fin de aumentar el progreso genético de dicha línea o raza.

Hl. El método de H donde dicha línea o raza es una línea de cerdas primerizas y dicha primera subpoblación tiene cromosomas X.

H2. El método de H donde dicha línea o raza es una línea de cerdos y dicha primera subpoblación tiene cromosomas Y.

I. Un método para aumentar la cantidad de crías de cerdos genéticamente superiores en un hato de porcinos o en una granja de porcinos que comprende:

establecer una subpoblación de uno o más cerdos genéticamente superiores a partir de una población de cerdos en un hato o en una granja;

obtener muestras de espermatozoides del uno o más cerdos genéticamente superiores;

preparar una pluralidad de dosis de espermatozoides a partir de cada una de las muestras de espermatozoides;

administrar una o más hormonas o análogos de hormona a una pluralidad de cerdas en dicho hato o en dicha granja a efectos de inducir la ovulación programada de cada cerda; y inseminar a las cerdas con una o más dosis de espermatozoides utilizando un catéter intrauterino profundo o un procedimiento laparoscópico, donde dichas una o más dosis de espermatozoides administradas a cada cerda juntas comprenden un total de menos de 1 x 109 espermatozoides;

aumentar así la cantidad de crías de cerdos genéticamente superiores en un hato o una granja.

J. Un método para reducir la cantidad de cerdos necesarios para reproducción en un hato de porcinos o en una granja de porcinos que comprende:

establecer una subpoblación de uno o más cerdos genéticamente superiores a partir de una población de cerdos en un hato o en una granja;

obtener muestras de espermatozoides del uno o más cerdos genéticamente superiores;

preparar una pluralidad de dosis de espermatozoides a partir de cada una de las muestras de espermatozoides;

administrar una o más hormonas o análogos de hormona a una pluralidad de cerdas en dicho hato o en dicha granja a efectos de inducir la ovulación programada de cada cerda; y

MX/a/2018/010569 inseminar a las cerdas con una o más dosis de espermatozoides utilizando un catéter intrauterino profundo o un procedimiento laparoscópico, donde dichas una o más dosis de espermatozoides administradas a cada cerda juntas comprenden un total de menos de 1 x 109 espermatozoides;

reducir así la cantidad de cerdos necesarios para reproducción en un hato o en una

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MX/a/2018/010569 granja.

Jl. El método de la reivindicación I o J donde los cerdos genéticamente superiores comprenden cerdos con un índice de selección más alto con respecto a otros cerdos dentro del hato o de la granja.

K. Un método para aumentar la rentabilidad de un hato o granja de porcinos que comprende:

determinar si un cerdo o una cerda resulta en un ingreso neto por cerdo más alto en función de las condiciones del mercado a las que está sometido el hato o granja;

recoger una muestra de semen de un cerdo;

clasificar dicha muestra de semen en al menos dos subpoblaciones de espermatozoides, donde al menos 80% de una primera subpoblación tiene cromosomas X si la cerda resulta en un ingreso neto por cerdo más alto o cromosomas Y si el cerdo resulta en un ingreso neto por cerdo más alto;

inseminar a una cerda con espermatozoides de dicha primera subpoblación; y producir crías de dicha cerda.

Kl. El método de K, donde el cerdo es un cerdo castrado joven.

K2. El método de K, donde la cerda es una cerda primeriza.

K3. El método de K, donde la etapa de determinar si el cerdo o la cerda resulta en un ingreso neto por cerdo más alto en las condiciones del mercado a las que está sometido el hato o granja comprende comparar un rasgo entre porcinos macho y hembra donde el raso se selecciona de cualquiera de los siguientes: conversión alimentaria, peso corporal, ganancia promedio de peso diaria, carne magra de la canal, espesor del lomo, espesor de la grasa dorsal, espesor de la grasa abdominal, índice de carne magra libre de grasa, ganancia de carne magra por día, costo de alimentación por cerdo y valor de yodo de grasa de la mandíbula.

Tal como puede entenderse fácilmente a partir de lo expuesto anteriormente, los conceptos básicos de la presente invención pueden aplicarse de varias formas. La invención incluye numerosas y variadas modalidades que utilizan espermatozoides sexados para aumentar el progreso genético de una línea, incluida, a modo no taxativo, la mejor forma de la invención.

De esta forma, se pretende que las modalidades o elementos específicos de la invención divulgados mediante la descripción o mostrados en las figuras o tablas que acompañan a

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INDUSTRIAL M la presente solicitud no sean limitantes, sino ejemplares de las numerosas y variadas modalidades abarcadas genéricamente por la invención o equivalentes abarcados en relación con cualquier elemento específico de las mismas. Además, la descripción específica de una única modalidad o elemento de la invención puede no describir explícitamente todas las modalidades o elementos posibles; por medio de la descripción y las figuras se divulgan implícitamente muchas alternativas.

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NOVEDAD DE LA INVENCIÓN

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TABLA 2

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EJEMPLOS

EJEMPLO 1

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EJEMPLO 2

TABLA 3

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TABLA 4

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TABLA 5

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EJEMPLO 3

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EJEMPLO 4

INDUSTRIAL M

INDUSTRIAL M

TABLA 6

TABLA 7

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TABLA 8

EJEMPLO 5

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