Nova Patents
MX343786B

Differentiation of human embryonic stem cells.

Abstract

La presente invención se refiere a métodos para promover la diferenciación de células madre pluripotenciales en células productoras de insulina. Particularmente, la presente invención proporciona un método para producir células que expresan marcadores característicos del linaje endocrino pancreático que coexpresan NKX6.1 e insulina, y cantidades mínimas de glucagon.

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Expires 16 December 2030.

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14 claims: 2 independent, 12 dependent

  1. 1
    NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1, - Un método para generar una población de células endocrinas pancreáticas que coexpresan NKX6.1 e insulina, el método caracterizado porque comprende las etapas de:a) cultivar células madre pluripotentes humanas;b) diferenciar las células madre pluripotentes humanas de la etapa a) en células del endodermo definitivo al cultivar las células madre pluripotentes humanas en un medio que comprende un agonista del receptor de TGFP;c) diferenciar las células del endodermo definitivo de la etapa b) en células del endodermo pancreático al cultivar las células del endodermo definitivo en presencia de un miembro de la familia de FGF y ácido retinoico;y d) diferenciar las células del endodermo pancreático de la etapa c) en células endocrinas pancreáticas al cultivar las células del endodermo pancreático en un medio suplementado con nogina, un inhibidor de ALK5 y un activador de la proteína quinasa C, en donde las células endocrinas pancreáticas coexpresan NKX6.1 e insulina y en donde menos del 10 % de las células en la población expresan glucagon.
  2. 2
    2, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque el inhibidor de ALK5 en la etapa d) es el inhibidor de ALK5 II.
  3. 3
    3, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque el activador de la proteína quinasa C en la etapa d) es (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(Trifluorometil)fenil)-2,4-pentad¡eno¡lamino) benzolactama.
  4. 4
    4, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque al menos 30 % de las células expresan NKX6.1.
  5. 5
    5, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque al menos 40 % de las células expresan NKX6.1.
  6. 6
    6, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque al menos 50 % de las células expresan NKX6.1.
  7. 7
    7, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque al menos 60 % de las células expresan NKX6.1.
  8. 8
    8, - El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque al menos 5 % de las células expresan insulina.
  9. 9
    9, - Un método para generar una población de células endocrinas pancreáticas que coexpresan NKX6.1 e insulina, el método caracterizado porque comprende las etapas de:a) cultivar células madre pluripotentes humanas;b) diferenciar las células madre pluripotentes humanas de la etapa a) en células del endodermo definitivo al cultivar las células madre pluripotentes humanas en un medio que comprende un agonista del receptor de ΤΰΡβ;c) diferenciar las células del endodermo definitivo de la etapa b) en células del endodermo pancreático al cultivar las células del endodermo definitivo en presencia de un miembro de la familia de FGF y ácido retinoico;y d) diferenciar las células del endodermo pancreático de la etapa c) en IMPI «W»| células endocrinas pancreáticas al cultivar las células del endodermo pancreático en un medio suplementado con nogina, un inhibidor de la señalización del receptor TGF-β y (2S,5S)-(E,E)-8-(5-(4-(Trifluorometil)fen¡l)- 2,4-pentadienoilamino) benzolactama, en donde las células endocrinas 5 pancreáticas coexpresan NKX6.1 e insulina y en donde menos del 10 % de las células en la población expresan glucagon.
  10. 10
    10, - El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque al menos 30 % de las células expresan NKX6.1.
  11. 11
    11, - El método de conformidad con la reivindicación 9, 10 caracterizado además porque al menos 40 % de las células expresan NKX6.1.
  12. 12
    12, - El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque al menos 50 % de las células expresan NKX6.1.
  13. 13
    13, - El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque al menos 60 % de las células expresan NKX6.1.
  14. 14
    15 14,- El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque al menos 5 % de las células expresan insulina.
Independent claims14