Nova Patents
EA201300916A1

Commercial scale process for production of prrsv

Abstract

The application describes an effective method for the commercialization of the PRRS virus.

EA201300916A1, drawing sheet 1
Sheet 1 of 8

Term

No projected expiry on record.

  1. Priority
  2. Filed
  3. Published
  4. Today

17 claims: 15 independent, 2 dependent

  1. 1
    ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения в коммерческом масштабе вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней (PRRSV), заключающийся в том, что:5 а) параллельно засевают в биореактор среду для крупномасштабного культивирования линии клеток млекопитающих, пермиссивных к заражению PRRSV, и заражают клетки млекопитающих PRRSV, б) размножают вирус в течение 5-7 дней после заражения;в) осуществляют первую стадию сбора путем удаления среды из 10 биореактора и выделения из нее полученного в результате размножения вируса;г) пополняют среду в биореакторе и размножают вирус в течение 1-4 дней;д) осуществляют вторую стадию сбора путем удаления среды из биореактора и выделения из нее полученного в результате размножения вируса;е) пополняют среду в биореакторе и размножают вирус в течение 1-4 15 дней;и ж) осуществляют третью стадию сбора путем удаления среды из биореактора и выделения из нее полученного в результате размножения вируса.
  2. 2
    Способ по π. 1, дополнительно заключающийся в том, что осуществляют 20 по меньшей мере одну подпитку и стадию сбора после третьей стадии сбора, включающую пополнение среды в указанном биореакторе и размножение вируса в течение 1-4 дней и осуществление четвертой стадии сбора путем удаления среды из биореактора и выделения из нее полученного в результате размножения вируса.
  3. 3
    Способ по π. 1, в котором задают множественность заражения (MOI), составляющую от 0,01 до 0,30, и плотность посева клеток.
  4. 4
    Способ по π. 1, в котором указанные клетки млекопитающих высевают с 8 9 30 плотностью примерно от 7 х 10 до 1,0 х 10 на 300-литровый биореактор.
  5. 5
    Способ по п. 4, в котором указанные клетки высевают с плотностью примерно 1,0 х 10 на 300-литровый биореактор. - 45
  6. 6
    Способ по п. 5, в котором указанная величина MOI составляет примерно
  7. 7
    7 х 10 вирусных частиц. 5 7. Способ по π. 1, заключающийся в том, что осуществляют мониторинг концентрации декстрозы в указанной среде, при этом указанную первую стадию сбора осуществляют в первый день, когда концентрация декстрозы в среде снижается до уровня, более низкого чем 0,1 г/л. 10
  8. 8
    Способ по π. 1, в которой указанный второй сбор осуществляют через 1 или 2 дня после подпитки средой.
  9. 9
    Способ по π. 1, в котором указанный третий сбор осуществляют через 1-4 дня после второй подпитки средой.
  10. 10
    Способ по π. 1, в котором культуральную среду добавляют в биореактор за 1 день до или в тот же самый день, но перед добавлением указанной клеточной линии млекопитающих и указанного вируса PRRS. 20
  11. 11
    Способ по π. 1, в котором культуральную среду добавляют в биореактор за 1 день до добавления указанной клеточной линией млекопитающих и указанного вируса PRRS.
  12. 12
    Способ по π. 1, в котором температуру в указанном биореакторе 25 устанавливают на уровне от 34°С до38°С.
  13. 13
    Способ по π. 1, в котором указанная среда содержит облученную фетальную бычью сыворотку в количестве 5 об.%. 30
  14. 14
    Способ по π. 1, в котором указанный PRRSV выбирают из группы, состоящей из штамма PRRSV 94881, VR 2332, штамма вируса Lelystad (агент Lelystad (CDI-NL-2.91) или других штаммов, таких как депонированные под регистрационными номерами ЕСАСС 04102703, ЕСАСС 04102702, ЕСАСС - 46 04102704, регистрационным номером CNCM 1-1140, регистрационным номером CNCM 1-1387, регистрационным номером CNCM 1-1388, АТСС VR 2332, VR 2385, VR 2386, VR 2429, VR 2474 и VR 2402;CNCM 1-1102, CNCM 1-1140, CNCM 1-1387, CNCM 1-1388 или ЕСАСС V93070108;АТСС-депозит VR-2332, АТСС-депозит VR-2368;АТСС VR-2495;АТСС VR 2385, АТСС VR 2386, АТСС VR 2429, АТСС VR 2474 и АТСС VR 2402.
  15. 15
    Способ получения в коммерческом масштабе PRRSV, заключающийся в том, что:а. параллельно засевают как клетки млекопитающих, пермиссивные к заражению PRRSV, так и PRRSV в биореактор, содержащий среду, пригодную для выращивания клеток;и б. осуществляют три последовательные стадии сбора, во время которых собирают PRRSV, при этом после каждой первой и второй стадиями сбора среду пополняют, и при этом: I. первый сбор осуществляют в первый день, когда концентрация декстрозы в среде снижается до уровня, более низкого чем 0,1 г/л;II. второй сбор осуществляют в день 1 или 2 после добавления среды после первого сбора;и III. третий сбор осуществляют между 1 и 4 днем после добавления среды после второго сбора.
  16. 16
    MLV на основе PRRSV, содержащая PRRSV, который получен согласно способу по одному из п.п. 1-16, изготовленная с приемлемым адъювантом или носителем, которая предназначена для введения свинье.
  17. 17
    Способ получения в коммерческом масштабе вируса репродуктивнореспираторного синдрома свиней (PRRSV), заключающийся в том, что:а) параллельно засевают в роллер-флаконы среду для крупномасштабного культивирования линии клеток млекопитающих, пермиссивных к заражению PRRSV, и заражают клетки млекопитающих PRRSV, б) размножают вирус в течение 5-7 дней после заражения;- 47 в) осуществляют первую стадию сбора путем удаления среды из указанного роллер-флакона и выделения из нее полученного в результате размножения вируса;г) пополняют среду в указанном роллер-флаконе и размножают вирус в 5 течение примерно 2 дней;д) осуществляют вторую стадию сбора путем удаления среды из указанного роллер-флакона и выделения из нее полученного в результате размножения вируса;е) пополняют среду в указанном роллер-флаконе и размножают вирус в 10 течение примерно 2 дней;и ж) осуществляют третью стадию сбора путем удаления среды из указанного роллер-флакона и выделения из нее полученного в результате размножения вируса.
Independent claims17