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BRPI0806779A2

Compositions and methods for diagnosing, treating, and preventing prostate conditions

Abstract

COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DIAGNOSIS, TREATMENT AND PREVENTION OF PROSTATE CONDITIONS. Compositions and methods for the diagnosis, prevention and treatment of prostate cancer and intra-epithelial prostate cancer (PIN) are revealed.

BRPI0806779A2, drawing sheet 1
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41 claims: 36 independent, 5 dependent

  1. 1
    REIVINDICAÇÕES 1. Método para monitoramento de condições da próstata em um indivíduo caracterizado por compreender:a determinação de uma proporção de expressão de gene Paired Box 2-para-gene beta defensina-1 (PAX2-para-DEFBl) em células obtidas a partir da próstata do indivíduo, em que a proporção de expressão de PAX2-para-DEFBl está correlacionada com condições da próstata.
  2. 2
    Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que uma proporção de expressão de PAX 2-para-DEFBl de 100:1 ou maior é indicativa da presença de câncer de próstata no indivíduo, uma proporção de expressão de a PAX 2-para-DEFB 1 de 40:1 ou maior, mas menor que 100:1, é indicativa da presença de neoplasia intra-epitelial da próstata (PIN) no indivíduo, e uma proporção de expressão de PAX2-para-DEFBl de menos que 40:1 é indicativa de próstata normal no indivíduo.
  3. 3
    Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de determinação compreende:determinação do nível de expressão de gene PAX2 em relação ao nível de expressão de um gene de controle;determinação do nível de expressão de gene DEFB1 em relação ao nível de expressão do mesmo gene de controle,· e determinação da proporção de expressão de um PAX 2para-DEFB 1 com base nos níveis de expressão de PAX2 e DEFB1.
  4. 4
    Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que os níveis de expressão de riuaut)779-1 PAX2, DEFB1 e dos genes de controle são determinados por 2/6 RT-PCR quantitativa em tempo real.
  5. 5
    Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o gene de controle é o gene de gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH). 5 6. Método para o diagnóstico de câncer de próstata em um indivíduo caracterizado por compreender:a determinação de uma proporção de expressão de PAX2para-DEFB 1 em células obtidas a partir da próstata do indivíduo, 10 em que a proporção de expressão de PAX 2-para-DEFB 1 de cerca de 100:1 ou maior é indicativa da presença de câncer de próstata no indivíduo. 7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a etapa de determinação 15 compreende: a determinação do nível de expressão de gene PAX2 em relação ao nível de expressão de um gene de controle;a determinação do nível de expressão de gene DEFB1 em relação ao nível de expressão do mesmo gene de controle,· e 20 a determinação da proporção de expressão de PAX 2para-DEFB 1 com base nos níveis de expressão de PAX2 e DEFB1. 8. Método para o diagnóstico de neoplasia intraepitelial da próstata (PIN) em um indivíduo caracterizado 25 por compreender: a determinação de uma proporção de expressão de PAX 2para-DEFB 1 em células obtidas a partir da próstata do indivíduo, em que a proporção de expressão de PAX 2-para-DEFB 1 30 na faixa de cerca de 40:1 a cerca de 100:1 é indicativa da 2/6 presença de PIN no indivíduo. 9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a etapa de determinação compreende: a determinação do nível de expressão de gene PAX2 em relação ao nível de expressão de um gene de controle;a determinação do nível de expressão de gene DEFB1 em relação ao nível de expressão do mesmo gene de controle;e a determinação da proporção de expressão de a PAX 2para-DEFB 1 com base nos níveis de expressão de PAX2 e DEFB 1. 10. Método para a prevenção ou tratamento de câncer de próstata em um indivíduo, caracterizado por compreender: a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz 15 de uma composição que compreende um inibidor da expressão de gene PAX 2 ou atividade de PAX2. 11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é diagnosticado com neoplasia intra-epitelial da próstata (PIN). 20 12. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de angiotensina II ou enzima de conversão de angiotensina (ACE). 13. Método, de acordo com a reivindicação 10, 25 caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de receptor tipo 1 de angiotensina II (AT1R). 14. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de quinase regulada por sinal extracelular/ 30 proteína ativada por mitógeno (MEK). i 4/6 15. Método, de acordo com a . reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de quinases reguladas por sinal extracelular (ERK)l e/ou ERK2. 5 16. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de transdutor de sinal e ativador de transcrição 3 (STAT 3). 17. Método, de acordo com a reivindicação 10, 10 caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista seletivo de PAX2. 18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o antagonista seletivo de PAX2 bloqueia a ligação de PAX 2 ao promotor de beta 15 defensina-1 (DEFB1). 19. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o antagonista seletivo de PAX2 compreende um siRNA. 20. Método, de acordo com a reivindicação 17, 20 caracterizado pelo fato de que o antagonista seletivo de PAX2 compreende um RNA antisenso. 21. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o antagonista seletivo de PAX2 compreende um polinucleotídeo que codifica um siRNA ou 25 um RNA antisenso. 22. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o antagonista seletivo de PAX2 compreende um anticorpo anti-PAX2. 23. Método, de acordo com a reivindicação 10, 3 0 caracterizado pelo fato de que o inibidor é um antagonista 5/6 seletivo de PAX2. 24. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é diagnosticado com câncer de próstata. 5 25. Método para a prevenção ou tratamento de câncer de próstata em um indivíduo caracterizado por compreender: a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um agente que aumenta o nível de expressão de gene DEFB1 ou de atividade de DEFB 1. polinucleotídeo que codifica e é capaz de expressar DEFB 1. 15 28. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o agente compreende um inibidor de PAX2 que se liga ao promotor de DEFB 1. . 29. Método para a prevenção ou tratamento de neoplasia intra-epitelial da próstata (PIN) em um indivíduo, 20 caracterizado por compreender: caracterizado pelo fato de que o inibidor é selecionado do 25 grupo que consiste em antagonistas seletivos de angiotensina II ou enzima de conversão de angiotensina (ACE), antagonistas seletivos de receptor tipo 1 de angiotensina II (AT1R) , antagonistas seletivos de MEK, antagonistas seletivos de ERK1 e de ERK1 2, antagonistas 30 seletivos de STAT 3, antagonistas seletivos de PAX, e
  6. 6
    6/6 inibidores que bloqueiam a ligação de DEFB1 ao promotor de PAX 2. 31. Método para a prevenção ou tratamento de neoplasia intra-epitelial da próstata (PIN) em um indivíduo 5 caracterizado por compreender:a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende um agente que aumenta o nível de expressão do gene DEFB 1 ou atividade de DEFB 1. 32. Método, de acordo com a reivindicação 29, 10 caracterizado pelo fato de que o agente é selecionado do grupo que consiste em DEFB 1, polinucleotídeos que codificam e são capazes de expressar DEFB 1, e inibidores da ligação de PAX2 ao promotor de DEFB1. 1/41 1255 1477 1616 1215 1343 Número de Pacientes (grosseiramente dissecados) FIG IA Kl > d P Iti r~1 ai oi o 'rt (0 w ai P & W Φ Ό ai > ή mo Média de 1215 T hPrEC PC3 PC3 DUI45 DUI45 LNCaP LNCaP FIG 1B 2/41 r· FIG 1C Comparação da Expressão de DEFBl em Paciente #1457 à Expressão Média em Tecido Benigno o n vi í? W 2.5 § 1-5 «nJ 1 O M ft 0-5 o n Λ 0 Normal lumor Região do Tecido FIG ID 3/41 DU145 PC3 LNCaP FIG 2 Viabilidade Relativa Percentual 24 horas 48 horas 72 horas Tempo de Indução FIG 3 4/41 '·χ.· ·· 5% 3% d> Ό o +> 0) Ό o H m ao m o d Ό 10° 10 1 10 2 10 3 10 4 Anexina FITC «r| Λ O M h n O p* O O 10° 10 1 10 2 10 3 10 4 W Cu Controle 32% 10° 10 1 10 2 10 3 10 4 Anexina FITC Anexina FITC 12 horas Φ o O +> Φ Ό O H m co m o •d 'd Ui O o 36% 23% 10° 10 1 10 2 10 3 1 0 4 Anexina FITC FIG4A 5/41 Iodeto de Iodeto de Propídio {585 nm) Propídio {585 nm) 10° 10 1 10 a 103 10 4 10° 10 1 10* 10 3 10 4 24 horas 3% 3% 10° 10 1 10 a 10 3 10 4 Anexina FITC Controle 48 horas 10° 10 1 10 a 10 3 10 4 Anexina FITC 12 horas 10° 1'0 1 10 a 10 3 10 4 Anexina FITC 24 horas < 1 Ιί’Λ . .. . :·> 38% 8% 10° 10 1 10 a 10 3 10 4 Anexina FITC 48 horas FIG 4B 6/41 24 horas Controle DIC Fluorescência FIG 5A-D
  7. 7
    7/41 24 horas Controle DIC Fluore scêricia FIG 5IL H
  8. 8
    8/41 24 horas Controle FIG 5I-L
  9. 9
    9/41 DUI45 PC3 Dia Ο 2° Dia 4° Dia 6° Dia Dia O 2° Dia 4° Dia 6° Dia I i lr í PAX2 β-actina FIG 7
  10. 10
    10/41 100 2 Dias 4 Dias 6 Dias Tempo de Tratamento FIG 8 Controle Tratado ' Fluorescência DIC Fluorescência FIG 9
  11. 11
    11/41 Expressão Relativa (Proporção Expressão Relativa (Proporção BID/GAPDH) BAX/GAPDH) DU145 PC3 LnCaP B Controle B Tratado Linhagem de Células FIG 10A B Controle B Tratado Linhagem de Células FIG 10B
  12. 12
    12/41 Expressão Relativa (Proporção BAD /GAPDH) controle ®Tratado FIG 10C
  13. 13
    13/41 Inibição por siRNA de Proteína PAX2 FIG 11
  14. 14
    14/41 FIG 12
  15. 15
    15/41 HPrEC LnCAP PC3 DU145 Linhagens de Células FIG 13 FIG 14
  16. 16
    16/41 Ln 1 Ln 2 Ln 3 Ln 4 Ln 5 Ln 6 Ln 7 Ln 8 Ln 9 FIG 15
  17. 17
    17/41 domínio pareado Homeodomínio •Homeodomínio (HD) sítio de ligação de PAI ^sítio de ligação HD TCAAGCGTGACTAÂTTG (ID. de SEQ No:47) FIG 16
  18. 18
    18/41 Ν Ν TNG C A Ν A Τ C Τ Τ C G C G 1 1 4 Τ τ τ τ τ τ τ G C A C G C c a c σ c Α I C A C G C G 6 7 8 9 10 Τ G A G G Τ G Α Α G Τ G I G G Α Τ Τ Ν Τ C I τ τ 11 13 G Α C Α I Α Α C G Α C I Ν Α G Α C G 13 14 1$ Pax 8 Pax 2 (20) Pax 5 Cie) Pax 1 (β) Pax 6 (20) Pax 3 (28) Prd O) FIG17
  19. 19
    19/41 Neoplasia de Displasia Intraepitelial (IEN) Fci ve Moderada Severa Normal Iniciada Ctô:Câncer Cólon —£33· Cabeça e Pescoço — I Janela Ótima para 1 Quimioprevenção -► ADENOMA -rrAç—— anos } 5-15 anos 1 i TOBACCO use LEUCOPLAQUIA ORAL j_ 4*10 anos DISPLÁSICA Esôfago de BARRETCérvix ciN 1 Pulmão ........ Pulmão (Fumantes) Pele (Não me 1 anoma) est. 9-13anos ~£2F anos ? 6-Θ anos $ ►J DISPLASIA SEVERA-> C1N3/CIS 10-20 anos -► 30-40 anos ! ' ./>. Mama HIPERPLASIA ATÍPICA
  20. 20
    20-40 maços-anos CERATOSE ACTÍNICAanos 6-10 ano s Próstata Bexiga -► PIN 20?anòs FIG 18 CÂNCER -► -smLATENTE 3-15 anos —> tis * anos PAX2 β-actina FIG 19 20/41 Expressão Relativa de PAX2 || t Expressão Relativa de PAX2 FIG 20A FIG 20B
  21. 21
    21/41 FIG 21 FIG 22
  22. 22
    22/41 C 30 min 4 hr 24 hr 48 hrs β-actina FIG 23A Controle Los Angll PD9850 U0126 AICAR PAX2 FIG 23B controle Los U0126 PD9850 AICAR Fosfo~STAT3 β-actina FIG 23C
  23. 23
    23/41 controle Lo S U0126 PD9850 AICAR Fosf o -PAX2 β-actina FIG 24A Angll Angll 5uM lOuM Controle U0126 LOS Fosfo-JNK β-actina FIG 24B
  24. 24
    24/41 1.2 Expressão Relativa hPREC hPrEC + hPrEC + PC3 Não tratada ATII72 hrs ATI! 96 hrs Não tratada Condição FIG 25
  25. 25
    25/41 FIG
  26. 26
    26 EFB1 Re-expressão celular) FIG 27 Angiotensina H I osartan l ATIR Membrana Celular EFB1 Re-expressão Formação de Poro (morte celular) FIG 27
  27. 27
    27/41 {Proporção hBD-l/Actina) II88 1255 1343 1477 1516 Número de Pacientes 1215 FIG 28
  28. 28
    28/41 DEFB1 1569 Normal 0.6 _ 1569 PIN | 1569 J Tumor Gleason 7 Expressão Relativa 0.5 0.4 0.3 0.2 <0.1 ! 1457 1457 PIN 1457 1569 Normal Tumor Normal FIG 29
  29. 29
    29/41 FIG 30
  30. 30
    30/41 Nível de Expressão Nível de Expressão (Proporção hBD-1/Actina) (Proporção hBD-l/Actina) 0.1 1188 1215 1343 1477 1516 Número de Pacientes FIG 31A Número de Pacientes FIG 31B
  31. 31
    31/41 Relativa FIG 32A
  32. 32
    32/41 c. d. FIG 32B
  33. 33
    33/41 Viabilidade Percentual LNCaP SDU145 EJPC3 □ PC3/AR+ Tempo de Indução FIG 33
  34. 34
    34/41 FIG 34A FIG 34B
  35. 35
    35/41 Nível de Expressão (hBD-l/Actina) 0.1 0.01 hPrEC LNCaP PC3 DU145 Linhagem, de Células FIG 35
  36. 36
    36/41 IIPrEC DU145 PC3 L\C:il> β··';ac tina FIG 36A DU145 Dia 0 Dia 2 Dia 4 Dia 6 mr··! i n> i PAX2 .β?· ac tina LNCaP PC3 PAX2 β-;ac tina PAX2 β-;ac tina FIG 36B
  37. 37
    37/41 siRNA de Controle siRNa de PAX2 T-y ' ' </ s. t. -w LNCaP 1 *àí >'»}- \>í « FIG 37 . J©/ '·&
  38. 38
    38/41 Viabilidde Percentual Relativa DU145 IBPC3 a LnCAP FIG 38
  39. 39
    39/41 LNCaP PÜ145 PC3 Não Tratado Tratado Pi L/ FIG 39
  40. 40
    40/41 Ε w ~ LnCap DU145 PC3 Linhagem, de Células FIG40A LnCap DU145 PC3 Linhagens de Células FIG 40B
  41. 41
    41/41 são Relativa rção akt /GAPDH) LnCaP DU145 PC3 Linhagens de Células FIG40C - j. 1/1 ι L
Independent claims41