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MX375115B

Adam6 mice

Abstract

Mice are provided that comprise a reduction or elimination of ADAM6 activity from an endogenous ADAM6 locus, or that lack an endogenous locus that encodes a mouse ADAM6 protein, wherein the mice comprise a sequence that encodes an ADAM6 or ortholog or homolog or fragment thereof, which is functional in a male mouse. In one embodiment, the sequence is an ADAM6 ectopic sequence or a sequence that confers on a male mouse the ability to generate offspring by mating. Also provided are mice and cells with genetically engineered immunoglobulin heavy chain loci, comprising an ectopic nucleotide sequence encoding a mouse ADAM6 or functional or homologous or orthologous fragment thereof.

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    REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:1. Un roedor que ha sufrido de un reordenamiento de la secuencia de gen de inmunoglobulina de modo que comprende una célula B, caracterizado porque incluye en su genoma: una secuencia de región variable de cadena pesada humana reordenada operativamente unida a una secuencia de región constante de cadena pesada de roedor, en donde la secuencia de región variable de cadena pesada humana reordenada comprende un segmento de gen Vh humano, un segmento de gen Dh humano y/o un segmento de gen Jh humano;y (i i) una secuencia de ácido nucleico que codifica una proteína ADAM6 o un ortólogo o un homólogo de la misma sobre el mismo cromosoma como la secuencia de inmunoglobul ina reordenada, en donde la pro tema ADAM6 o un ortólogo o un homólogo de la misma se expresa a partir de la secuencia de ácido nucleico.
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    El roedor de conformidad con la reivindicación caracterizado porque la secuencia de ácido nucleico de ) está operativamente unida a un promotor ADAM6. El roedor de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de ácido nucleico de £ IMPI U1 236 está sobre un transgénico impulsado por un promotor heterólogo. UI El roedor de conformidad con la reivindicación
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    3, caracterizado porque el promotor heterólogo es un promotor que no es inmunoglobulina. roedor de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque la secuencia de región constante de cadena pesada de roedor comprende una secuencia de cadena pesada de roedor seleccionada del grupo que consiste de una ChI, una bisagra, una Ch2, una C h 3 , y una combinación de las mismas. roedor de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque una mayoría de las células B del roedor comprenden en su genoma la secuencia de ácido nucleico de (ii) . El roedor de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque al menos 90 O, “o las células B del roedor comprenden en su genoma la secuencia de ácido nucleico de (ii). Un roedor que ha sufrido de un reordenamiento de la secuencia de gen de inmunoglobulina de modo gue comprende una célula B, caracterizado porque incluye en su genoma:una secuencia de región variable de cadena pesada humana reordenada operativamente unida a una secuencia de región constante de cadena pesada de £ IMPI OI 237 OI roedor, en donde la secuencia de región variable de cadena pesada humana reordenada comprende un segmento de gen Vh humano, un segmento de gen Dh humano y/o un segmento de gen Jh humano;y (i i) una secuencia de ácido nucleico insertada que codifica una proteína ADAM6 un ortólogo o un homólogo de la misma sobre el mismo cromosoma como la secuencia de inmunoglobulina reordenada. 9. El roedor de conformidad con la reivindicación
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    8, caracterizado porque la secuencia de región constante de cadena pesada de roedor seleccionada del grupo que consiste de una ChI , una bisagra, una Ch2 , una Ch3 , y una combinación de las mismas. El roedor de conformidad con la reivindicación 8 ó 9, caracterizado porque la mayoría de las células B del roedor comprenden en su genoma la secuencia de ácido nucleico insertada. Una célula B de roedor, caracterizada porque comprende en su genoma:una secuencia de región variable de cadena pesada humana reordenada operativamente unida a una secuencia de región constante de cadena pesada de roedor sobre el mismo cromosoma como la secuencia de i nmuno globulina reordenada, en donde la secuencia región variable cadena pesada £ IMPI OI 238 OI humana reordenada comprende un segmento de gen V H humano, un segmento de gen Dh humano y/o un segmento de gen Jh humano;y (ii) una secuencia de ácido nucleico que codifica una proteina ADAM6 o un ortólogo o un homólogo de la misma sobre el mismo cromosoma como la secuencia de inmunoglobulina reordenada, en donde la protema ADAN 6 o un ortólogo o un homólogo de la misma se expresa a partir de la secuencia de ácido nucleico.
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    12. Una célula de hibridoma caracterizada porque se genera partir de la célula conformidad con la reivindicación 11.
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    13. Un método para generar un anticuerpo específico contra un antígeno, caracterizado porque comprende las etapas inmunizar un roedor de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 con el antígeno;(b) aislar al menos una célula del roedor que produce un anticuerpo específico contra el antígeno;y cultivar al menos una célula que produce un anticuerpo de la etapa (b) y obtener el anticuerpo.
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    14 . El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el cultivar en la etapa (c) se £ IMPI en 239 efectúa sobre al menos una célula de hibridoma generada en partir de al menos una célula obtenida en la etapa (b).
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    15. Un método para generar un anticuerpo completamente humano específico contra un antígeno, caracterizado porque comprende las etapas de:inmunizar un roedor conformidad con cualquiera de reivindicaciones 1-10 con el antígeno;(b) aislar al menos una célula del roedor que produce un anticuerpo específico contra el antígeno;generar al menos una célula que produce un anticuerpo completamente humano derivado a partir del anticuerpo de la etapa (b) y específico contra el antígeno;y (d) cultivar al menos una célula que produce un anticuerpo de la etapa (c) y obtener el anticuerpo. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el al menos una célula aislada en la etapa (b) es un esplenocito o una célula B.
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    17. El método de conformidad con la reivindicación caracterizado porque el anticuerpo completamente humano es un anticuerpo monoclonal.
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    18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15-17, caracterizado porque inmunizar con el £ σι 240 antígeno de la etapa (a) se lleva a cabo con proteína, ADN, una combinación de ADN y proteina, IMPI INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD INDUSTRIAL σι células que expresan el antígeno.
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    19. Un método para generar un anticuerpo completamente humano específico contra un antígeno, caracterizado porque comprende las etapas de:expresar en una célula mamífero el anticuerpo completamente humano para el cual una más secuencias de región variable se derivan por: inmunizar un roedor de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 con el antígeno;(ii) aislar al menos una célula del roedor que produce un anticuerpo específico contra el antígeno;y (iii) determinar una o más secuencias de región variable del anticuerpo producido;(b) cultivar la célula de mamífero de modo que se produce el anticuerpo completamente humano;y obtener el anticuerpo completamente humano.
Independent claims11