MX339262B

Pressure regulated continuously variable volume container for fluid delivery.

Abstract

A fluid handling and delivery system useful in generating a fluid stream (7) in the flow path (8) of microfluidic device (16).

MX339262B, drawing sheet 1
Sheet 1 of 67

Term

Term ended

Expired 2 December 2025, 0.8 years ago.

  1. Priority
  2. Filed
  3. Granted
  4. Expired
  5. Today

16 claims: 16 independent, 0 dependent

  1. 1
    CLAIMS REIVINDICACIONES IM IM 7Γ 7Γ R x x msTL?pn R xx msTL? Pn INDUSTRIAL ---- A flow cytometer comprising:INDUSTRIAL ----Un citómetro de flujo que comprende: a variable volume container that has a flexible wall;un contenedor de volumen variable que tiene una pared flexible;b. an amount of fluid established within said variable volume container;b. una cantidad de fluido establecida dentro de dicho contenedor de volumen variable;c. a gas inlet element that allows to provide a quantity of gas that exerts a pressure in a range of 0.706 kg / cm2 (10 psi) to 14.1kg / cm2 (200 psi) on the outer surface of said flexible wall of said variable volume container to generate a stream of fluid in a conduit fluidically coupled between said variable volume container and a flow path of said flow cytometer;c. un elemento de entrada de gas que permite proporcionar una cantidad de gas que ejerce una presión en un intervalo de 0.706 kg/cm2 (10 psi) a 14.1kg/cm2 (200 psi) sobre la superficie exterior de dicha pared flexible de dicho contenedor de volumen variable para generar una corriente de fluido en una conducto fluídícamente acoplado entre dicho contenedor de volumen variable y una trayectoria de flujo de dicho citómetro de flujo;d. a particle source that intermittently transports a particle in said fluid stream;d. una fuente de partículas que transporta de manera intermitente una partícula en dicha corriente de fluido;and. at least one lighting source that generates at least one incident light beam in said particle contained in said fluid stream for a duration of time;e. al menos una fuente de iluminación que genera al menos un haz de luz incidente en dicha partícula contenida en dicha corriente de fluido por una duración de tiempo;F. an oscillator acting in said fluid stream to generate a plurality of drops in said fluid stream, wherein at least one of said plurality of drops contains said particle;f. un oscilador que actúa en dicha corriente de fluido para generar una pluralidad de gotas en dicha corriente de fluido, en donde al menos una de dicha pluralidad de gotas contiene dicha partícula;-57IMPI @ 53. -57IMPI @53. NíSTrTUTO MEXICANO tVj— ' ! '2 ηΕΙΑΕΕΟΗΕΟΑΙ' i,. . , .INDUSTRIAL _ níSTrTUTO MEXICANO tVj—' ! '2 ηΕΙΑΕΕΟΗΕΟΑΙ' i , . . , , .INDUSTRIAL _ g. al menos un detector Adaptado para recibir una emisión generada por dicha partícula contéΓΪIüaen”dicha gota que varía en base a al menos una característica de partícula. g. at least one detector Adapted to receive an emission generated by said particle conté gotaIüaen ”said drop that varies based on at least one particle characteristic.
  2. 2
    The flow cytometer as described in claim 1, wherein said variable volume container comprises a tubular body having a first end and a second end each hermetically formed. 2. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicho contenedor de volumen variable comprende un cuerpo tubular que tiene un primer extremo y un segundo extremo cada uno formado herméticamente.
  3. 3
    The flow cytometer as described in claim 1, wherein said fluid is selected from the group consisting of a flowable fluid in the flow path of said flow cytometer, a water, a buffer, a coating fluid, a fluid of flow cytometer coating, a liquid reagent, a cleaning solution, and a solvent. 3. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicho fluido se selecciona del grupo que consiste de un fluido fluible en la trayectoria de flujo de dicho citómetro de flujo, un agua, un amortiguador, un fluido de revestimiento, un fluido de revestimiento de citómetro de flujo, un reactivo líquido, una solución de limpieza y un solvente.
  4. 4
    El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicha cantidad de gas se selecciona del grupo que consiste de un gas atmosférico, una mezcla de gases, una mezcla de gases que tienen presiones parciales seleccionadas, un gas purificado, un gas de nitrógeno, un gas helio. Four. The flow cytometer as described in claim 1, wherein said amount of gas is selected from the group consisting of an atmospheric gas, a mixture of gases, a mixture of gases having selected partial pressures, a purified gas, a gas nitrogen, a helium gas.
  5. 5
    Claim 1, group consisting of sperm cell flow cytometer as described in wherein said particle is selected from that of a cell, a sperm cell, a labeled, a stained sperm cell, a sperm cell having a fluorochrome to a 5. El reivindicación 1, grupo que consiste célula espermática citómetro de flujo como se describe en la en donde dicha partícula se selecciona del de una célula, una célula espermáticas, una etiquetada, una célula espermática teñida, una célula espermática que tiene un enlace de fluorocromo a un INSTITUTO MEXICANO DE LA PROPIEDAD c de 'Β«έί MEXICAN INSTITUTE OF PROPERTY c de 'Β «έί ADN nuclear, cromosoma, un fragmento de proteína. Nuclear DNA, chromosome, a fragment of protein. a component obtained from nucleic acid, a protein, UTV AUN;ΟΤΓ "7ΏξϊΦ7 ~ τΠΤ ' un componente obtenido a partí ácido nucleico, una proteína, UTV AUN;ΟΤΓ“7ΏξϊΦ7~τΠΤ' ADN, un fragmento de ARN y un fragmento de DNA, a fragment of RNA and a fragment of
  6. 6
    The flow cytometer as described in claim 1, further comprising a receptacle in which said variable volume container having said flexible wall has a location. 6. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, que comprende además un receptáculo en el cual dicho contenedor de volumen variable que tiene dicha pared flexible tiene una ubicación.
  7. 7
    The flow cytometer as described in claim 6, wherein said amount of gas exerting pressure on said flexible wall of said variable volume container is collected between an inner surface of said receptacle and said outer surface of said flexible wall of said variable volume container. 7. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 6, en donde dicha cantidad de gas que ejerce una presión sobre dicha pared flexible de dicho contenedor de volumen variable se recolecta entre una superficie interior de dicho receptáculo y dicha superficie exterior de dicha pared flexible de dicho contenedor de volumen variable.
  8. 8
    The flow cytometer as described in claim 7, wherein said receptacle comprises a material selected from the group consisting of stainless steel, aluminum, plastic, cardboard and cardboard. 8. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 7, en donde dicho receptáculo comprende un material seleccionado del grupo que consiste de un acero inoxidable, un aluminio, un plástico, un cartón y una cartulina.
  9. 9
    The flow cytometer as described in claim 8, wherein said receptacle comprises a coating fluid tank for said flow cytometer. 9. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 8, en donde dicho receptáculo comprende un tanque de fluido de revestimiento para dicho citómetro de flujo.
  10. 10
    The flow cytometer as described in claim 1, further comprising a nozzle responsive to said oscillator acting with said fluid stream to 10. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, que comprende además una tobera sensible a dicho oscilador que actúa con dicha corriente de fluido para -59IMPI -59IMPI INSTITUTO MEXICANO -|R MEXICAN INSTITUTE - | R DE LA MiOfIBDAD CSto-^áaí >li J INDUSTRIAL generar dicha pluralidad de gotas. OF THE CSO- ^ áaí> li J INDUSTRIAL MiOfIBILITY generate said plurality of drops.
  11. 11
    El citómetro de flujo como aesb'rTB^^STT'-la reivindicación 1, en donde al menos un haz de luz incidente en dicha partícula contenido en dicha gota por una duración de tiempo comprende al menos una haz de láser. eleven. The flow cytometer as aesb'rTB ^^ STT'-claim 1, wherein at least one beam of light incident on said particle contained in said drop for a duration of time comprises at least one laser beam.
  12. 12
    The flow cytometer as described in claim 11, wherein said at least one laser beam comprises a pulsed laser beam. 12. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 11, en donde dicho al menos un haz de láser comprende un haz de láser pulsado.
  13. 13
    The flow cytometer as described in claim 1, wherein said emission generated by said particle that varies based on at least one particle characteristic comprises a fluorescent emission generated by said particle. 13. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicha emisión generada por dicha partícula que varía en base a al menos una característica de partícula comprende una emisión fluorescente generada por dicha partícula.
  14. 14
    The flow cytometer as described in claim 13, wherein said at least one particle characteristic comprises an amount of DNA contained in said particle. 14. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 13, en donde dicha al menos una característica de partícula comprende una cantidad de ADN contenido en dicha partícula. dicha partícula comprende una cantidad de ADN contenido en un said particle comprises a quantity of DNA contained in a -60 sperm bearing the Y chromosome. -60espermatozoide que lleva el cromosoma Y. c c 17. The flow cytometer as claimed in claim 1, wherein said at least one single detector. 17. El citómetro de flujo como reivindicación 1, en donde dicho al menos un un solo detector. IMP IMP INSTITUTO MEXICANO «IA MOEISBAD IMCtSTFIAt se describe en la detector comprende MEXICAN INSTITUTE «IA MOEISBAD IMCtSTFIAt is described in the detector comprises 18. The flow cytometer as described in claim 1, wherein said at least one detector comprises two detectors. 18. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicho al menos un detector comprende dos detectores. 19. The flow cytometer as described in claim 18, wherein said at least two detectors comprise a first photomultiplier tube and a second photomultiplier tube. 19. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 18, en donde dichos al menos dos detectores comprenden un primer tubo fotomultiplicador y un segundo tubo fotomultiplicador. 20. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, que comprende además un generador de señal acoplado a dicho al menos un detector diferencialmente sensible de cada dicha emisión generada por cada dicha partícula. twenty. The flow cytometer as described in claim 1, further comprising a signal generator coupled to said at least one differentially sensitive detector of each said emission generated by each said particle. particle comprises a quantity of DNA contained in said particle. partícula comprende una cantidad de ADN contenida en dicha partícula. 2. 3. The cytometer! flow as described in 23. El citómetro! de flujo como se describe en la -61 I Ni PI -61 I Ni PI ERsrrrvTo mexicano PE LA tROHEDAD reivindicación 21, que comprende además un cT&^fficaWe^-í^e partícula que aísla cada dicha partícula eh'babe a id—prggerteira- de dicha al menos una característica de partícula en un contenedor de recolección. Mexican ERsrrrvTo PE LA tROHEDAD claim 21, further comprising a cT & ^ fficaWe ^ -í ^ e particle which isolates each said particle eh'babe a id-prggerteira- from said at least one particle characteristic in a collection container. 24. The flow cytometer as described in claim 23, wherein said particle classifier separates sperm cells carrying the X chromosome from those carrying the Y chromosome. 24. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 23, en donde dicho clasificador de partícula separa las células espermáticas que llevan el cromosoma X de las que llevan el cromosoma Y. 25. The flow cytometer as described in claim 1, wherein said flexible wall comprises at least two layers, wherein a first layer has a surface compatible with said amount of gas and a second layer has a surface compatible with said liquid. 25. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 1, en donde dicha pared flexible comprende al menos dos capas, en donde una primera capa tiene una superficie compatible con dicha cantidad de gas y una segunda capa tiene una superficie compatible con dicho líquido. 26. The flow cytometer as described in claim 25, wherein said first layer comprises a material selected from the group consisting of a polypropylene, a polyethylene, a fluorocarbon, a styrene and a polycarbonate. 26. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 25, en donde dicha primera capa comprende un material seleccionado del grupo que consiste de un polipropileno, un polietileno, un fluorocarburo, un estireno y un policarbonato. 27. The flow cytometer as described in claim 25, wherein said second layer comprises a material selected from the group consisting of a polypropylene, a polyethylene, a fluorocarbon, a styrene and a polycarbonate. 27. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 25, en donde dicha segunda capa comprende un material seleccionado del grupo que consiste de un polipropileno, un polietileno, un fluorocarburo, un estireno y un policarbonato. 28. The flow cytometer as described in 28. El citómetro de flujo como se describe en la -62IMPIí ^ c rmrmrro **FORMER* ¿^ G .. -62IMPIí^c rmrmrro **EX*¿^g .. Claim 25, wherein said cantidagl of EfaaND ^ wxe reivindicación 25, en donde dicha cantidagl de EfaaND^wxe ►. ·· * pressure on said outer surface Η p_ H -i z- hn p-,T. said variable volume container is collected between said first layer and said second layer. ►.·· * presión sobre dicha superficie exterior Η p_ H -i z- h n p-,T. de dicho contenedor de volumen variable se recolecta entre dicha primera capa y dicha segunda capa. 29. The flow cytometer as described in claim 25, wherein said first layer and said second layer are joined. 29. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 25, en donde se unen dicha primera capa y dicha segunda capa. 30. The flow cytometer as described in claim 25, wherein said flexible wall further comprises at least one intermediate layer. 30. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 25, en donde dicha pared flexible comprende además al menos una capa intermedia. 31. The flow cytometer as described in claim 30, wherein said at least one intermediate layer comprises a material selected from the group consisting of a polypropylene, a polyethylene, a fluorocarbon, a styrene and a polycarbonate. 31. El citómetro de flujo como se describe en la reivindicación 30, en donde dicha al menos una capa intermedia comprende un material seleccionado del grupo que consiste de un polipropileno, un polietileno, un fluorocarburo, un estireno y un policarbonato. 32. A flow cytometry method, comprising the steps of:32. Un método de citometría de flujo, que comprende las etapas de: a. proporcionar un contenedor de volumen variable que tiene una pared flexible;to. providing a variable volume container that has a flexible wall;b. establecer una cantidad de fluido en dicho contenedor de volumen variable;b. setting a quantity of fluid in said variable volume container;c. ejercer una cantidad de presión con una cantidad de gas en un intervalo de 0.706 kg/cm2 (10 psi) a 14.1kg/cm2 (200 psi) sobre una superficie exterior de dicha c. exert an amount of pressure with an amount of gas in an interval of 0.706 kg / cm2 (10 psi) to 14.1kg / cm2 (200 psi) on an outer surface of said -63 IMPI -63 IMPI INSTTTUTC MEXICANO 'Dt LA ^ tOMEDAD flexible wall of said container of vol | te (in variaBTe;INSTTTUTC MEXICANO ‘ Dt LA^tOMEDAD pared flexible de dicho contenedor de voli|te(en variaBTe;5 flow;5 flujo;and. intermittently transporting a plurality of particles in said fluid stream from a particle source;e. transportar de manera intermitente una pluralidad de partículas en dicha corriente de fluido desde una fuente de partículas;F. generate oscillations in said current of f. generar oscilaciones en dicha corriente de 10 fluid containing said plurality of particles to establish a plurality of drops;10 fluido que contiene dicha pluralidad de partículas para establecer una pluralidad de gotas;g. establecer una de dicha pluralidad de partículas en una de dicha pluralidad de gotas;g. establishing one of said plurality of particles in one of said plurality of drops;h. illuminate said particle in each of h. iluminar dicha partícula en cada una de
  15. 15
    15 dicha pluralidad de gotas por una duración de tiempo;e fifteen said plurality of drops for a duration of time;and i. detectar una emisión proveniente de dicha partícula que varía en base a al menos una característica de partícula. i. detecting an emission from said particle that varies based on at least one particle characteristic. 33. The flow cytometry method as 33. El método de citometría de flujo como se
  16. 16
    20 describe en la reivindicación 32, en donde dicha etapa de proporcionar un contenedor de volumen variable comprende la etapa de proporcionar un cuerpo tubular flexible que tiene un extremo superior y un extremo inferior cada uno formado herméticamente. twenty discloses in claim 32, wherein said step of providing a variable volume container comprises the step of providing a flexible tubular body having an upper end and a lower end each hermetically formed. -6434. The method of claim 32, in generating a fluid stream in a fluidically coupled conduit between said variable volume container and a flow path of a flow cytometer comprises generating a fluid stream from the group consisting of a flowable fluid in the flow path of said flow cytometer, a water, a buffer, a coating fluid, a coating fluid of the flow cytometer, a liquid reagent, cleaning solutions and a solvent. -6434. El método de describe en la reivindicación 32, en generar una corriente de fluido en un conducto fluídicamente acoplado entre dicho contenedor de volumen variable y una trayectoria de flujo de un citómetro de flujo comprende generar una corriente de fluido del grupo que consiste de un fluido fluíble en la trayectoria de flujo de dicho citómetro de flujo, un agua, un amortiguador, un fluido de revestimiento, un fluido de revestimiento del citómetro de flujo, un reactivo líquido, unas soluciones de limpieza y un solvente. 35. The flow cytometry method as described in claim 32, wherein said step of exerting an amount of pressure with an amount of gas on said flexible wall of said variable volume container further comprises selecting said amount of gas from the group consisting of of an atmospheric gas, a mixture of gases, a mixture of gases having selected partial pressures, a purified gas, a nitrogen gas, a helium gas. 35. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 32, en donde dicha etapa de ejercer una cantidad de presión con una cantidad de gas sobre dicha pared flexible de dicho contenedor de volumen variable comprende además seleccionar dicha cantidad de gas del grupo que consiste de un gas atmosférico, una mezcla de gases, una mezcla de gases que tienen presiones parciales seleccionadas, un gas purificado, un gas de nitrógeno, un gas helio. 36. The flow cytometry method as described in claim 32, wherein said step of intermittently transporting a particle in said fluid stream from a particle source comprises intermittently transporting a particle in said fluid stream selected from the group consisting of a 36. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 32, en donde dicha etapa de transportar de manera intermitente una partícula en dicha corriente de fluido a partir de una fuente de partículas comprende transportar intermitentemente una partícula en dicha corriente de fluido seleccionada del grupo que consiste de una -65 IMPIég ^ cell, a sperm cell, a labeled ceiuaiwsTMAfesp ^ nrraTica, a sperm cell He has. or.1:.. ι ^ ιιιρπιτΒτκτΐ.— obtained from a cell, a chromosome, a nucleic acid, a protein, a DNA, an RNA, a fragment of DNA, a fragment of RNA, and a fragment of protein. -65 IMPIég^ célula, una célula espermaticas, una ceiuaiwsTMAfesp^nrraTica etiquetada, una célula espermática Ha. u.1:.. ι^ιιιρπιτΒτκτΐ.— obtenido de una célula, un cromosoma, un ácido nucleico, una proteína, un ADN, un ARN, un fragmento de ADN, un fragmento de ARN y un fragmento de proteína. 37. The flow cytometry method as described in claim 32, further comprising the step of providing a receptacle in which said variable volume container has a location. 37. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 32, que comprende además la etapa de proporcionar un receptáculo en el cual dicho contenedor de volumen variable tiene una ubicación. 38. The flow cytometry method as described in claim 37, wherein said step of exerting an amount of pressure with an amount of gas on said flexible wall of said variable volume container further comprises the step of collecting said amount of gas between an inner surface of said receptacle and said outer surface of said variable volume container. 38. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 37, en donde dicha etapa de ejercer una cantidad de presión con una cantidad de gas sobre dicha pared flexible de dicho contenedor de volumen variable comprende además la etapa de recolectar dicha cantidad de gas entre una superficie interior de dicho receptáculo y dicha superficie exterior de dicho contenedor de volumen variable. 39. The flow cytometry method as described in claim 32, wherein said stage illuminating said particle in each of said plurality of drops for a duration of time comprises the stage of illuminating said 39. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 32, en donde dicha etapa que ilumina dicha partícula en cada una de dicha pluralidad de gotas por una duración de tiempo comprende la etapa de iluminar dicha -66ΙΜΡΙ -66ΙΜΡΙ INSTITUTO MEXICANO MEXICAN INSTITUTE INSTITUTO MEXICANO detect an emission from said particle qqlL vSwS ^ Mfn based on at least one characteristic of pajXí ^ uÍA ™ e © H ^ -ende ---- le · stage of receiving a fluorescent emission that varies based on a difference in amount of DNA inside the cell. INSTITUTO MEXICANO detectar una emisión a partir de dicha partícuíawiqttaL vSwS^Mfn base a al menos una característica de pajXí^uÍA™e©H^-ende----le· etapa de recibir una emisión fluorescente que varía en base a una diferencia en cantidad de ADN dentro de la célula. 5 41. The flow cytometry method as described in claim 40, further comprising the step of analyzing said particle based on said emission that varies based on said at least one particle characteristic. 5 41. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 40, que comprende además la etapa de analizar dicha partícula en base a dicha emisión que varía en base a dicha al menos una característica de partícula. 42. The flow cytometry method as described in claim 41, further comprising the step of separating said particle based on the presence of said at least one particle characteristic. 42. El método de citometría de flujo como se 10 describe en la reivindicación 41, que comprende además la etapa de separar dicha partícula en base a la presencia de dicha al menos una característica de partícula. 43. The flow cytometry method as described in claim 42, wherein said step of 43. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 42, en donde dicha etapa de 15 separar dicha partícula en base a la presencia de dicha al menos una característica de partícula comprende separar las células espermáticas que llevan el cromosoma X de las que llevan el cromosoma Y. fifteen separating said particle based on the presence of said at least one particle characteristic comprises separating the sperm cells that carry the X chromosome from those that carry the Y chromosome. 44. The flow cytometry method as 44. El método de citometría de flujo como se 20 describe en la reivindicación 32, que comprende además la etapa de proporcionar dicha pared flexible con al menos dos capas. twenty describes in claim 32, further comprising the step of providing said flexible wall with at least two layers. 45. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 44, que comprende además la etapa de proporcionar una primera capa compatible con dicha cantidad Four. Five. The flow cytometry method as described in claim 44, further comprising the step of providing a first layer compatible with said amount -67 de gas y proporcionar una segunda fluido. -67 gas and provide a second fluid. cap capa IMPI IMPI INSTITUTO MEXICANO comf£H¡*g^ MEXICAN INSTITUTE comf £ H¡ * g ^ 46. The flow cytometry method as described in claim 45, further comprising the step 46. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 45, que comprende además la etapa 5 of collecting said amount of gas between said first layer and said second layer. 5 de recolectar dicha cantidad de gas entre dicha primera capa y dicha segunda capa. 47. The flow cytometry method as described in claim 45, further comprising the step of attaching said first layer to said second layer. 47. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 45, que comprende además la etapa de unir dicha primera capa a dicha segunda capa. 10 48. The flow cytometry method as described in any of claims 45, 46, or 47, wherein said first layer comprises a material selected from the group consisting of polypropylene, polyethylene, fluorocarbon, styrene, and polycarbonate . 10 48. El método de citometría de flujo como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 45, 46, ó 47, en donde dicha primera capa comprende un material seleccionado del grupo que consiste de polipropileno, un polietileno, un fluorocarburo, un estireno y un policarbonato. 15 49. El método de citometría de flujo como se describe en cualquiera de las reivindicaciones 45, 46, 47 ó 48, en donde dicha segunda capa comprende un material seleccionado del grupo que consiste de polipropileno, un polietileno, un fluorocarburo, un estireno y un policarbonato. fifteen 49. The flow cytometry method as described in any one of claims 45, 46, 47 or 48, wherein said second layer comprises a material selected from the group consisting of polypropylene, a polyethylene, a fluorocarbon, a styrene and a polycarbonate. 20 50. El método de citometría de flujo como se describe en la reivindicación 45, que comprende además proporcionar 5al menos una capa de material intermedio entre dicha primera capa y dicha segunda capa. twenty 50. The flow cytometry method as described in claim 45, further comprising providing 5at least one layer of intermediate material between said first layer and said second layer.
Independent claims16